本文關鍵詞：NR2B的表達與酒精戒斷綜合征的關系研究

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【摘要】：背景酒精是一種常見的成癮物質,慢性酒精暴露會導致大腦功能的適應性改變,一旦突然減少飲酒量或停飲會出現(xiàn)特有的戒斷反應,如易激惹、攻擊性強、食欲減退,甚至出現(xiàn)癲癇發(fā)作等,其發(fā)病機制尚未明確。有研究表明表觀遺傳學修飾參與了酒依賴的病理過程。既往研究提示NMDA受體尤其是NR2B亞基與酒精戒斷綜合征的關系密切,但對NR2B基因表達的表觀修飾調控研究結果不一。本研究將從組蛋白乙�；矫嫣接慛R2B的表達情況及其與酒精戒斷綜合征的關系。目的1.建立慢性酒精暴露的動物模型,觀察慢性酒精暴露后不同戒斷時間點大鼠的行為學變化。2.檢測慢性酒精暴露后不同戒斷時間點大鼠海馬NR2B蛋白、NR2Bm RNA表達水平及NR2B基因啟動子區(qū)組蛋白H3K9乙�；�。3.探討表觀修飾對酒精戒斷綜合征的影響。方法1.雄性Wistar大鼠72只,隨機分為6組,分別為:戒斷2h組、戒斷6h組、戒斷12h組、戒斷1d組、戒斷3d組和正常對照組,每組12只。5個戒斷組大鼠自由飲用6%(v/v)的酒精水溶液16周,正常對照組大鼠飲用純凈水16周。2.戒斷組分別于末次飲酒后2h、6h、12h、1d、3d時,正常對照組于末次飲水后2h時,評估戒斷綜合征后處死大鼠取腦組織制備實驗樣品。3.采用免疫熒光和免疫蛋白印跡(western blot)法檢測各組大鼠海馬NR2B蛋白表達水平。4.采用實時熒光定量逆轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)法檢測各組大鼠海馬NR2Bm RNA表達水平。5.采用染色質共沉淀(CHIP)法檢測各組大鼠海馬NR2B基因啟動子區(qū)組蛋白H3K9乙�；�。結果1.行為學結果:本實驗記錄飲酒組大鼠平均每天飲用6%(v/v)酒精水溶液155.93ml/kg體重,相當于攝入純酒精7.39g/kg體重,整個實驗過程中每天的飲酒量變化不大。實驗前對照組大鼠體重(264.00±15.20)g與飲酒組大鼠體重(264.40±13.15)g相比差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。至實驗結束時,對照組大鼠體重(454.71±14.16)g與飲酒組大鼠體重(447.69±56.38)g相比差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。大鼠在飲酒期間較為溫順,不易激惹,攻擊性行為較少;酒精撤除后,大鼠出現(xiàn)打噴嚏、理毛、咀嚼、易激惹、尾巴強直、低頭拱背、聽源性癲癇發(fā)作強度增加。在戒斷2h(10.42±2.50)、6h(15.42±1.93)、12h(9.25±2.01)、1d(7.67±1.92)組,其戒斷綜合征評分均顯著高于正常對照組(1.50±0.80)(P㩳0.05),以戒斷6h組評分最高,隨后逐漸減小,戒斷3d(2.25±0.87)時戒斷綜合征評分與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。2.免疫熒光結果:戒斷2h、6h、12h、1d組大鼠海馬NR2B平均熒光強度分別為(1411.36±210.72)、(987.38±104.32)、(823.62±48.14)和(554.71±73.13),與正常對照組(378.56±67.65)相比明顯增多,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05),戒斷3d組(437.24±123.76)表達也有增多,但與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。3.Western blot結果:戒斷2h、6h、12h、1d組海馬NR2B蛋白表達水平分別為(2.201±0.375)、(1.535±0.137)、(1.117±0.149)和(0.677±0.054),與正常對照組(0.481±0.085)相比明顯增多,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05),戒斷3d組(0.530±0.113)表達水平也有增高,但與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。4.實時熒光定量PCR結果:戒斷2h、6h、12h、1d組海馬NR2Bm RNA表達水平分別為(0.330±0.046)、(0.242±0.059)、(0.202±0.044)和(0.179±0.039),與正常對照組(0.130±0.022)相比明顯增多,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05),戒斷3d組(0.154±0.022)轉錄水平也有增高,但與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。5.染色質共沉淀結果:戒斷2h、6h、12h、1d組海馬NR2B基因啟動子區(qū)組蛋白H3K9乙�；椒謩e為(22.258±2.951)、(17.200±0.890)、(15.028±1.348)和(13.572±1.778),與正常對照組(8.949±1.211)相比明顯增多,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05),戒斷3d組H3K9乙�；�(9.458±1.402)也有增高,但與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。6.