【研究背景及目的】目前臨床上一線抗抑郁藥物具有療效欠佳、起效延遲的缺點。氯胺酮可產(chǎn)生快速持久的抗抑郁效應,但其副作用限制了臨床應用。因此,闡明氯胺酮抗抑郁效應神經(jīng)分子機制對于發(fā)現(xiàn)新型快速起效抗抑郁作用靶點具有重要意義。目前氯胺酮抗抑郁效應神經(jīng)機制研究均圍繞神經(jīng)元為中心展開。本研究從神經(jīng)元-星形膠質(zhì)細胞互作的角度,驗證了“氯胺酮上調(diào)谷氨酸轉(zhuǎn)運體1（Glutamate transporter,GLT-1）依賴的星形膠質(zhì)細胞源性乳酸生成與釋放介導其抗抑郁效應”的科學假說,揭示了氯胺酮抗抑郁效應的新機制�！痉椒ā坎捎帽壬z測腦組織乳酸水平;Elisa法檢測腦組織糖原磷酸化酶a（Glycogen phosphorylase a,GPa）水平,以評價GP活性;采用Western Blot檢測腦組織星形膠質(zhì)細胞活化的標志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein,GFAP）、GLT-1和GP蛋白表達水平;采用氟代檸檬酸（Fluorocitrate,FC）選擇性失活星形膠質(zhì)細胞;采用L-α-氨基己二酸（L-alpha-aminoadipic acid,L-AA... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

觀察氯胺酮對海馬乳酸水平與GP活性及GFAP、GLT-1、GP表達水平上調(diào)作用的實

南華大學碩士學位論文20程見圖2.1。圖2.1觀察氯胺酮對海馬乳酸水平與GP活性及GFAP、GLT-1、GP表達水平上調(diào)作用的實驗流程圖2.10.2觀察失活或清除星形膠質(zhì)細胞對氯胺酮抗抑郁效應的阻斷作用(1)觀察失活星形膠質(zhì)細胞對氯胺酮抗抑郁效應的阻斷作用大鼠麻醉，行側(cè)腦室置管術(shù)，術(shù)后恢復1周�；謴推诮Y(jié)束后第1天，大鼠行強迫游泳訓練15min；第2天行強迫游泳測試(FST)以評價大鼠抑郁樣行為，在強迫游泳測試前30min、40min及90min分別注射氯胺酮(10mg/kg，i.p.)、L-乳酸(50nmol/2μl/rat，i.c.v)及星形膠質(zhì)細胞失活劑FC(1nmol/1μl/rat，i.c.v)或相應溶媒，強迫游泳測試前60min行曠場測試(OFT)以評價大鼠自發(fā)活動能力。實驗流程見圖2.2。圖2.2觀察失活星形膠質(zhì)細胞對氯胺酮抗抑郁效應的阻斷作用的實驗流程圖(2)觀察清除星形膠質(zhì)細胞對氯胺酮抗抑郁效應的阻斷作用L-AAA具有選擇性星形膠質(zhì)細胞毒性，能劑量與時間依賴的清除星形膠質(zhì)細胞。低劑量腦內(nèi)微量注射L-AAA造成快速(2-4小時)短時間內(nèi)(大約持續(xù)72小時)部分星形膠質(zhì)細胞被選擇性清除，隨后經(jīng)過再殖恢復正常[81]。我們首先檢測了在星形膠質(zhì)細胞清除期氯胺酮的抗抑郁效應。大鼠麻醉，行側(cè)腦室置管術(shù)，術(shù)后恢復1周�；謴推诮Y(jié)束后第1-2天，連續(xù)兩天經(jīng)側(cè)腦室注射L-AAA(25μg/2

第2章材料和方法21μl/rat)或溶媒，1天1次；第3天，大鼠行強迫游泳訓練15min。部分大鼠在強迫游泳訓練后24h(第4天)，麻醉、灌流、固定、取腦，行免疫熒光檢測海馬區(qū)星形膠質(zhì)細胞(GFAP標記)與神經(jīng)元(NeuN標記)數(shù)量。部分大鼠在強迫游泳訓練后24h(第4天)，行強迫游泳測試(FST)以評價大鼠抑郁樣行為，在強迫游泳測試前30min及40min分別注射氯胺酮(10mg/kg，i.p.)及L-乳酸(50nmol/2μl/rat,i.c.v)或相應溶媒，并在強迫游泳測試前60min，行曠場測試(OFT)以評價大鼠自發(fā)活動能力。實驗流程見圖2.3A。為排除L-AAA可能通過產(chǎn)生非特異性作用影響氯胺酮抗抑郁效應，我們進一步檢測了在星形膠質(zhì)細胞恢復期氯胺酮的抗抑郁效應。大鼠麻醉，行側(cè)腦室置管術(shù)，術(shù)后恢復1周�；謴推诮Y(jié)束后第1-2天，連續(xù)兩天經(jīng)側(cè)腦室注射L-AAA(25μg/2μl/rat)或溶媒，1天1次；第8天，大鼠行強迫游泳訓練15min。部分大鼠在強迫游泳訓練后24h(第9天)，麻醉、灌流、固定、取腦，行免疫熒光檢測海馬區(qū)星形膠質(zhì)細胞(GFAP標記)與神經(jīng)元(NeuN標記)數(shù)量。部分大鼠在強迫游泳訓練后24h(第8天)，行強迫游泳測試(FST)以評價大鼠抑郁樣行為，在強迫游泳測試前30min注射氯胺酮(10mg/kg，i.p.)或溶媒，并在強迫游泳測試前60min，行曠場測試(OFT)以評價大鼠自發(fā)活動能力。實驗流程見圖2.3B。圖2.3觀察清除星形膠質(zhì)細胞對氯胺酮抗抑郁效應的阻斷作用的實驗流程圖(A)觀察星形膠質(zhì)細胞清除期對氯胺酮抗抑郁效應的影響(左)；(B)觀察星形膠質(zhì)細胞恢復期對氯胺酮抗抑郁效應的影響(右)。2.10.3觀察抑制GLT-1對氯胺酮上調(diào)海馬GP活性與GFAP、GP表達水平及抗抑郁效應的阻斷作用大鼠麻醉，行側(cè)腦室置管術(shù)，術(shù)后恢復1周�；謴推诮Y(jié)束后第1天，大鼠行15min強迫游泳訓練。部分大鼠在第二天行強迫游泳測試(FST

【參考文獻】：
期刊論文
[1]氯胺酮快速抗抑郁作用及機制[J]. 張凱,王國強,趙敏.  中國藥物濫用防治雜志. 2018(03)



本文編號：3443654