本文關(guān)鍵詞：PCSK9介導(dǎo)脂質(zhì)對海馬神經(jīng)元及PC12細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究

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【摘要】：阿爾茨海默癥（Alzheimer's disease，AD）是一種多因素引起的，與年齡高度相關(guān)，以進(jìn)行性認(rèn)知障礙和記憶力損傷為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，是最常見的癡呆類型之一。神經(jīng)細(xì)胞凋亡是其主要病理基礎(chǔ)之一。高脂血癥是AD等神經(jīng)退行性疾病發(fā)生的高危因素，但是高脂血癥與神經(jīng)退行性疾病發(fā)生的機(jī)制并未完全闡明。本課題旨在研究脂質(zhì)對神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制，進(jìn)而探索高脂血癥導(dǎo)致AD等神經(jīng)退行性疾病發(fā)生的機(jī)制。 目的：探討PCSK9在高脂血癥apoE (-/-)小鼠海馬神經(jīng)元凋亡中的表達(dá)情況及機(jī)制研究；觀察PCSK9在不同濃度氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，oxLDL）誘導(dǎo)PC12神經(jīng)細(xì)胞凋亡模型中的表達(dá)情況，抑制PCSK9表達(dá)對oxLDL誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的影響，研究PCSK9介導(dǎo)脂質(zhì)誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。 方法：實(shí)驗(yàn)分為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)兩部分。動(dòng)物模型為18只6周齡apoE (-/-)小鼠，隨機(jī)分為正常飲食組和高脂飲食組。喂養(yǎng)12周后取出海馬組織進(jìn)行冰凍切片，運(yùn)用HE染色、油紅O、Hoechst33258染色、免疫組織化學(xué)染色和改良Bielschowsky染色觀察海馬改變。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)則是用不同濃度oxLDL處理PC12細(xì)胞24h，Hoechst33258染色檢測細(xì)胞凋亡，RT-PCR、Western blot分別檢測PCSK9和BACE1mRNA、蛋白的表達(dá)，ELISA檢測培養(yǎng)液中Aβ40、Aβ42含量。篩選出有效的PCSK9siRNA轉(zhuǎn)染入PC12細(xì)胞，48h后加入oxLDL處理24h，Hoechst33258染色觀察細(xì)胞評價(jià)細(xì)胞凋亡，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率，Western blot分別檢測PCSK9、BACE1、Caspase3、Caspase9、Bcl-2、Bax的表達(dá)，ELISA檢測培養(yǎng)液中Aβ40、Aβ42含量。 結(jié)果：與正常飲食組相比，高脂飲食組apoE (-/-)小鼠海馬錐體細(xì)胞排列稀疏紊亂，細(xì)胞間隙增大，胞體腫脹，細(xì)胞核體積變小及濃染，呈核固縮，尤以CA3區(qū)明顯，而CA1區(qū)病變不顯著；神經(jīng)細(xì)胞荷脂略有增加，凋亡增加，Aβ沉積略有增多；PCSK9、BACE1、Caspase3、Bax表達(dá)增加顯著，Bcl-2表達(dá)稍增加。75mg/L oxLDL處理PC12細(xì)胞24h后，Hoechst33258染色可見大量凋亡細(xì)胞。同時(shí)RT-PCR、Western blot檢測發(fā)現(xiàn)，PCSK9mRNA和蛋白表達(dá)量呈濃度依賴性增加，75mg/L oxLDL組增加最明顯；而BACE1mRNA和蛋白表達(dá)量及Aβ40、Aβ42含量都呈濃度依賴性降低，以75mg/L oxLDL組下降最明顯。將篩選出來的PCSK9siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h后，再用oxLDL處理24h，Hoechst33258染色及流式細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染siRNA組凋亡明顯被抑制；Westernblot檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染siRNA組Caspase3、Caspasee9、Bax表達(dá)降低，BACE1、Bcl-2表達(dá)和Aβ40、Aβ42含量增多。 