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脂聯(lián)素介導(dǎo)硫化氫拮抗慢性束縛應(yīng)激大鼠海馬損傷及認(rèn)知功能障礙

發(fā)布時(shí)間:2017-08-26 12:25

  本文關(guān)鍵詞:脂聯(lián)素介導(dǎo)硫化氫拮抗慢性束縛應(yīng)激大鼠海馬損傷及認(rèn)知功能障礙


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【摘要】:研究背景與目的慢性束縛應(yīng)激(Chronic Restraint Stress,CRS)可引起海馬損傷,誘發(fā)認(rèn)知障礙。硫化氫(Hydrogen sulfide,H_2S),作為繼CO和NO后第三類氣體信號(hào),目前研究已經(jīng)證實(shí)具有神經(jīng)保護(hù)作用和促學(xué)習(xí)記憶功能,本實(shí)驗(yàn)將探討H_2S可否拮抗CRS引起的海馬損傷及認(rèn)知功能障礙。脂聯(lián)素(Adiponectin Acrp 30)已經(jīng)被證實(shí)其可通過(guò)調(diào)控糖脂代謝降低海馬內(nèi)氧化應(yīng)激及凋亡水平,減輕海馬損傷,從而改善認(rèn)知功能障礙。因此我們將從脂聯(lián)素這一視角闡明H_2S拮抗CRS大鼠海馬損傷及認(rèn)知障礙的分子機(jī)制。方法使用自制金屬套管固定大鼠,使其可以自由旋轉(zhuǎn),但不能自由活動(dòng),每天早8時(shí)給予大鼠腹腔注射Na HS(100μmol/kg),30 min后束縛大鼠6 h,共計(jì)28 d。Y迷宮(Y-maze)、新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)(novel objection recognition test,NORT)和Morris水迷宮檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知能力;Elisa方法檢測(cè)大鼠海馬內(nèi)丙二醛(Malondialdehyde,MDA)及還原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量;氮藍(lán)四唑(NBT)法檢測(cè)大鼠海馬內(nèi)超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量;Western blot方法檢測(cè)大鼠海馬內(nèi)突觸蛋白1(synapse 1,SYN 1)及脂聯(lián)素(Adiponectin,Acrp30)蛋白表達(dá)水平;免疫熒光檢測(cè)大鼠海馬內(nèi)SYN 1的表達(dá);Hematein Eosin(HE)染色觀察大鼠海馬細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)改變;Tunel染色觀察大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡水平。結(jié)果1.H_2S改善CRS大鼠認(rèn)知功能障礙在CRS處理SD大鼠4w后,Y迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CRS大鼠交替率下降;而加用Na HS(100μmol/kg×28 d,ip)后,CRS大鼠交替率明顯增加;新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,CRS大鼠新物體識(shí)別指數(shù)明顯下降,加用Na HS(100μmol/kg×28 d,ip)后,CRS大鼠新物體識(shí)別指數(shù)顯著上升。Morris水迷宮獲得性訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)第5 d的結(jié)果顯示,CRS大鼠逃逸潛伏期明顯延長(zhǎng),給以Na HS(100μmol/kg×28 d,ip)處理后,CRS大鼠逃逸潛伏期明顯縮短。Morris水迷宮探查實(shí)驗(yàn)顯示CRS大鼠穿過(guò)原平臺(tái)的次數(shù)明顯減少,并且在中環(huán)游泳時(shí)間比與目標(biāo)象限中時(shí)間比均顯著降低;Na HS(100μmol/kg×28 d,ip)處理后,CRS大鼠穿越原平臺(tái)的次數(shù)、中環(huán)游泳時(shí)間比與目標(biāo)象限時(shí)間比均明顯增加。上述結(jié)果表明H_2S可改善CRS大鼠的認(rèn)知功能障礙。2.H_2S改善CRS大鼠海馬損傷經(jīng)過(guò)慢性束縛應(yīng)激4 w后,CRS大鼠海馬MDA含量明顯增加(P0.001)、GSH含量及SOD含量明顯下降;而加用Na HS(100μmol/kg×28d,ip)后,大鼠海馬中MDA含量顯著降低,GSH含量及SOD含量顯著增加。Western blot實(shí)驗(yàn)與免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示CRS大鼠海馬SNY-1的表達(dá)水平下降,而Na HS(100μmol/kg×28d,ip)可逆轉(zhuǎn)CRS大鼠內(nèi)SNY-1表達(dá)的下調(diào)。