本文關(guān)鍵詞：機械牽張應(yīng)力影響人牙周膜干細胞TAZ表達的實驗研究　出處：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的明確機械張應(yīng)力對人牙周膜干細胞生物學(xué)特性的影響及張應(yīng)力作用下TAZ的表達變化。方法1.人牙周膜干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定將原代培養(yǎng)的牙周膜細胞制備單細胞懸液有限稀釋原克隆化培養(yǎng),分離得到PDLSCs,傳代后的第3代PDLSC用于本實驗研究,免疫熒光檢測細胞表面分子STRO-1、CD146,流式細胞術(shù)測定細胞表面標(biāo)志物CD14、CD29、CD44、 CD45、CD90,并進行成骨、成脂誘導(dǎo),對分離培養(yǎng)的細胞進行鑒定。2.機械張應(yīng)力對人牙周膜干細胞生物學(xué)特性的影響本實驗采用Forcel四點彎曲細胞力學(xué)加載儀進行機械張應(yīng)力加載,取第3代PDLSCs接種于加力板,爬片處理,實驗組設(shè)置應(yīng)變量3000μstrain,頻率0.5HZ,加載時間段分別為30、60、180、360、720min,對照組不加力。通過流式細胞術(shù)分析細胞周期,以觀察機械張應(yīng)力作用后的不同時間段內(nèi)PDLSCs增殖能力的變化；通過人牙周膜干細胞ALP酶活性的檢測以及通過實時熒光聚合酶鏈反應(yīng)(real-time PCR)檢測PDLSCs成骨相關(guān)基因RUNX2 mRNA的表達,觀察機械張應(yīng)力作用對PDLSCs成骨分化能力的影響,通過PCR檢測成脂基因PPARy mRNA的表達,觀察機械張應(yīng)力作用對PDLSCs成脂分化能力的影響。3.機械張應(yīng)力對轉(zhuǎn)錄激活因子TAZ表達的影響收集加力30、60、180、360、720min后的細胞,觀察TAZ的變化情況。結(jié)果1.人牙周膜干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定有限稀釋克隆化培養(yǎng)的PDLSCs,形態(tài)相似,均為梭形、不規(guī)則型,細胞為放射狀或者旋渦狀排列；免疫熒光和流式細胞術(shù)分析細胞表面分子顯示所得細胞陽性表達間充質(zhì)干細胞表面標(biāo)志物STRO-1、CD146、CD29、CD44、 CD90,陰性表達內(nèi)皮細胞表面標(biāo)志物CD14、CD45。成骨誘導(dǎo)可見礦化結(jié)節(jié)形成,茜素紅染色顯示陽性結(jié)果；成脂誘導(dǎo)后可見細胞中脂滴形成。2.機械張應(yīng)力作用下人牙周膜干細胞生物學(xué)特性的變化使用Forcel四點彎曲細胞力學(xué)加載儀進行機械張應(yīng)力加載后,發(fā)現(xiàn)機械張應(yīng)力加載180min和360min時,對PDLSCs增殖的促進作用最明顯；PCR檢測成骨相關(guān)基因ALP、RUNX2,成脂相關(guān)基因PP ARy mRNA的表達,發(fā)現(xiàn)機械張應(yīng)力加載60min后開始增加,并且隨時間的延長而增高,加力后180min,增加的幅度最大,此后增加幅度逐漸減弱。3.機械張應(yīng)力作用下TAZ的變化收集加力后特定時間點的細胞,發(fā)現(xiàn)應(yīng)力加載60min后,TAZ的表達開始增加,在隨著加力時間的延長而增高。結(jié)論1.有限稀釋法克隆化培養(yǎng)的PDLSCs具有干細胞自我更新及多向分化潛能。2.3000μstrain的機械張應(yīng)力能夠促進PDLSCs的增殖和多向分化能力,其促PDLSCs增殖分化能力的強弱與應(yīng)力加載的時間相關(guān),其中180min時促增殖分化效果最顯著。3.3000μstrain的機械張應(yīng)力能夠增強轉(zhuǎn)錄共激活子TAZ的表達,表明TAZ參與機械張應(yīng)力胞內(nèi)力學(xué)信號的傳遞,影響牙周膜干細胞的分化。
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【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R783.5

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1 毛釗;影響牙周膜細胞生物學(xué)功能的相關(guān)因素[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2003年06期

2 凌均h，

本文編號：1348930