本文關(guān)鍵詞：施普善對(duì)血管性癡呆大鼠認(rèn)知功能的影響及CREB信號(hào)分子和凋亡蛋白的作用

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【摘要】：目的:隨著全球人均壽命的延長(zhǎng),老年人群所占的比例越來越大,癡呆的發(fā)病率也在逐年攀升。目前,血管性癡呆(vascular dementia,VD)在西方國(guó)家已成為繼阿爾茨海默病(Alzheimer’Disease,AD)后的第二大癡呆類型,在某些亞洲國(guó)家已成為老年人癡呆的首要原因。但是由于其發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜,目前尚未出現(xiàn)一種能明確治療VD的藥物。施普善(cerebrolysin,CBL)是一種蛋白水解的肽類物質(zhì),它的作用類似于內(nèi)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,可以改善認(rèn)知功能,但是在慢性低灌注(chronic cerebral hypoperfusion,CCH)所致的VD中,作用機(jī)制仍未闡明。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力、海馬CA1區(qū)形態(tài)學(xué)的變化,并且以CREB、p-CREB、Bcl-2、Bax作為實(shí)驗(yàn)研究指標(biāo),來觀察CBL的干預(yù)作用。方法:以3月齡250-300g雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠為研究對(duì)象,采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎(bilateral common carotid artery occlusion/two vessel occlusion,BCCAO/2VO)的手術(shù)方式來建立VD動(dòng)物模型。隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組(Sham組),2VO模型組,CBL低劑量治療組(2.5ml/kg)和CBL高劑量治療組(5ml/kg)。術(shù)后24h經(jīng)腹腔注射給予CBL低劑量組2.5ml/kg/d、CBL高劑量組5ml/kg/d、假手術(shù)對(duì)照組、2VO模型組等劑量生理鹽水腹腔注射,連續(xù)給藥28天。28天后通過Morris水迷宮測(cè)定行為學(xué)的變化,水迷宮實(shí)驗(yàn)完成后,在光鏡下觀察四組大鼠的海馬組織形態(tài)學(xué)變化;使用Western blot法定量分析海馬區(qū)p-CREB、CREB、Bcl-2、Bax的表達(dá)情況,免疫組織化學(xué)技術(shù)測(cè)定海馬CA1區(qū)p-CREB表達(dá)變化。結(jié)果:1大鼠行為學(xué)測(cè)試結(jié)果1.1各組大鼠的學(xué)習(xí)情況:在定位航行階段,2VO模型組大鼠與Sham組相比,逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)(P0.05);而給予CBL治療后(高低劑量組),縮短了逃避潛伏期的時(shí)間,明顯提高了學(xué)習(xí)能力。1.2記憶能力測(cè)試情況在空間探索試驗(yàn)中,2VO模型組大鼠在目標(biāo)象限停留的時(shí)間比值較sham組明顯縮短(P0.01),而給予CBL治療后的兩組大鼠在目標(biāo)象限停留的時(shí)間比值較2VO模型組明顯延長(zhǎng)(P0.05)。2海馬區(qū)形態(tài)學(xué)改變情況Sham組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列整齊、層次分明,結(jié)構(gòu)清晰,細(xì)胞核形狀規(guī)則,核仁清楚,細(xì)胞漿染色均勻。與Sham組相比,2VO模型組:海馬CA1區(qū)神經(jīng)元丟失明顯,細(xì)胞排列松散不規(guī)則,大量胞體固縮,細(xì)胞核形狀不規(guī)則,核仁消失,部分細(xì)胞壞死,胞質(zhì)呈強(qiáng)嗜酸性。CBL治療組(尤其是高劑量組)與2VO模型組相比,海馬CA1區(qū)細(xì)胞密度增加,細(xì)胞層次較清晰,排列較整齊,細(xì)胞核規(guī)則,核仁清晰,偶見少量核固縮變性的神經(jīng)元。3 Western blot結(jié)果3.1 VD大鼠海馬CREB、p-CREB、Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)變化:3.1.1與sham組對(duì)比,CREB及p-CREB蛋白表達(dá)水平下降,后者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。3.1.2與sham組對(duì)比,Bcl-2蛋白表達(dá)水平下降,Bax蛋白表達(dá)水平升高,兩者均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。3.2 CBL對(duì)VD大鼠海馬CREB、p-CREB、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響:3.2.1 CBL治療組與2VO組相比,CREB及p-CREB蛋白表達(dá)水平增加,后者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.2.2 CBL低劑量治療組與2VO組相比,Bcl-2蛋白表達(dá)增加,Bax蛋白表達(dá)減少,兩者均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);CBL高劑量治療組與2VO組相比,Bcl-2蛋白表達(dá)增加(P0.01),Bax蛋白表達(dá)下降(P0.05)。3.2.3 CBL低劑量與CBL高劑量相比,CREB、p-CREB、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)有變化,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4免疫組化方法檢測(cè)大鼠海馬p-CREB的表達(dá)變化光鏡下可見p-CREB免疫陽性表達(dá),免疫陽性反應(yīng)物呈棕黃色,在神經(jīng)元胞漿和胞核均有表達(dá)。Sham組海馬CA1區(qū)p-CREB有明顯表達(dá),2VO組CAI區(qū)p-CREB表達(dá)低于Sham組和CBL治療組,圖像分析結(jié)果表明,2VO組p-CREB陽性反應(yīng)產(chǎn)物平均光密度明顯低于Sham組和CBL治療組(前者P0.01,后者P0.05)。結(jié)論:1 采用BCCAO建立的VD模型是一種穩(wěn)定、有效、理想的動(dòng)物模型。2 海馬CA1區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)破壞和丟失可能是VD模型學(xué)習(xí)記憶下降的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。3 CBL可有效改善VD大鼠認(rèn)知功能,提高其空間學(xué)習(xí)記憶能力,改善其海馬區(qū)病理損傷。作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)CREB和抑制凋亡蛋白相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：血管性癡呆 慢性腦低灌注 雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎 環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白 信號(hào)通路 細(xì)胞凋亡 施普善
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.13
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 英文縮寫11-12
• 引言12-14
• 第一部分 施普善對(duì)血管性癡呆大鼠認(rèn)知功能的影響14-26
• 前言14-15
• 材料與方法15-18
• 結(jié)果18-19
• 附圖19-20
• 附表20-21
• 討論21-23
• 小結(jié)23-24
• 參考文獻(xiàn)24-26
• 第二部分 施普善對(duì)血管性癡呆大鼠海馬組織病理學(xué)的影響26-35
• 前言26-27
• 材料與方法27-29
• 結(jié)果29-30
• 附圖30-31
• 討論31-32
• 小結(jié)32-33
• 參考文獻(xiàn)33-35
• 第三部分 施普善對(duì)血管性癡呆大鼠CREB信號(hào)分子及凋亡蛋白的影響35-54
• 前言35-36
• 材料與方法36-44
• 結(jié)果44-45
• 附圖45-48
• 附表48-49
• 討論49-51
• 小結(jié)51-52
• 參考文獻(xiàn)52-54
• 結(jié)論54-55
• 綜述 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在長(zhǎng)期突觸可塑性中的作用55-62
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 致謝62-63
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷63-64

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本文編號(hào)：927383