【摘要】：齲病是由含糖飲食、致齲細(xì)菌和易感宿主在時(shí)間的催化作用下導(dǎo)致牙體組織被破壞而機(jī)體不可自然修復(fù)的一種慢性感染疾病。變異鏈球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)作為典型的口腔主要致齲細(xì)菌,能黏附在牙齒表面,代謝蔗糖產(chǎn)酸破壞牙釉質(zhì),并與其他細(xì)菌共聚粘附在牙齒表面形成牙菌斑生物膜。抑制S.mutans以其生物膜的形成能夠有效預(yù)防齲齒。本研究通過(guò)體外篩選對(duì)S.mutans及其生物膜形成具有抑制作用的乳酸菌,考察目的菌株對(duì)S.mutans生物膜形成的具體影響、在口腔中的益生特性及安全性,并在大鼠齲齒模型中驗(yàn)證其防齲效果,為益生菌防治齲病提供前期理論基礎(chǔ)和依據(jù)。論文的主要研究?jī)?nèi)容包括:(1)抑制S.mutans生長(zhǎng)及其生物膜形成乳酸菌的分離篩選從健康人及齲病病人的唾液、牙菌斑和口腔粘膜、健康人糞便以及新鮮蔬菜葉等樣品中分離出93株乳酸菌,通過(guò)牛津杯瓊脂擴(kuò)散法考察這些菌株對(duì)S.mutans的抑菌性,選擇抑菌圈直徑大于15 mm的12株菌,研究它們與S.mutans共培養(yǎng)24 h對(duì)S.mutans生物膜形成的影響,發(fā)現(xiàn)為部分乳酸菌促進(jìn)S.mutans的生物膜形成,部分則抑制。(2)乳酸菌相關(guān)菌體性質(zhì)的測(cè)定測(cè)定12株菌的自聚和共聚能力、自身生物膜形成能力、表面疏水性和表面酸堿電荷,通過(guò)主成分分析法(Principal Component Analysis,PCA)分析得到一株綜合性質(zhì)良好的菌株FB-T9。該菌株可使S.mutans生物膜形成量減少60.33%,而且其自身生物膜形成能力弱(OD600=0.295),2 h和4 h的自聚力分別為28.52%和35.09%,與S.mutans的共聚力分別為8.69%和15.26%,表面疏水性、表面酸電荷和表面堿電荷分別為52.98%、34.52%和20.32%,經(jīng)16S r DNA鑒定菌株FB-T9為植物乳桿菌。(3)植物乳桿菌FB-T9不同時(shí)期介導(dǎo)對(duì)S.mutans生物膜形成的影響考察在不同時(shí)期L.plantarum FB-T9介導(dǎo)對(duì)S.mutans生物膜形成的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)L.plantarum FB-T9在S.mutans生物膜形成的初期(12 h)、中期(24 h)和成熟后期(48h)分別進(jìn)行介導(dǎo),可將S.mutans的生物膜形成量分別降低44.41%、40.43%和23.84%;L.plantarum FB-T9在S.mutans生物膜形成前期的介導(dǎo)效果最佳,能顯著抑制S.mutans前期的粘附和定植;L.plantarum FB-T9不同時(shí)期的介導(dǎo)將S.mutans生物膜中的菌體總面積分別降低了66.83%、50.24%和19.57%,生物膜活性分別降低了36.96%、53.69%和60.96%。因此FB-T9越早介導(dǎo),越有利于抑制S.mutans生物膜的形成。(4)植物乳桿菌FB-T9的口腔應(yīng)用特性的測(cè)定為考察L.plantarum FB-T9在口腔中的應(yīng)用特性,體外測(cè)定了L.plantarum FB-T9對(duì)唾液包裹的羥磷灰石的黏附率,發(fā)現(xiàn)其對(duì)牙面的黏附率(32.93%)顯著低于S.mutans69.13%的黏附率,說(shuō)明它對(duì)牙面的酸蝕風(fēng)險(xiǎn)較低。研究結(jié)果顯示L.plantarum FB-T9對(duì)溶菌酶的最高耐受濃度為1.2 mg/mL,遠(yuǎn)高出人口腔唾液中溶菌酶的濃度(0~57μg/mL),表明該菌株具備在口腔環(huán)境中良好存活的能力。(5)植物乳桿菌FB-T9預(yù)防大鼠齲齒效果的評(píng)價(jià)利用大鼠齲齒模型進(jìn)一步驗(yàn)證L.plantarum FB-T9的防齲特性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中選擇洗必泰(醋酸氯己定溶液)作為陽(yáng)性藥物對(duì)照,選擇篩菌過(guò)程中對(duì)S.mutans生物膜形成表現(xiàn)為促進(jìn)作用的另外一株L.plantarum 5D-3作為陰性對(duì)照。在實(shí)驗(yàn)的前5天連續(xù)每天對(duì)大鼠牙齒擦拭0.2 mL 1×108 CFU/m L濃度的S.mutans菌懸液感染大鼠口腔,建立口腔齲齒模型。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的早期、中期和晚期對(duì)大鼠口腔中的總菌群水平計(jì)數(shù),發(fā)現(xiàn)大鼠口腔總細(xì)菌數(shù)維持在2~10×105 CFU/m L的范圍,說(shuō)明實(shí)驗(yàn)過(guò)程中大鼠口腔總菌群數(shù)量相對(duì)穩(wěn)定。干預(yù)組中L.plantarum FB-T9可將大鼠口腔中的S.mutans水平顯著降低兩個(gè)數(shù)量級(jí),而預(yù)防組中L.plantarum FB-T9的早期定植能抑制S.mutans的水平在4×103CFU/mL左右的范圍,且L.plantarum FB-T9在口腔中的保留能力顯著高于L.plantarum5D-3(P0.05);對(duì)大鼠齲齒打分結(jié)果分析可知植物乳桿菌L.plantarum FB-T9相對(duì)于空白對(duì)照組,能減少大鼠磨牙釉質(zhì)齲(E)和牙本質(zhì)淺齲(Ds)的發(fā)生(P0.05),并對(duì)牙本質(zhì)中齲(Dm)起到一定的緩解,在治療和預(yù)防齲齒上的作用效果強(qiáng)于L.plantarum5D-3。綜上研究結(jié)果,從健康人糞便中分離得到的L.plantarum FB-T9具有防治齲病的相關(guān)特性,可以作為防治口腔齲病的潛在益生菌。
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【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R781.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2464970