【摘要】：究目的:口腔鱗狀細(xì)胞癌是頭頸部發(fā)病率最高的惡性腫瘤,由于其發(fā)病機(jī)制目前為止尚未完全闡明,治療方式主要以手術(shù)治療和化療為主,其五年生存率不超過(guò)50%。姜黃素是從姜黃中提取的一種天然化合物,廣泛應(yīng)用于肺部炎癥、惡性腫瘤等疾病的治療。研究表明姜黃素可以通過(guò)多種途徑抑制腫瘤的增殖、血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移,進(jìn)而干預(yù)腫瘤的發(fā)生發(fā)展,但姜黃素對(duì)抗腫瘤的具體機(jī)制尚未完全闡明。過(guò)氧化物酶6(Peroxiredoxin 6,Prdx6)是過(guò)氧化物酶家族中的成員之一,具有過(guò)氧化物酶和磷脂酶A_2的雙重活性。臨床研究表明Prdx6在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中高度表達(dá),提示Prdx6可能在口腔鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本課題探究姜黃素對(duì)Prdx6調(diào)控在口腔鱗狀細(xì)胞癌增殖中的作用,為進(jìn)一步闡明姜黃素對(duì)抗腫瘤以及防治口腔鱗狀細(xì)胞癌,提供新的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。研究方法:以CAL27細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,選用不同濃度的姜黃素(0、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)、Prdx6 siRNA和Prdx6磷脂酶A_2活性抑制劑MJ33進(jìn)行干預(yù)。MTS法檢測(cè)細(xì)胞活性,細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆增殖能力,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率,DCFH-DA探針檢測(cè)活性氧水平,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Prdx6 mRNA表達(dá)的變化,Western blot檢測(cè)Prdx6蛋白表達(dá)的變化。研究結(jié)果:1、不同濃度的姜黃素(0、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)處理CAL27細(xì)胞24h、48h、72h后,其細(xì)胞活性明顯被抑制并呈劑量依賴性;40μmol/L的姜黃素作用CAL27細(xì)胞10d后,細(xì)胞克隆形成數(shù)目及大小均被明顯抑制;40μmol/L的姜黃素作用CAL27細(xì)胞48h后,細(xì)胞凋亡率顯著增加;不同濃度的姜黃素(0、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)處理CAL27細(xì)胞6h后,隨著濃度的增加CAL27細(xì)胞ROS水平逐漸升高。2、不同濃度的MJ33(0、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L)處理CAL27細(xì)胞24h、48h、72h和10d后,濃度為40μmol/L的MJ33可以明顯抑制細(xì)胞活性;隨著濃度的增加,細(xì)胞克隆形成數(shù)目及大小均受到明顯的抑制;不同濃度的MJ33(0、40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L)處理CAL27細(xì)胞6h和24h后,隨著濃度的增加,細(xì)胞的ROS水平顯著升高,細(xì)胞的凋亡率顯著增加。3、熒光顯微鏡結(jié)果顯示Prdx6 siRNA轉(zhuǎn)染效率約80%;實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot結(jié)果顯示,Prdx6 siRNA轉(zhuǎn)染CAL27細(xì)胞36h和48h后,與陰性對(duì)照組相比,在mRNA水平上,Prdx6在CAL27細(xì)胞的表達(dá)量下降約70%;在蛋白水平上,Prdx6在CAL27細(xì)胞的表達(dá)量下降約50%。4、Prdx6 siRNA轉(zhuǎn)染CAL27細(xì)胞48h后,與陰性對(duì)照組相比,CAL27細(xì)胞細(xì)胞活性顯著被抑制,ROS水平顯著升高;而Prdx6 siRNA轉(zhuǎn)染CAL27細(xì)胞10d后,與陰性對(duì)照組相比,細(xì)胞克隆形成數(shù)目及大小均顯著被抑制。5、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot結(jié)果顯示,40μmol/L姜黃素作用于CAL27細(xì)胞6h和24h后,Prdx6的mRNA和蛋白表達(dá)顯著降低。研究結(jié)論:姜黃素通過(guò)下調(diào)Prdx6的表達(dá)進(jìn)一步升高ROS的水平促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌的凋亡進(jìn)而抑制其增殖。
【圖文】：

第 3 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果第 3 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 不同濃度的姜黃素對(duì) CAL27 細(xì)胞活性的影響CAL27 細(xì)胞經(jīng)過(guò)不同濃度姜黃素（0、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L）處理 24h、48h、72h 后，MTS 結(jié)果顯示姜黃素能夠顯著降低 CAL27 細(xì)胞的存活率，其抑制作用隨著姜黃素濃度的增加而增加呈劑量依賴性。同樣，當(dāng)姜黃素濃度為 40μmol/L 處理不同時(shí)間（24h、48h、72h），CAL27細(xì)胞的存活率隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而降低。上述結(jié)果顯示，姜黃素在體外能夠顯著抑制 CAL27 細(xì)胞活性，并呈劑量依賴性。

第 3 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果間（24h、48h、72h）對(duì) CAL27 細(xì)胞活性的影響。每次實(shí)驗(yàn) 3 個(gè)復(fù)孔，每組實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù) 次，*，，P<0.05；***，P<0.001。3.2 姜黃素對(duì) CAL27 細(xì)胞增殖的影響細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示如圖 3.2，與對(duì)照組相比較，濃度為 40μmol/L 的姜黃素處理 10d 后，CAL27 細(xì)胞的克隆能力明顯下降、克隆數(shù)目顯著減少。同在顯微鏡下觀察可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的增殖能力明顯減弱。Control Curcumin 40μmol/L
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.8

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本文編號(hào)：2601691