流行病學(xué)研究顯示,過量飲酒對認(rèn)知功能有損傷作用,并可能增加神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默病的患病風(fēng)險(xiǎn)。在人體內(nèi),大部分?jǐn)z入乙醇在肝臟細(xì)胞中通過乙醇脫氫酶的代謝作用生成乙醛,繼而被乙醛脫氫酶（acetaldehyde dehydrogenase,ALDH）2代謝為乙酸。約30%-50%的亞洲人為aldh2基因缺陷型。相對于攜帶aldh2野生型基因的人群來說,aldh2基因缺陷型人群飲酒后血液中乙醛的含量更高。作為毒性最強(qiáng)的乙醇代謝物,乙醛在過量飲酒引起的神經(jīng)毒性中起著關(guān)鍵性的作用,但其機(jī)制尚不明確。本論文利用細(xì)胞模型對乙醛誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞毒性及其分子機(jī)制進(jìn)行詳細(xì)探討,為預(yù)防過量飲酒導(dǎo)致的神經(jīng)毒性及相關(guān)疾病提供潛在的藥物靶點(diǎn)。本論文利用trypan blue染色及凋亡實(shí)驗(yàn)研究了乙醛對神經(jīng)細(xì)胞的毒性作用,結(jié)果表明乙醛顯著抑制細(xì)胞存活率,并能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。利用蛋白印跡實(shí)驗(yàn)對調(diào)控細(xì)胞生存的內(nèi)在分子機(jī)制進(jìn)行探究,結(jié)果顯示乙醛顯著抑制細(xì)胞生存相關(guān)通路中關(guān)鍵蛋白Akt及其下游CREB的活化,降低ERK的激活水平,調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白水平。對胞內(nèi)活性氧進(jìn)行特異性標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,乙醛誘導(dǎo)胞內(nèi)活性氧水平顯... 

【文章來源】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：157 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 課題研究背景及意義
    1.2 酒精在人體內(nèi)的代謝及危害
        1.2.1 乙醇及乙醛在人體內(nèi)的代謝
        1.2.2 過度飲酒與神經(jīng)系統(tǒng)損傷
    1.3 細(xì)胞凋亡及相關(guān)信號通路
        1.3.1 細(xì)胞凋亡
        1.3.2 凋亡相關(guān)信號通路
    1.4 線粒體損傷及其機(jī)制
        1.4.1 線粒體損傷與線粒體動態(tài)平衡
        1.4.2 線粒體損傷與氧化應(yīng)激
        1.4.3 線粒體損傷與Ca~(2+)信號通路
        1.4.4 線粒體損傷與自噬
    1.5 本課題的主要研究內(nèi)容及技術(shù)路線
        1.5.1 主要研究內(nèi)容
        1.5.2 技術(shù)路線
第2章 實(shí)驗(yàn)材料和研究方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 研究對象
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 主要溶液及其配制
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)溶液及其配制
        2.2.2 Western Blot相關(guān)溶液及其配制
    2.3 細(xì)胞培養(yǎng)及處理
    2.4 Trypan blue染色實(shí)驗(yàn)
    2.5 Crystal violet實(shí)驗(yàn)
    2.6 MTT細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)
    2.7 Hoechst33258細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
    2.8 細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測
        2.8.1 細(xì)胞內(nèi)總ROS檢測實(shí)驗(yàn)
        2.8.2 線粒體ROS檢測實(shí)驗(yàn)
    2.9 線粒體相關(guān)實(shí)驗(yàn)
        2.9.1 線粒體膜電位檢測實(shí)驗(yàn)
