發(fā)布時間：2017-08-21 08:38

  本文關鍵詞：過表達MKP1通過抑制JNK途徑減輕淀粉樣蛋白的神經毒性作用

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【摘要】：目的:β淀粉樣蛋白(amyloid beta,Aβ)可通過激活MAPK等信號途徑誘發(fā)神經炎癥和細胞凋亡,其神經毒性是阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD)發(fā)病的關鍵原因。然而,Aβ激活MAPK途徑的具體分子機制尚未完全闡明。本研究通過測定Aβ42刺激下PC12細胞中MKP1蛋白水平,Aβ42刺激下敲除MKP1和過表達MKP1的PC12細胞中ROS、SOD、MDA、p-JNK、TNF-α、IL-1βm RNA、LDH、Caspase 3及細胞損傷水平,JNK特異性抑制劑SP600125作用下敲除MKP1的PC12細胞中ROS、SOD、MDA、TNF-α、IL-1β、LDH及細胞損傷水平對Aβ激活MAPK途徑的具體分子機制進行初步論述,期待可為靶向作用于MAPK的AD治療藥物的研發(fā)提供有力的幫助。方法:實驗對象選取野生型PC12細胞、過表達MKP1和穩(wěn)定敲除MKP1的PC12細胞。為檢測Aβ42(Sigma-Aldrich,MO,USA)對PC12細胞活性的影響,在細胞培養(yǎng)基中加入不同濃度的Aβ42(0μM,0.1μM,1μM,10μM和100μM),處理24 h后CCK-8檢測細胞活性。為檢測Aβ對PC12細胞中MKP1的表達,向細胞培養(yǎng)基中加入10μM的Aβ42,在不同時間點(0 h,6 h,12 h,18 h和24 h)通過q RT-PCR和Western blot檢測MKP1表達。為檢測MKP1對Aβ所致神經毒性的影響,將野生型PC12細胞分為對照組(Control)和Aβ42組,敲除MKP1的細胞為Aβ42+MKP1 KD組,過表達MKP1細胞為Aβ42+MKP1組,后3組加入10μM Aβ42,置于培養(yǎng)箱中24 h,進行CCK-8等檢測。為檢測JNK信號途徑在MKP1敲除所致神經損傷加重效應中的作用,將MKP1 KD細胞分為Control和SP600125組,給予10μM Aβ42,SP600125組再加入JNK特異性抑制劑SP600125(Sigma-Aldrich)2μM,置于培養(yǎng)箱中24 h,進行CCK-8等檢測。使用IBM SPSS Statistics 23.0軟件進行數(shù)據(jù)處理。結果:在本研究結果中,我們發(fā)現(xiàn)經Aβ刺激后,PC12細胞活性受到抑制,MAPK的重要調節(jié)因子MKP1表達下調,并呈時間依賴性。過表達MKP1后,Aβ誘導的PC12細胞中p-JNK水平降低,細胞內活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平下降,細胞死亡和凋亡減輕,TNF-α和IL-1β表達減少。而敲除MKP1可加重Aβ誘導的PC12細胞氧化應激、炎癥反應和細胞損傷。進一步研究發(fā)現(xiàn),JNK抑制劑SP600125可抵消MKP1敲除對Aβ神經毒性的加重效應。結論:本研究表明,Aβ通過下調MKP1表達激活MAPK信號途徑,過表達MKP1可通過抑制JNK信號途徑減輕Aβ所誘導的細胞凋亡和神經炎癥從而發(fā)揮神經保護作用。
【關鍵詞】：β淀粉樣蛋白 阿爾茨海默病 絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1 絲裂原活化蛋白激酶 氧化應激
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 中英文縮略詞12-13
• 第1章 緒論13-15
• 第2章 綜述15-23
• 2.1 氧化應激的概念15
• 2.2 氧化應激相關的物質15-16
• 2.2.1 體內的主要氧化劑15-16
• 2.2.2 抑制自由基生成的物質16
• 2.3 氧化應激與神經細胞的凋亡16-18
• 2.3.1 細胞凋亡的線粒體途徑17
• 2.3.2 細胞凋亡的內質網途徑17-18
• 2.3.3 細胞凋亡的死亡受體途徑18
• 2.4 氧化應激與腦缺血18-20
• 2.4.1 內皮細胞損傷18-19
• 2.4.2 動脈不穩(wěn)定斑塊形成19-20
• 2.4.3 缺血性級聯(lián)反應，組織細胞再灌注20
• 2.5 氧化應激與神經系統(tǒng)變性疾病20-22
• 2.5.1 氧化應激與阿爾茨海默病(Alzheimer disease, AD)20-21
• 2.5.2 氧化應激與帕金森病21-22
• 2.6 問題與展望22-23
• 第3章 材料與方法23-31
• 3.1 細胞培養(yǎng)與處理23
• 3.2 CCK-8 檢測23-24
• 3.3 q RT-PCR24-26
• 3.3.1 RNA的提取24
• 3.3.2 RNA濃度測定24-25
• 3.3.3 RNA電泳25
• 3.3.4 RNA逆轉錄25-26
• 3.3.5 q PCR檢測26
• 3.4 Western blot檢測26-28
• 3.4.1 細胞中總蛋白提取26-27
• 3.4.2 BCA法測蛋白濃度27
• 3.4.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳27-28
• 3.5 DCFH-DA檢測28
• 3.6 SOD活性和MDA水平檢測28
• 3.7 流式細胞術檢測28-29
• 3.7.1 預處理28
• 3.7.2 細胞制備28-29
• 3.7.3 流式細胞儀分析29
• 3.8 LDH活性檢測29
• 3.9 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）29-30
• 3.10 TUNEL染色30
• 3.11 統(tǒng)計學分析30-31
• 第4章 結果31-37
• 4.1 Aβ_(42)下調PC12細胞中MKP1的表達31-32
• 4.2 MKP1調控Aβ_(42)所致的氧化應激反應32-33
• 4.3 MKP1調控Aβ_(42)所致的神經炎癥33-34
• 4.4 MKP1減輕Aβ_(42)所致的神經細胞損傷34-35
• 4.5 抑制JNK減輕MKP1敲除對Aβ_(42)所致神經毒性的效應35-37
• 第5章 討論37-39
• 第6章 結論39-40
• 參考文獻40-47
• 作者簡介及科研成果47-48
• 致謝48

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李其祿;;9例精神、神經病患者嘔吐物中淀粉樣蛋白的測定[J];中國民間療法;2007年07期

2 陳子馨;吳t，

本文編號：711892