本文關(guān)鍵詞：天麻素對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用

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【摘要】：[目的]通過(guò)構(gòu)建過(guò)氧化氫(hydrogen peroxide,H2O2)、誘導(dǎo)的大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞株(Pheochromocytoma Cells,PC12)為模型,從細(xì)胞、分子和蛋白層面探討天麻素(Gastrodin, GAS)對(duì)H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。 [方法]用H2O2刺激PC12細(xì)胞構(gòu)建凋亡模型。將體外培養(yǎng)的PC12細(xì)胞隨機(jī)分成空白對(duì)照組、H2O2(200μmol/L,12h)處理組、不同濃度GAS(80.120.160μmol/ml)+H2O2處理組、不同濃度的GAS+H2O2(200μmol/L)+wortmannin (1μmol/L)共同處理組。采用免疫熒光雙標(biāo)記檢測(cè)方法(double-immunofluorescence labeling assay)在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor, TNF-α)、白介素-1β (interleukin-1β, IL-1β)過(guò)氧化氫酶(catalase, CAT)、糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor, GR)表達(dá)的變化；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)檢測(cè)GR、CAT、TNF-α和IL-1p的mRNA水平的變化：并用Hoechst33342/碘化丙啶(propidine lodide,PI)雙染觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。 [結(jié)果]PC12細(xì)胞以5×105個(gè)/m1濃度接種于六孔板中,當(dāng)密度均勻生長(zhǎng)至80%時(shí)預(yù)處理80、120、160μmol/ml的GAS1h后,加入H2O2(200μmol/L)刺激,經(jīng)過(guò)免疫熒光雙標(biāo)記檢測(cè)方法,RT-PCR、Hoechst33342/PI雙染分析,得到結(jié)果：不同濃度的GAS在轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平上明顯抑制了H202誘導(dǎo)的TNF-α和IL-1p的上調(diào),激活了CAT、GR的上調(diào),并且表達(dá)程度呈劑量依賴性。 [結(jié)論]GAS通過(guò)PI3K/Akt通路可以抑制H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡因子的釋放,發(fā)揮其神經(jīng)抗凋亡作用,從而起到保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用,表明GAS作為一種抗神經(jīng)凋亡藥物的潛質(zhì)得到證實(shí),為臨床應(yīng)用GAS治療神經(jīng)退行性疾病提供了新的生物學(xué)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：天麻素 神經(jīng)退行性疾病 過(guò)氧化氫 PC12細(xì)胞 凋亡 磷脂酰肌醇3激酶 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 免疫熒光雙標(biāo)記 Hoechst33342/PI雙染
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R749.1
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及其配制12-22
• 結(jié)果22-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 綜述42-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 在讀期間發(fā)表的文章49-50
• 致謝50

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：765667