        2.9.2 ATP水平檢測實(shí)驗(yàn)
        2.9.3 線粒體形態(tài)檢測實(shí)驗(yàn)
        2.9.4 線粒體質(zhì)量檢測實(shí)驗(yàn)
        2.9.5 線粒體分離實(shí)驗(yàn)
        2.9.6 線粒體與溶酶體共定位實(shí)驗(yàn)
    2.10 Ca~(2+)水平檢測實(shí)驗(yàn)
    2.11 Western blot實(shí)驗(yàn)
        2.11.1 蛋白樣品的處理
        2.11.2 Tris-Glycine-SDS-PAGE凝膠電泳及轉(zhuǎn)膜
        2.11.3 抗體孵育與顯影
    2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法
第3章 乙醛對神經(jīng)細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用
    3.1 引言
    3.2 乙醛的細(xì)胞毒性
        3.2.1 乙醛對神經(jīng)細(xì)胞存活率的影響
        3.2.2 乙醛對神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響
    3.3 乙醛對Akt-CREB信號通路的調(diào)節(jié)
    3.4 乙醛對MAPK家族蛋白激活的調(diào)節(jié)
    3.5 乙醛引起神經(jīng)細(xì)胞ROS水平的升高
    3.6 抗氧化劑抑制乙醛誘導(dǎo)的ROS水平上升及細(xì)胞毒性
        3.6.1 抗氧化劑抑制乙醛誘導(dǎo)的ROS水平上升
        3.6.2 抗氧化劑抑制乙醛誘導(dǎo)的凋亡現(xiàn)象
        3.6.3 抗氧化劑對線粒體凋亡途徑蛋白水平的調(diào)控
    3.7 本章小結(jié)
第4章 乙醛對神經(jīng)細(xì)胞線粒體的損傷作用
    4.1 引言
    4.2 乙醛對神經(jīng)細(xì)胞線粒體功能的影響
        4.2.1 乙醛對細(xì)胞活性的影響
        4.2.2 乙醛對線粒體膜電位的影響
        4.2.3 乙醛對細(xì)胞ATP合成的影響
    4.3 乙醛對線粒體形態(tài)的影響
    4.4 乙醛對細(xì)胞及線粒體ROS水平的影響
    4.5 乙醛對胞內(nèi)Ca~(2+)水平的影響
    4.6 本章小結(jié)
第5章 乙醛誘導(dǎo)線粒體損傷的內(nèi)在機(jī)制
    5.1 引言
    5.2 乙醛對線粒體融合相關(guān)蛋白的影響
    5.3 乙醛對線粒體分裂相關(guān)蛋白的影響
        5.3.1 乙醛對全細(xì)胞蛋白中Drp1活化水平的影響
        5.3.2 乙醛對Drp1亞細(xì)胞定位的影響
    5.4 抗氧化劑對乙醛細(xì)胞毒性的抑制作用
        5.4.1 抗氧化劑對ROS水平的抑制作用
        5.4.2 抗氧化劑對細(xì)胞活性的促進(jìn)作用
        5.4.3 抗氧化劑對Drp1蛋白活化水平的抑制作用
    5.5 JNK和p38 MAPK對Drp1活化水平的促進(jìn)作用
        5.5.1 抗氧化劑對JNK和p38 MAPK激活水平的抑制作用
        5.5.2 JNK和p38 MAPK抑制劑對Drp1磷酸化的抑制作用
    5.6 Ca~(2+)信號通路在乙醛誘導(dǎo)細(xì)胞毒性中的作用
        5.6.1 BAPTA-AM對胞內(nèi)Drp1活化水平的抑制
        5.6.2 KN-93對乙醛細(xì)胞毒性的影響
        5.6.3 抗氧化劑對Ca~(2+)信號通路的阻斷作用
    5.7 本章小結(jié)
第6章 乙醛對線粒體自噬的影響
    6.1 引言
    6.2 乙醛對自噬水平的影響
        6.2.1 乙醛對線粒體自噬的誘導(dǎo)
        6.2.2 乙醛對自噬相關(guān)蛋白水平的影響
        6.2.3 乙醛對線粒體自噬相關(guān)蛋白水平的影響
    6.3 抗氧化劑對線粒體自噬現(xiàn)象的抑制作用
        6.3.1 抗氧化劑對自噬相關(guān)蛋白水平的影響
        6.3.2 抗氧化劑對線粒體自噬相關(guān)蛋白水平的影響
    6.4 本章小結(jié)
結(jié)論
展望
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及其他成果
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：3203615