發(fā)布時(shí)間：2017-09-21 02:30

  本文關(guān)鍵詞：分子伴侶介導(dǎo)自噬在阿爾茨海默病中的機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 阿爾茨海默病 β-淀粉樣蛋白 分子伴侶 自噬

【摘要】：目的:研究分子伴侶介導(dǎo)的自噬(CMA)對(duì)阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)中β-淀粉樣蛋白(Amyloid-β,Aβ)清除的機(jī)制,探討靶向調(diào)節(jié)腦內(nèi)CMA相關(guān)蛋白對(duì)AD細(xì)胞模型及APPswe/PS1d E9雙轉(zhuǎn)基因小鼠認(rèn)知功能和腦內(nèi)淀粉樣蛋白沉積的影響。方法:1、離體層面:應(yīng)用HEK293/APPswe細(xì)胞(穩(wěn)定表達(dá)人類淀粉樣前體蛋白695瑞典型突變的人胚腎細(xì)胞)和HEK293/APPwt細(xì)胞(穩(wěn)定表達(dá)人類野生型淀粉樣前體蛋白695c DNA的人胚腎細(xì)胞)模型,通過腺病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)過表達(dá)CMA相關(guān)分子或沉默CMA相關(guān)分子來檢測(cè)淀粉樣蛋白前體(Amyloid precursor protein,APP)裂解產(chǎn)生的毒性淀粉樣肽,并用si RNA技術(shù)靶向調(diào)節(jié)Hsc70和Lamp-2A。采用免疫印跡法或ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Aβ1-42,Hsc70和Lamp-2A。2、活體層面:選取雄性3月、7月及11月齡APPswe/PS1d E9雙轉(zhuǎn)基因小鼠以及其對(duì)照同源野生小鼠,通過腺病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)過表達(dá)CMA相關(guān)蛋白或沉默CMA相關(guān)蛋白來檢測(cè)淀粉樣蛋白前體(Amyloid precursor protein,APP)裂解產(chǎn)生的毒性肽,并用si RNA技術(shù)靶向調(diào)節(jié)Hsc70和Lamp-2A。通過Morris水迷宮測(cè)定小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力,采用Western Blot方法或ELISA法檢測(cè)小鼠腦內(nèi)Aβ1-42,Hsc70和Lamp-2A,通過尼氏染色觀察神經(jīng)元形態(tài)變化,采用免疫組化觀察胞外淀粉樣斑的變化。結(jié)果:1、離體層面:在表達(dá)Aβ的HEK293/APPswe細(xì)胞中,CMA被證實(shí)參與體外培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的Aβ降解。當(dāng)我們利用si RNA使培養(yǎng)細(xì)胞中的Lamp-2A或Hsc70低表達(dá)時(shí),Aβ水平出現(xiàn)輕微上升,而這些效應(yīng)在經(jīng)3-MA處理并移除血清的情況下很明顯。相反,Lamp-2A或Hsc70的過表達(dá)使得Aβ的聚集降低。這些數(shù)據(jù)支持了Lamp-2A和Hsc70經(jīng)CMA依賴性途徑參與Aβ清除的理論。2、活體層面:與同月齡對(duì)照小鼠相比,我們發(fā)現(xiàn)7月齡的APP/PS1小鼠大腦中的Hsc70和Lamp-2A水平出現(xiàn)明顯下降,Hsc70水平的改變?cè)?1月齡APP/PS1小鼠中更為明顯。由此得出,經(jīng)Lamp-2A或Hsc70-腺病毒處理過小鼠的皮層和海馬區(qū)域內(nèi)的平均Aβ沉積明顯比對(duì)照組低。此外,Morris水迷宮試驗(yàn)證實(shí)APPswe/PS1d E9小鼠逃脫潛伏期提高較慢。相反,Lamp-2A或Hsc70-腺病毒處理過的小鼠的空間學(xué)習(xí)能力得到明顯提高,試驗(yàn)中逃脫潛伏期時(shí)間縮短。結(jié)論:本研究表明CMA對(duì)Aβ的清除機(jī)制存在作用。有可能為AD患者老年斑的形成開辟一條新的重要途徑。同時(shí),靶向調(diào)節(jié)CMA途徑依賴蛋白,可能為AD患者的靶向治療提供潛在全新方向。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默病 β-淀粉樣蛋白 分子伴侶 自噬
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R749.16
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-11
• 第一章 材料和方法11-27
• 1.1 儀器與材料11-13
• 1.1.1 主要儀器11
• 1.1.2 主要試劑11-12
• 1.1.3 主要溶液的配制12-13
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法13-17
• 1.2.1 細(xì)胞系13
• 1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)、處理及轉(zhuǎn)染13
• 1.2.3 構(gòu)建Hsc70或Lamp-2A腺病毒13-14
• 1.2.4 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性14
• 1.2.5 免疫沉淀法14-15
• 1.2.6 Western blot分析Aβ、Hsc70和Lamp-2A表達(dá)水平15-17
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析17-18
• 1.4 主要儀器18
• 1.5 主要試劑18-19
• 1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物19
• 1.7 實(shí)驗(yàn)方法19-27
• 1.7.1 將腺病毒Hsc70或Lamp-2A注入APPswe/PS1d E9雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)19-20
• 1.7.2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)20
• 1.7.3 腦組織標(biāo)本制備20-21
• 1.7.4 溶酶體膜的制備21
• 1.7.5 Western blot21-24
• 1.7.6 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定Aβ42水平24-25
• 1.7.7 免疫組化染色25
• 1.7.8 免疫熒光染色25-26
• 1.7.9 Nissl染色26-27
• 第二章 結(jié)果27-36
• 2.1 CMA參與體外培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的Aβ降解27-28
• 2.2 Aβ和體外培養(yǎng)細(xì)胞中Lamp-2A和Hsc70表達(dá)水平的關(guān)系28
• 2.3 Lamp-2A和Hsc70對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞中Aβ聚集的影響28-30
• 2.4 APPswe/PS1d E9小鼠大腦中CMA蛋白的水平30-31
• 2.5 Hsc70或Lamp-2A經(jīng)腺病毒重組體向5月齡APPswe/PS1d E9小鼠腦內(nèi)的有效注入31-32
• 2.6 Lamp-2A或Hsc70過表達(dá)對(duì)APPswe/PS1d E9小鼠腦內(nèi)Aβ沉積和神經(jīng)病理的影響32-34
• 2.7 Lamp-2A或Hsc70過表達(dá)對(duì)APPswe/PS1d E9小鼠認(rèn)知功能的影響34-36
• 第三章 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 綜述42-61
• 綜述的參考文獻(xiàn)58-61
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果61-62
• 致謝62-63

