發(fā)布時(shí)間：2021-04-21 10:57

　　阿爾茨海默氏�。ˋlzheimer’s disease,AD）是一種最常見的神經(jīng)退行性疾病。遺傳因素、環(huán)境因素和年齡是AD發(fā)生和發(fā)展的主要因素,年齡在65歲以上的老年人群中,大約每50人中就有一位患有癡呆癥。鑒于現(xiàn)如今全球老齡化趨勢(shì)逐漸加重,勢(shì)必會(huì)對(duì)我們的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)提出更高的要求。因此積極研發(fā)治療AD的藥物就顯得愈發(fā)刻不容緩。AD主要的病理學(xué)標(biāo)志是胞外b-淀粉樣蛋白的沉積或淀粉樣斑塊（Senile plaque,SP）和胞內(nèi)神經(jīng)元纖維纏結(jié)（Neurofibrillary tangles,NTFs）,其中淀粉樣斑塊主要由淀粉樣前體蛋白（APP）被β和γ分泌酶順序切割后產(chǎn)生的Aβ42聚集形成;神經(jīng)元纖維纏結(jié)主要由過度磷酸化的Tau蛋白（微管相關(guān)蛋白）聚集形成。目前,治療AD的主要療法是依據(jù)β-淀粉樣蛋白假說提出的靶向β-淀粉樣蛋白的療法。本論文在前期研究中獲得的一種抗Aβ寡聚體的單鏈抗體ZZ6的基礎(chǔ)上,依據(jù)構(gòu)象模擬與分子對(duì)接結(jié)果,發(fā)現(xiàn)在ZZ6的43、226、241與244位點(diǎn)處與Aβ42形成了一個(gè)環(huán)繞的結(jié)合部位,但是由于空間位阻過大且兩者之間并沒有形成有效的氫鍵,因此,我們針對(duì)此4個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 阿爾茨海默氏病
        1.1.1 淀粉樣蛋白級(jí)聯(lián)假說與神經(jīng)病理學(xué)
            1.1.1.1 淀粉樣蛋白級(jí)聯(lián)假說
            1.1.1.2 AD病理生理學(xué)
        1.1.2 臨床癥狀與AD的診斷治療
            1.1.2.1 臨床癥狀
            1.1.2.2 AD的診斷與治療方法
        1.1.3 APP的切割及Aβ42的產(chǎn)生
        1.1.4 Aβ的聚集及其神經(jīng)毒性
        1.1.5 AD的遺傳因子及風(fēng)險(xiǎn)因子
    1.2 人工單鏈抗體（single chain antibody fragment,scFv）
        1.2.1 人工單鏈抗體簡介
        1.2.2 本論文思路
第二章 單鏈抗體與Aβ42的制備
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 菌種
        2.2.2 試劑
        2.2.3 主要儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 單鏈抗體ZZ6 突變體重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.2 單鏈抗體的誘導(dǎo)表達(dá)及純化
        2.3.3 Aβ42的制備
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 單鏈抗體ZZ6突變體重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.4.2 單鏈抗體的誘導(dǎo)表達(dá)及純化
        2.4.3 Aβ42的制備
    本章小結(jié)
第三章 靶向β-淀粉樣蛋白的單鏈抗體的性質(zhì)與功能分析
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 材料
        3.2.2 試劑
        3.2.3 主要儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 單鏈抗體對(duì)Aβ42寡聚體（表觀）結(jié)合力的檢測(cè)
        3.3.2 單鏈抗體對(duì)Aβ42寡聚體（表觀）親和力常數(shù)的測(cè)定
        3.3.3 單鏈抗體對(duì)Aβ42聚集的抑制作用分析
        3.3.4 單鏈抗體抑制Aβ42對(duì)細(xì)胞毒性作用的檢測(cè)
        3.3.5 單鏈抗體與Aβ42相互作用產(chǎn)物分析
            3.3.5.1 反相高效液相色譜法測(cè)定單鏈抗體與Aβ42相互作用產(chǎn)物
            3.3.5.2 Western Blot法測(cè)定單鏈抗體與Aβ42相互作用產(chǎn)物
        3.3.6 單鏈抗體維系細(xì)胞遷移性的分析
            3.3.6.1 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)（Cell Wound Healing Assay）
            3.3.6.2 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（Transwell Assay）
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 單鏈抗體對(duì)Aβ42寡聚體（表觀）結(jié)合力的檢測(cè)
        3.4.2 單鏈抗體對(duì)Aβ42寡聚體（表觀）親和力常數(shù)的測(cè)定
        3.4.3 單鏈抗體對(duì)Aβ42聚集的抑制作用分析
        3.4.4 單鏈抗體抑制Aβ42對(duì)細(xì)胞毒性作用的檢測(cè)
        3.4.5 單鏈抗體與Aβ42相互作用產(chǎn)物分析
            3.4.5.1 反相高效液相色譜法測(cè)定單鏈抗體與Aβ42相互作用產(chǎn)物
            3.4.5.2 Western Blot法測(cè)定單鏈抗體與Aβ42相互作用產(chǎn)物
        3.4.6 Aβ42寡聚體存在的情況下單鏈抗體對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞遷移的影響
            3.4.6.1 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)（Cell Wound Healing Assay）
            3.4.6.2 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（Transwell Assay）
    本章小結(jié)
結(jié)論與討論
附件1
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3151634