HE染色與Tunel染色顯示CRS大鼠海馬內(nèi)細(xì)胞排列紊亂、細(xì)胞間空隙增加、核固縮、以及細(xì)胞凋亡數(shù)量增加等病理改變,而加用Na HS(100μmol/kg×28d,ip)后,大鼠海馬細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)趨于正常,細(xì)胞凋亡數(shù)下降。上述結(jié)果表明H_2S對(duì)CRS誘導(dǎo)的大鼠海馬損傷有改善作用。3.H_2S上調(diào)CRS大鼠海馬脂聯(lián)素(Acrp 30)的表達(dá)Western blot方法檢測(cè)大鼠海馬內(nèi)Acrp30表達(dá)水平,結(jié)果顯示CRS大鼠海馬內(nèi)Acrp30表達(dá)顯著降低,加用Na HS(30 and100μmol/kg×28 d,ip)后,CRS大鼠海馬Acrp30水平明顯上升,表明H_2S可以上調(diào)CRS大鼠海馬脂聯(lián)素的表達(dá)。4.Anti-Acrp30逆轉(zhuǎn)H_2S對(duì)CRS大鼠認(rèn)知功能障礙的改善作用大鼠腹腔注射Na HS(100μmol/kg/d,ip),同時(shí)進(jìn)行束縛應(yīng)激(6 h/d)連續(xù)28 d,最后1 w同時(shí)側(cè)腦室注射Anti-acrp30(1μg/d×7 d,icv)。Y迷宮實(shí)驗(yàn)顯示Anti-acrp30(1μg/d×7 d,icv)取消Na HS(100μmol/kg×28d,ip)對(duì)CRS大鼠交替率的改善作用。新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)顯示Anti-acrp30(1μg/d×7 d,icv)逆轉(zhuǎn)Na HS(100μmol/kg×28d,ip)對(duì)CRS大鼠新物體識(shí)別指數(shù)的增加作用。Morris水迷宮獲得性訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)第5 d結(jié)果顯示Anti-acrp30(1μg/d×7 d,icv)取消Na HS(100μmol/kg×28d,ip)對(duì)CRS大鼠逃逸潛伏期的降低作用,Morris水迷宮空間探查實(shí)驗(yàn)顯示Anti-acrp30(1μg/d×7 d,icv)廢除了Na HS(100μmol/kg×28d,ip)對(duì)CRS大鼠穿越原平臺(tái)次數(shù)、中環(huán)游泳時(shí)間和目標(biāo)象限時(shí)間比的增加作用。上述結(jié)果表明抑制脂聯(lián)素可逆轉(zhuǎn)H_2S對(duì)CRS大鼠認(rèn)知功能障礙的改善作用。5.Anti-Acrp 30逆轉(zhuǎn)H_2S對(duì)CRS大鼠海馬損傷的拮抗作用使用Anti-acrp30(1μg/d×7 d,icv)抑制脂聯(lián)素的活性,Elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示抑制Acrp 30活性后,大鼠海馬內(nèi)MDA含量顯著增加、GSH及SOD含量顯著降低;Western blotting實(shí)驗(yàn)以及免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示抑制Acrp 30活性后,Na HS(100μmol/kg×28d,ip)對(duì)CRS大鼠海馬內(nèi)SYN-1水平的上調(diào)作用被逆轉(zhuǎn)。HE染色、Tunel染色實(shí)驗(yàn)顯示抑制Acrp 30活性后,Na HS(100μmol/kg×28d,ip)對(duì)CRS大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)的改善作用以及對(duì)海馬細(xì)胞凋亡的降低作用被廢除。上述結(jié)果表明Anti-acrp 30逆轉(zhuǎn)H_2S對(duì)CRS大鼠海馬神經(jīng)損傷的拮抗作用。結(jié)論:1.硫化氫改善慢性束縛應(yīng)激所致大鼠認(rèn)知功能障礙與海馬損傷。2.脂聯(lián)素介導(dǎo)硫化氫改善慢性束縛應(yīng)激大鼠認(rèn)知功能障礙及海馬損傷
【關(guān)鍵詞】:硫化氫 脂聯(lián)素 慢性束縛應(yīng)激 海馬損傷 認(rèn)知功能障礙
【學(xué)位授予單位】:南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:R749.1
【目錄】:
  • 摘要5-9
  • ABSTRACT9-15
  • 縮略詞15-17
  • 第一章 緒論17-21
  • 第二章 材料與方法21-30
  • 1. 主要試劑和儀器21-23
  • 2. 實(shí)驗(yàn)試劑和藥品的配制方法23-24
  • 3. 實(shí)驗(yàn)方法24-28
  • 4. 統(tǒng)計(jì)分析28-30
  • 第三章 結(jié)果30-48
  • 第四章 討論48-52
  • 第五章 結(jié)論52-54
  • 參考文獻(xiàn)54-62
  • 綜述62-66
  • 參考文獻(xiàn)64-66
  • 碩士期間發(fā)表論文66-68
  • 致謝68-69

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10 王忻s,

本文編號(hào):741488


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