【摘要】：目的:1.體外分離培養(yǎng)人牙齦成纖維細胞(human gingival fibroblasts,HGFs),檢測骨向誘導的HGFs在健康根片和牙周病根片上的附著、細胞活性以及成骨分化能力,觀察骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)聯(lián)合地塞米松(dexamethasone,DEX)對其的作用情況。2.將成骨誘導后的HGFs與Bio-Oss骨粉復合,觀察其對裸鼠顱骨缺損的成骨修復效果,以及BMP-2聯(lián)合DEX的作用。3.制作成骨誘導后HGFs細胞膜片,將其植入到裸鼠顱骨缺損處,觀察其對顱骨缺損的成骨修復效果,以及BMP-2聯(lián)合DEX的作用,為HGFs以及細胞因子在牙周組織再生的應用提供實驗證據(jù)。方法:1.制備約4 mm×4 mm×1 mm大小的健康和病變牙根片,采用組織塊法培養(yǎng)牙齦成纖維細胞,培養(yǎng)到第三代后用于后續(xù)實驗。實驗分為三組,分別是成骨誘導A組,成骨誘導B組,無誘導N組(對照組)。A組:骨誘導培養(yǎng)基(達爾伯克氏必需基本培養(yǎng)基(dulbecco's minimum essential medium,DMEM)、3%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、5 mg/L抗壞血酸、10-3 mol/Lβ-甘油磷酸鈉以及2×10-3 mol/L L-谷氨酰胺),10-8 mol/L DEX和50 ng/mL BMP-2;B組:骨誘導培養(yǎng)基;N組:DMEM和3%FBS。將HGFs接種到健康、病變根片上,于實驗設計的時間點用血細胞計數(shù)板計數(shù)根片上附著的細胞數(shù),四甲基偶氮唑鹽(3-4,5-dimethylthiazol-2-yl-5-3-carboxymethoxyphenyl-2-4-sulfophenyl-2H-tetrazo lium,inner salt,MTS)比色法檢測根面上細胞活性,掃描電鏡檢測細胞在根片上附著情況,對硝基苯基磷酸二鈉(p-nitrophenol phosphate,PNPP)法定量和堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色檢測各組細胞堿性磷酸酶活性,茜素紅染色檢測各組細胞鈣結(jié)節(jié)形成。2.構(gòu)建裸鼠顱骨缺損模型,將三組細胞與Bio-Oss骨粉復合,分別植入到裸鼠顱骨缺損模型中,6周后取材進行HE染色,檢測各組復合物的顱骨缺損修復情況。3.構(gòu)建三組HGFs細胞膜片,植入到裸鼠顱骨缺損處,6周后取材進行HE染色,檢測各組膜片的顱骨缺損修復情況。結(jié)果:1.培養(yǎng)至1、3、5、7天,BMP-2聯(lián)合DEX誘導的HGFs在根片上細胞數(shù)量明顯多于普通誘導組和對照組(P0.05),健康根片上附著的細胞數(shù)量明顯多于病變根片上的細胞(P0.05)。2.培養(yǎng)至3、5、7天,BMP-2聯(lián)合DEX誘導的HGFs在根片上細胞活性明顯高于普通誘導組和對照組(P0.05),健康根片上附著的細胞活性明顯高于病變根片上的細胞(P0.05)。3.掃描電鏡結(jié)果顯示:培養(yǎng)至3、7天,BMP-2聯(lián)合DEX誘導的HGFs附著在根片上細胞數(shù)量明顯多于普通誘導組和對照組,健康根片上附著的細胞數(shù)量明顯多于病變根片上的細胞。4.PNPP結(jié)果:培養(yǎng)至1、3、5、7天:BMP-2聯(lián)合DEX誘導的HGFs在根片上ALP活性明顯高于普通誘導組和對照組(P0.05),健康根片上附著的細胞ALP活性明顯強于病變根片組(P0.05)。培養(yǎng)7天時ALP染色顯示BMP-2聯(lián)合DEX誘導組藍紫色沉淀最明顯,培養(yǎng)21天時茜素紅染色顯示BMP-2聯(lián)合DEX誘導組紅色沉淀最明顯。5.細胞+Bio-oss體內(nèi)實驗中HE染色結(jié)果顯示:A組及B組顱骨缺損處可見大量的條索狀、網(wǎng)狀基質(zhì)形成。而C組缺損處僅見少量基質(zhì)形成。計量學結(jié)果:成骨誘導組基質(zhì)面積比明顯大于無成骨誘導組,且A組基質(zhì)面積比大于B組(P0.05)。6.三組細胞膜片經(jīng)21天左右成型。HE染色結(jié)果顯示成骨誘導細胞膜片組缺損邊緣可見大量條索狀、網(wǎng)狀基質(zhì)形成。而非誘導細胞膜片組缺損處僅見少量基質(zhì)形成。計量學結(jié)果:成骨誘導組基質(zhì)面積比明顯大于無成骨誘導組,且A組基質(zhì)面積比大于B組(P0.05)。結(jié)論:1.牙周病變根片影響HGFs的附著、細胞活性以及成骨分化。2.骨誘導的HGFs能在根面上粘附以及成骨分化。3.無論在健康根片還是病變根片上,BMP-2聯(lián)合DEX可明顯促進HGFs在根面上的附著、細胞活性以及成骨分化。4.HGFs骨誘導后,特別是BMP-2聯(lián)合DEX誘導,會促進顱骨缺損區(qū)基質(zhì)形成,為進一步成骨提供必要條件。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R781.4

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 Wen-Chen Ji;Xiao-Wei Zhang;Yu-Sheng Qiu;;Selected suitable seed cell, scaffold and growth factor could maximize the repair effect using tissue engineering method in spinal cord injury[J];World Journal of Experimental Medicine;2016年03期

2 馮馨儀;喻麗;溫玉潔;葛頌;;牙周膜來源細胞膜片在牙周再生中的應用研究進展[J];口腔生物醫(yī)學;2016年02期

3 麥麥提依明·哈力克;帕拉提·吐爾遜;木合塔爾·霍加;;細胞膜片技術在牙周組織再生中應用現(xiàn)狀及進展[J];中華實用診斷與治療雜志;2016年05期

4 周術奎;張楷樂;王營;傅強;;細胞膜片技術在組織工程中的應用與研究進展[J];中國組織工程研究;2016年11期

5 付冬梅;王拓;陳紅亮;孫勇;;不同生長因子在骨再生修復中的作用研究進展[J];西南國防醫(yī)藥;2016年02期

6 蔣少云;陶玉飛;李陽;宋立婷;朱東望;鄧嘉胤;;體外誘導人牙齦成纖維細胞多向分化潛能的實驗研究[J];天津醫(yī)藥;2015年07期

7 陶玉飛;蔣少云;嚴志敏;甄珍;鄧嘉胤;;骨形態(tài)發(fā)生蛋白2聯(lián)合地塞米松對人牙齦成纖維細胞增殖及成骨分化的影響[J];中國組織工程研究;2014年51期

8 黃子賢;梁敏;;BMP-2對牙周膜干細胞的增殖、分化、遷移的影響[J];牙體牙髓牙周病學雜志;2014年09期

9 路博聞;徐璐璐;張洋;韓光;;牙周組織工程研究進展:問題與應用[J];中國組織工程研究;2014年24期

10 谷子芽;翟強;呂秋峰;彭燦星;劉芳菲;彭暉;;地塞米松誘導牙周膜干細胞的定向成骨分化及凋亡[J];中國組織工程研究;2013年40期

，

本文編號：2303967