本文關(guān)鍵詞：腦苷肌肽干預(yù)后轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠海馬的蛋白質(zhì)組學(xué)研究

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【摘要】：目的:阿爾茨海默病(AD)是一種隱襲起病呈進(jìn)行性發(fā)展的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,與年齡有相關(guān)性,嚴(yán)重影響老年人的生活質(zhì)量,也給照料者造成負(fù)擔(dān)。AD發(fā)病機(jī)制及影響因素復(fù)雜,涉及基因變異、蛋白修飾異常、淀粉樣蛋白沉積、神經(jīng)營養(yǎng)及可塑性改變、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、能量代謝紊亂、細(xì)胞結(jié)構(gòu)失衡等。病理研究發(fā)現(xiàn)AD患者或動(dòng)物模型海馬神經(jīng)元有明顯損傷,直接影響記憶及空間定位等生理功能,海馬是癡呆患者較早發(fā)生病理改變的部位。關(guān)于AD的治療,目前臨床一線治療藥物也僅限于多奈哌齊和美金剛,而且只能緩解癥狀,并不能逆轉(zhuǎn)或阻止病情進(jìn)展。腦苷肌肽因其神經(jīng)修復(fù)作用被廣泛應(yīng)用于各種中樞及周圍神經(jīng)系統(tǒng)損傷性疾病。國內(nèi)較普遍應(yīng)用腦苷肌肽治療阿爾茨海默病,臨床觀察有一定的療效,但其作用機(jī)制亦不明確。蛋白質(zhì)組學(xué)最初被定義為一個(gè)基因組所表達(dá)的蛋白質(zhì),然而產(chǎn)生蛋白質(zhì)的細(xì)胞組織是動(dòng)態(tài)的,并且容易受到外環(huán)境的影響。因而目前認(rèn)為蛋白質(zhì)組是一個(gè)已知的細(xì)胞在某一特定時(shí)刻所包括所有亞型和修飾的全部蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)就是從整體角度分析細(xì)胞內(nèi)動(dòng)態(tài)變化的蛋白質(zhì),包括其組成、表達(dá)水平與修飾狀態(tài),了解蛋白質(zhì)之間的相互作用與聯(lián)系,提示蛋白質(zhì)的功能與細(xì)胞的活動(dòng)規(guī)律。鑒于轉(zhuǎn)基因小鼠模型所引起的病理改變相對(duì)單一,產(chǎn)生病理變化所經(jīng)歷時(shí)間較短,能夠更好地模擬AD病理改變和臨床特點(diǎn),已成為目前國內(nèi)外研究AD病因及發(fā)病機(jī)制和臨床治療策略較理想的動(dòng)物模型。本研究通過對(duì)正常對(duì)照組、模型組及腦苷肌肽干預(yù)后APPswe/PS1d E9雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠海馬組織進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究,鑒定差異表達(dá)蛋白并分析其生物學(xué)功能,幫助我們深入理解阿爾茨海默病的病理機(jī)制及腦苷肌肽對(duì)腦組織的保護(hù)作用機(jī)制,為探討阿爾茨海默病臨床診治的新思路提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:選取5月齡APPswe/PS1d E9雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠共24只,隨機(jī)分組:模型組(Tg)、腦苷肌肽干預(yù)組(Tg+CEGI-6.6)各12只,同月齡相同遺傳背景C57/BL6J小鼠12只作為對(duì)照組。腦苷肌肽干預(yù)組給予腹腔注射腦苷肌肽6.6m L/kg/d,模型組及對(duì)照組給予等劑量的生理鹽水。30天后,分別處死動(dòng)物,取小鼠大腦海馬組織,提取蛋白質(zhì)進(jìn)行肽段TMT標(biāo)記,并進(jìn)行LC-LTQ-MS/MS分析以及質(zhì)譜數(shù)據(jù)檢索,對(duì)所得差異蛋白進(jìn)行生物學(xué)功能分析。結(jié)果:1運(yùn)用TMT定量結(jié)合LC-MS/MS技術(shù)檢測(cè),并采用國際比較流行的常規(guī)的分析表達(dá)差異蛋白點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn),即1.5倍以上的變化幅度是可信的。得出:腦苷肌肽干預(yù)組與模型組比較,得出可信差異蛋白122個(gè),其中表達(dá)上調(diào)的蛋白有56個(gè)(Table1),表達(dá)下調(diào)的蛋白有66個(gè)(Table2);腦苷肌肽干預(yù)組與正常對(duì)照組比較,得出可信差異蛋白143個(gè),其中表達(dá)上調(diào)的蛋白有51個(gè)(Table3),表達(dá)下調(diào)的蛋白有92個(gè)(Table4)。2 GeneCoDis3分析差異蛋白的生物學(xué)過程,腦苷肌肽干預(yù)組小鼠大腦海馬組織差異蛋白的功能主要涉及細(xì)胞結(jié)構(gòu)維持、細(xì)胞膜運(yùn)輸、細(xì)胞能量代謝、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、脂質(zhì)代謝、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、蛋白質(zhì)水解、細(xì)胞增殖及凋亡、炎癥、氧化應(yīng)激、免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)等生物過程。結(jié)論:1運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定出APP/PS1小鼠及腦苷肌肽干預(yù)后的差異表達(dá)蛋白,初步建立APP/PS1小鼠及腦苷肌肽治療后小鼠海馬組織的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫,這些蛋白質(zhì)主要涉及細(xì)胞結(jié)構(gòu)維持、胞膜運(yùn)輸、細(xì)胞能量代謝、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、脂質(zhì)代謝、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及水解、細(xì)胞增殖及凋亡、炎癥、氧化應(yīng)激、免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)等生物過程。這些過程與神經(jīng)退行性疾病尤其是AD的發(fā)病機(jī)制及病理過程密切相關(guān),深入探究有利于我們進(jìn)一步理解這些疾病的內(nèi)在本質(zhì)。2腦苷肌肽對(duì)APP/PS1小鼠神經(jīng)細(xì)胞損傷有一定保護(hù)作用,其機(jī)制可能是通過穩(wěn)定細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu),維持突觸穩(wěn)定性,減緩神經(jīng)節(jié)苷脂退化速度,抑制炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激等方面發(fā)揮其對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茨海默病 轉(zhuǎn)基因小鼠 腦苷肌肽 蛋白質(zhì)組學(xué) LC/MS TMT定量標(biāo)記
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R-332;R749.16
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-15
• 結(jié)果15-16
• 附表16-26
• 討論26-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-43
• 綜述 微管相關(guān)蛋白與神經(jīng)退行性疾病43-53
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 致謝53-54
• 個(gè)人簡歷54

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 許玉霞;王洪權(quán);趙紅;郭景春;朱粹青;;海馬注射β-淀粉樣蛋白前體蛋白抗體誘導(dǎo)神經(jīng)元的退行性變及學(xué)習(xí)記憶障礙(英文)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2011年10期

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本文編號(hào)：861365