相關性分析結果:戒斷綜合征評分與大鼠海馬NR2B蛋白表達水平呈正相關(r=0.522,P㩳0.01);大鼠海馬NR2B蛋白表達水平與NR2Bm RNA表達水平呈正相關(r=0.746,P㩳0.01);大鼠海馬NR2Bm RNA表達水平與NR2B基因啟動子區(qū)組蛋白H3K9乙�；匠收嚓P(r=0.659,P㩳0.01);大鼠海馬NR2B基因啟動子區(qū)組蛋白H3K9乙�；脚c戒斷綜合征評分呈正相關(r=0.479,P㩳0.01)。結論1.慢性酒精暴露戒斷后大鼠海馬NR2B蛋白、NR2Bm RNA表達水平、NR2B基因啟動子區(qū)組蛋白H3K9乙�；骄险{。2.NR2B基因啟動子區(qū)組蛋白H3K9乙�；{控NR2B基因轉錄水平進而影響NR2B蛋白表達的改變很可能是酒精戒斷綜合征的重要機制之一。背景紋狀體作為獎賞通路的重要組成部分,在酒依賴相關行為表征改變方面有極其重要的作用,已成為慢性酒精暴露研究的重要腦區(qū)。NMDA受體是酒精在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要作用靶點,其受體亞基NR2B與酒精戒斷綜合征關系密切。本研究擬分析慢性酒精暴露后大鼠紋狀體不同戒斷時間點NR2B表達的改變與戒斷綜合征的相關性,探討酒精戒斷綜合征的相關機制。目的1.建立慢性酒精暴露動物模型,觀察不同戒斷時間點大鼠的行為變化。2.檢測不同戒斷時間點大鼠紋狀體NR2B蛋白及NR2Bm RNA的表達變化。3.探討酒精戒斷綜合征的相關機制。方法1.雄性Wistar大鼠72只,隨機分為6組,分別為:戒斷2h組、戒斷6h組、戒斷12h組、戒斷1d組、戒斷3d組和正常對照組,每組12只。5個戒斷組大鼠自由飲用6%(v/v)的酒精水溶液16周,正常對照組大鼠飲用純凈水16周。2.戒斷組分別于末次飲酒后2h、6h、12h、1d、3d時,正常對照組于末次飲水后2h時,評估戒斷綜合征后處死大鼠取腦組織制備實驗樣品。3.采用免疫熒光法和western blot檢測各組大鼠紋狀體NR2B蛋白表達水平。4.采用實時熒光定量PCR法檢測各組大鼠紋狀體NR2Bm RNA表達水平。結果1.行為學結果:同第一部分。2.免疫熒光結果:戒斷2h、6h、12h、1d組大鼠紋狀體NR2B平均熒光強度分別為(2710.56±194.21)、(5035.16±234.41)、(3326.23±378.16)、(2570.64±177.88),與正常對照組(2210.00±178.20)相比明顯增多,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05),戒斷3d組(2021.10±184.43)與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。3.Western blot結果:戒斷2h、6h、12h、1d組大鼠紋狀體NR2B蛋白表達水平分別為(0.186±0.012)、(1.444±0.134)、(0.771±0.085)、(0.173±0.013),與正常對照組(0.151±0.010)相比明顯增多,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05),戒斷3d組(0.148±0.011)與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。4.實時熒光定量PCR結果:戒斷2h、6h、12h、1d組大鼠紋狀體NR2Bm RNA表達水平分別為(0.028±0.003)、(0.316±0.049)、(0.238±0.033)、(0.022±0.004),與正常對照組(0.007±0.001)相比明顯增多,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05),戒斷3d組(0.012±0.004)與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。5.相關性分析結果:戒斷綜合征評分與NR2B蛋白表達水平呈正相關(r=0.683,P㩳0.01);NR2B蛋白表達水平與NR2Bm RNA表達水平呈正相關(r=0.929,P㩳0.01);NR2Bm RNA表達水平與戒斷綜合征評分(r=0.645,P㩳0.01)呈正相關。結論1.慢性酒精暴露后不同戒斷時間點大鼠紋狀體NR2B蛋白表達及基因轉錄水平均上調;2.大鼠紋狀體NR2B基因轉錄水平的改變進而引起NR2B蛋白表達水平的改變可能是酒精戒斷綜合征的重要調控機制之一。
【關鍵詞】：酒精 NR2B 戒斷綜合征 組蛋白修飾 海馬 紋狀體
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R749.62
【目錄】：

• 摘要5-10
• Abstract10-17
• 第一部分 大鼠海馬NR2B基因啟動子區(qū)組蛋白H3K9乙�；{控與酒精戒斷綜合征的關系研究17-51
• 前言17-23
• 1 材料與方法23-39
• 2 結果39-47
• 3 討論47-49
• 4 小結49-50
• 5 展望50-51
• 第二部分 大鼠紋狀體NR2B的表達與酒精戒斷綜合征的關系研究51-58
• 前言51
• 1 材料與方法51
• 2 結果51-56
• 3 討論56-57
• 4 小結57
• 5 展望57-58
• 參考文獻58-64
• 綜述：酒精對不同腦區(qū) NR2B 表達影響的研究進展64-71
• 參考文獻68-71
• 附錄：中英文詞匯對照表71-72
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況72-73
• 致謝73-74
• 個人簡歷74

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本文編號：593884