結(jié)論：高脂血癥可導(dǎo)致apoE (-/-)小鼠海馬神經(jīng)元凋亡增加，，其機(jī)制可能是與高脂血癥時(shí)腦組織PCSK9表達(dá)上調(diào)繼而激活Bcl-2/Bax-Caspase3信號途徑和BACE1表達(dá)增加，Aβ含量增加有關(guān)。oxLDL對神經(jīng)細(xì)胞凋亡具有雙向調(diào)節(jié)作用，其機(jī)制在于oxLDL誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞PCSK9表達(dá)增加，PCSK9表達(dá)增加一方面通過Bcl-2/Bax-Caspase（9，3）信號途徑促使神經(jīng)細(xì)胞凋亡；另一方面卻通過降解BACE1，抑制APP/Aβ代謝途徑，減少Aβ生成，從而抑制Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：高脂血癥 阿爾茨海默病 枯草溶菌素轉(zhuǎn)化酶9 氧化型低密度脂蛋白 神經(jīng)細(xì)胞 凋亡 β淀粉樣蛋白 β-分泌酶
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 前言8-10
• 實(shí)驗(yàn)材料10-12
• 1.1 細(xì)胞和主要試劑來源10-11
• 1.2 主要儀器11-12
• 實(shí)驗(yàn)方法12-18
• 一、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)12-13
• 二、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)13-18
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-34
• 3.1 高脂飲食對 apoE (-/-)小鼠血漿 TC、TG、LDL-C 和 HDL-C 含量的影響18
• 3.2 高脂飲食對 apoE (-/-)小鼠海馬脂質(zhì)蓄積的影響18-19
• 3.3 高脂飲食對 apoE (-/-)小鼠海馬顯微形態(tài)學(xué)的影響19
• 3.4 高脂飲食對 apoE (-/-)小鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響19-20
• 3.5 高脂飲食對 apoE (-/-)小鼠海馬神經(jīng)元 Bcl-2、Bax 和 Caspase3 表達(dá)的影響20-22
• 3.6 高脂飲食對 apoE (-/-)小鼠海馬神經(jīng)元 PCSK9、BACE1 表達(dá)的影響22-24
• 3.7 高脂飲食對 apoE (-/-)小鼠海馬 SP 沉積的影響24
• 3.8 oxLDL 對 PC12 細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的影響24-25
• 3.9 oxLDL 對 PC12 細(xì)胞凋亡的影響25
• 3.10 oxLDL 對 PC12 細(xì)胞 PCSK9 表達(dá)的影響25-26
• 3.11 熒光標(biāo)記的 siRNA （cy3-siRNA） 轉(zhuǎn)染的結(jié)果鑒定26-27
• 3.12 PCSK9 siRNA 對 PC12 細(xì)胞 PCSK9 表達(dá)的影響27
• 3.13 PCSK9 siRNA 對 oxLDL 誘導(dǎo)的 PC12 細(xì)胞凋亡的影響27-29
• 3.14 PCSK9 siRNA 對 oxLDL 處理的 PC12 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響29-30
• 3.15 oxLDL 對 PC12 細(xì)胞 BACE1 表達(dá)的影響30-31
• 3.16 oxLDL 對 PC12 細(xì)胞分泌 Aβ的影響31-32
• 3.17 PCSK9 siRNA 對 oxLDL 處理的 PC12 細(xì)胞 PCSK9 及 BACE1 表達(dá)的影響32
• 3.18 PCSK9 siRNA 對 oxLDL 處理的 PC12 細(xì)胞分泌 Aβ的影響32-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 主要英文縮略語索引43-44
• 綜述44-54
• References50-54
• 附件54-56
• 基金資助56-57
• 碩士期間發(fā)表論文57-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉錄山;謝閔;姜志勝;楊瓊;潘利紅;武春艷;唐志晗;唐朝克;危當(dāng)恒;王佐;;pcsk9 siRNA對oxLDL誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞凋亡的影響[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2009年03期

本文編號：593783