本文關(guān)鍵詞：人孤獨癥相關(guān)基因NRXN1β啟動子區(qū)相關(guān)功能初步分析

  更多相關(guān)文章： NRXN1β 啟動子 熒光素酶報告系統(tǒng) 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點

【摘要】：目的定義NNRXN1β基因的最小啟動子區(qū)和調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的功能元件。方法首先通過構(gòu)建含有NRXN1β基因上游調(diào)控區(qū)不同區(qū)域基因組序列的熒光素酶報告基因質(zhì)粒,利用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測報告基因的轉(zhuǎn)錄活性以確定NRXN1β基因最小啟動子區(qū)域,再進一步篩選出相應(yīng)的顯著增強或抑制報告基因活性的功能區(qū)；然后利用基因定點突變技術(shù)對功能區(qū)內(nèi)和功能區(qū)臨近DNA序列進行連續(xù)的堿基突變,并分析這些突變對報告基因活性的作用；最后結(jié)合在線轉(zhuǎn)錄因子預測軟件PROMO,對功能區(qū)內(nèi)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控位元件進行初步分析。結(jié)果成功構(gòu)建了含有不同啟動子區(qū)域和含有突變的兩個系列的NRXN1β啟動子-熒光素酶報告基因,相對熒光素酶活性結(jié)果顯示p4NRXN1β-88/+668(9.63±1.46)與p4NRXN1β-73/+668(2.08±0.51)相比、p4NRXN1β-106/+156(27.07±3.90)與p4NRXN1β-106/+149 (4.99±O.79)相比、p4NRXN1β-106/+229(25.20±4.67)與p4NRXN1β-106/++419(12.53±1.51)相比,3組數(shù)據(jù)前者的熒光素酶活性都高于后者,具有統(tǒng)計學差異(P0.05)；為了評估-88/-73功能區(qū)及臨近堿基,利用基因定點突變技術(shù)成功構(gòu)建了一系列的含有突變堿基的質(zhì)粒,雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測結(jié)果發(fā)現(xiàn),-84/-63區(qū)域內(nèi)突變的質(zhì)粒與未突變相比活性降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),應(yīng)用生物信息學技術(shù)對該區(qū)域內(nèi)可能存在的轉(zhuǎn)錄調(diào)控位點進行了初步分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)該區(qū)域可以結(jié)合2個轉(zhuǎn)錄因子DBP和ABF1。結(jié)論NRXN1β基因最小啟動子區(qū)位于-88/+156；含有兩個正性作用功能區(qū)-88/-73、+156/+149,功能區(qū)-84/-63可能含有2個轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點。
【關(guān)鍵詞】：NRXN1β 啟動子 熒光素酶報告系統(tǒng) 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R749.94
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-12
• 1 材料與方法12-18
• 1.1 材料12
• 1.2 方法12-18
• 2 結(jié)果18-32
• 2.1 確定具有最小啟動子活性的5’側(cè)翼邊界,發(fā)現(xiàn)功能區(qū)-88/-73 @1418-24
• 2.2 確定具有最小啟動子活性的3’側(cè)翼邊界,發(fā)現(xiàn)功能區(qū)+149/+156和+229/+41924-27
• 2.3 分析具有增強啟動子活性功能區(qū)-88/-73的堿基功能27-31
• 2.4 NRXN1β基因功能區(qū)-84/-63內(nèi)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控位點分析31-32
• 3 討論32-36
• 參考文獻36-38
• 全文總結(jié)38-39
• 文獻綜述39-46
• 參考文獻43-46
• 致謝46-47
• 攻讀學位期間的研究成果及發(fā)表的學術(shù)論文目錄47

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本文編號：555383