【摘要】：近年來利用干細胞進行牙齒再生研究已經(jīng)成為組織工程研究領(lǐng)域的熱點,其中干細胞的誘導(dǎo)分化成為研究的重點問題。牙齒發(fā)育過程涉及諸多基因的調(diào)控,許多的分子生物學(xué)機制尚不清楚。因此,進一步明確牙齒發(fā)生的分子調(diào)控機制,通過分析牙齒形態(tài)發(fā)生關(guān)鍵基因,同時結(jié)合已知的研究成果,對于進一步誘導(dǎo)成體干細胞向成釉細胞分化,使其成為具有再生牙齒功能的細胞,將有重要的指導(dǎo)意義。 目前,人類對胚胎發(fā)育時期的牙齒形態(tài)發(fā)生過程有了深入的了解,已有研究證明了人類牙齒發(fā)育各時期與胚胎發(fā)育各時期的比對關(guān)系,但是關(guān)于早期牙齒發(fā)育分化的時間卻大相徑庭。本課題利用組織形態(tài)學(xué)方法觀察了在胚胎發(fā)育各時期上下頜各個牙齒的形態(tài)變化,同時通過免疫組織化學(xué)的方法,系統(tǒng)地檢測了人胚胎發(fā)育各對應(yīng)時期上下頜各個牙齒的發(fā)育分化標志物的表達。研究結(jié)果得出了一個精確的人類齒列的發(fā)育分化時間表,為現(xiàn)今教科書上關(guān)于牙齒發(fā)育分化時間的不統(tǒng)一提供了確切的理論依據(jù),對教科書關(guān)于牙齒發(fā)育分化時間的編著有十分重要的意義,同時能夠為未來人類牙齒發(fā)育研究提供理論基礎(chǔ)。 本研究參考分離純化角朊細胞的方法,利用Dispase Ⅱ酶和TE酶兩步法分離出牙胚上皮細胞,并建立牙上皮細胞培養(yǎng)體系對其進行傳代培養(yǎng),培養(yǎng)10天左右可傳代一次,目前可傳至第三代。應(yīng)用免疫組化方法鑒定出所培養(yǎng)牙上皮細胞的上皮源性及胚胎源性,同時表明所分離的牙胚上皮原代細胞能夠在體外繼續(xù)表達組織特異性相關(guān)蛋白,該細胞可作為進一步研究牙齒發(fā)育機制的種子細胞。 同時,本研究還探討了人牙胚上皮細胞在體外誘導(dǎo)條件下的成牙潛能。利用嵌合體重組技術(shù)將人牙胚上皮細胞與小鼠E13.5磨牙牙胚間充質(zhì)重組,移植腎囊膜下培養(yǎng)30天,結(jié)果可見嵌合體組織中具有完整牙齒的結(jié)構(gòu),包括明顯拉長的成釉細胞層、牙本質(zhì)、牙釉質(zhì)、成牙本質(zhì)細胞、牙髓復(fù)合體等。但是,也有部分嵌合體并未成牙,而是出現(xiàn)大量骨松質(zhì)結(jié)構(gòu)及囊性細胞團結(jié)構(gòu)。研究發(fā)現(xiàn),牙胚上皮細胞的成牙能力隨著傳代數(shù)的增加而降低。其中P1代細胞重組體的成牙率接近70%,P2代細胞重組體的成牙率為32%,P3代細胞重組體僅為10%。通過免疫組化和PCR進一步分析其原因,結(jié)果表明FGF8、PITX2等基因的表達隨著傳代次數(shù)的增多而減弱,這些基因在牙上皮細胞向成釉細胞分化中可能起到關(guān)鍵的作用。
【學(xué)位授予單位】：福建師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R783

【共引文獻】

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本文編號：2602874