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1 逢迎春　,王壽先,宋保華;早年生活危險(xiǎn)因素與阿爾茨海默病的發(fā)生[J];國外醫(yī)學(xué)(兒科學(xué)分冊(cè));2000年06期

2 ;阿爾茨海默病患者常有額葉損害[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2000年03期

3 柴延豐,陳哲宇;阿爾茨海默病研究又有新進(jìn)展[J];中國神經(jīng)科學(xué)雜志;2000年04期

4 菲琳;;可緩解阿爾茨海默病病情的新藥[J];國外醫(yī)學(xué)情報(bào);2000年02期

5 汪義朋,王建枝;早老素-1對(duì)阿爾茨海默病相關(guān)蛋白調(diào)節(jié)的可能途徑[J];中華神經(jīng)科雜志;2001年01期

6 邵千里;15例阿爾茨海默病的診治[J];貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年03期

7 ;工業(yè)化社區(qū)阿爾茨海默病發(fā)病率較高[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2001年03期

8 邵梅,湯薈冬;阿爾茨海默病天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶研究進(jìn)展[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年05期

9 ;腦器質(zhì)性精神障礙[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2001年04期

10 吳傳深 ,周東豐 ,Peter Como ,張林 ,Karl Kieburtz ,范金虎 ,喬友林;河南林縣阿爾茨海默病患病率的調(diào)查[J];中華精神科雜志;2002年04期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳梅芳;;阿爾茨海默病的行為和精神癥狀及相關(guān)因素分析[A];2009年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)精神病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)師協(xié)會(huì)精神科醫(yī)師分會(huì)第二屆年會(huì)論文匯編[C];2009年

2 杜麗華;;阿爾茨海默病治療[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

3 成林平;黃紹寬;李玉梅;王延平;鄧曉瑩;;維生素干預(yù)治療對(duì)阿爾茨海默病患者血漿同型半胱氨酸水平的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國老年醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

4 唐微韻;;阿爾茨海默病患者照料工作中的心理慰藉問題探討[A];第10次全國精神病學(xué)術(shù)交流會(huì)暨《中國民康醫(yī)學(xué)》創(chuàng)刊20周年慶典論文匯編[C];2008年

5 周東升;徐銀兒;連國民;于暢;陳中鳴;;老年人生活方式與阿爾茨海默病相關(guān)性研究[A];2013浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)精神病學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)師協(xié)會(huì)精神科醫(yī)師分會(huì)第六屆年會(huì)論文匯編[C];2013年

6 于恩彥;;對(duì)阿爾茨海默病認(rèn)識(shí)的進(jìn)展[A];2013年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)精神病學(xué)分會(huì)老年精神障礙學(xué)組學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

7 郭忠偉;陳煒;;~1H-MRS在阿爾茨海默病早期診治中的應(yīng)用[A];2013年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)精神病學(xué)分會(huì)老年精神障礙學(xué)組學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

8 于恩彥;朱俊鵬;王玨;王欣慰;譚云飛;廖崢孌;仇雅菊;汪宏;;阿爾茨海默病的“早期-全面-系統(tǒng)-長期”預(yù)防[A];第七屆全國心理衛(wèi)生學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2014年

9 崔德華;;腦衰老因素在阿爾茨海默病的發(fā)病中的所起的作用及防治[A];2009全國抗衰老與老年癡呆學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

10 陳生弟;楊紅旗;孫治坤;崔佩菁;王紅梅;;阿爾茨海默病的若干發(fā)病機(jī)制及治療新靶點(diǎn)研究[A];2009全國抗衰老與老年癡呆學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 編譯 姚立新;阿爾茨海默病防治:缺乏靈丹妙藥[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

2 記者 劉正午;阿爾茨海默病成歐美第二大憂患[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2011年

3 長沙市第一醫(yī)院神經(jīng)醫(yī)學(xué)中心主任、主任醫(yī)師 王愛民;您了解阿爾茨海默病嗎？[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2012年

4 長沙市第一醫(yī)院神經(jīng)醫(yī)學(xué)中心主任、主任醫(yī)師 王愛民;門診可排查阿爾茨海默病[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2012年

5 本報(bào)記者 李穎;為阿爾茨海默病正名[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

6 上海市中醫(yī)老年醫(yī)學(xué)研究所教授 林水淼;阿爾茨海默病權(quán)變治療可延緩病情進(jìn)展[N];健康報(bào);2013年

7 吳志 李淼;警惕盯上老年人的“殺手”阿爾茨海默病[N];科技日?qǐng)?bào);2013年

8 孫琳 本報(bào)記者 李穎;你是否關(guān)注阿爾茨海默�。縖N];科技日?qǐng)?bào);2014年

9 本報(bào)記者 李蘊(yùn)明;阿爾茨海默病困局待解[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2014年

10 櫻子 整理;為何阿爾茨海默病患者常迷路[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2014年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 呂英茹;阿爾茨海默病的MRI結(jié)構(gòu)與功能研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 楊平;中國南方人群阿爾茨海默病易感基因篩查及可能機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 李毅;FDG和PiB PET顯像在Alzheimer's Disease早期診斷及臨床分型中的應(yīng)用研究[D];山東大學(xué);2015年

4 矯樹生;依達(dá)拉奉對(duì)阿爾茨海默病的防治作用及其機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 李工博;殺蟲劑DDT和hnRNPA1基因在阿爾茨海默病中的作用及分子機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 鄧青山;DISC1改善阿爾茨海默病APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因模型鼠認(rèn)知功能的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

7 朱小群;磁共振波譜在輕度認(rèn)知功能損害和阿爾茨海默病中的應(yīng)用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

8 姜紅燕;云南漢族早發(fā)阿爾茨海默病家系的遺傳學(xué)研究[D];云南大學(xué);2015年

9 徐志鵬;糖原合成酶激酶-3β在阿爾茨海默病及2型糖尿病發(fā)病中的作用[D];華中科技大學(xué);2015年

10 李楠;人源性阿爾茨海默病噬菌體抗體庫的構(gòu)建及Aβ單鏈抗體的篩選與初步效價(jià)研究[D];鄭州大學(xué);2016年

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1 蔣剛;蟻群算法在求解阿爾茨海默病最優(yōu)微陣列上的應(yīng)用[D];四川師范大學(xué);2011年

2 周江霖;應(yīng)用點(diǎn)著色聚類方法識(shí)別阿爾茨海默病致病基因[D];四川師范大學(xué);2012年

3 付成燕;護(hù)士對(duì)阿爾茨海默病的認(rèn)知及其影響因素的研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

4 婁艷芳;非藥物療法干預(yù)阿爾茨海默病的臨床療效研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 馬杭琨;中藥對(duì)照多奈哌齊治療阿爾茨海默病的Meta分析[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

6 劉一川;天芪益智方對(duì)阿爾茨海默病大鼠突觸功能的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

7 馬洪明;田金洲教授學(xué)術(shù)思想與臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)及其治療阿爾茨海默病用藥規(guī)律研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

8 張佳佳;天芪益智顆粒對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 殷凱林;CART通過調(diào)節(jié)MAPK和AKT通路抑制β淀粉樣蛋白沉積改善阿爾茨海默病認(rèn)知功能的相關(guān)研究[D];南京大學(xué);2014年

10 姜榮;V11抗阿爾茨海默病作用[D];南京大學(xué);2014年

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