在阿爾茲海默癥（Alzheimer’s disease,AD）中,寡聚態(tài)Aβ會(huì)造成突觸傳遞受損,其機(jī)制之一為神經(jīng)遞質(zhì)釋放異常。在本項(xiàng)研究中,我們發(fā)現(xiàn)寡聚態(tài)Aβ引起的代謝型谷氨酸受體（metabotropic glutamate receptor 5,mGluR5）過(guò)度激活會(huì)使磷脂酰肌醇 4,5 二磷酸（phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate,PIP2）水平降低,最終造成神經(jīng)遞質(zhì)的釋放幾率下降。而抑制mGluR5的激活,可以阻止外源性寡聚態(tài)Aβ42引起的PIP2含量減少,使神經(jīng)遞質(zhì)的釋放幾率明顯回升。通過(guò)在原代培養(yǎng)的小鼠海馬神經(jīng)元中加入外源性寡聚態(tài)Aβ42,我們發(fā)現(xiàn)PIP2在軸突上的分布顯著下降,并且電生理實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示寡聚態(tài)Aβ42能夠抑制小鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元微小興奮性突觸后電流（excitatory postsynaptic currents,mEPSCs）的頻率和神經(jīng)遞質(zhì)釋放幾率,而神經(jīng)遞質(zhì)釋放位點(diǎn)的數(shù)量并沒(méi)有發(fā)生變化。進(jìn)一步的研究表明,抑制調(diào)控PIP2水解的磷脂酶C（phospholipase C,PLC）,可以阻斷寡聚態(tài)Aβ42造成的PI... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖３．１寡聚態(tài)Ａ｜ｉ４２明顯抑制海馬ＣＡ１區(qū)錐體神經(jīng)元ｍＥＰＳＣｓ的幅度和鏔率

共聚焦熒光顯微鏡進(jìn)行拍攝記錄。染色結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，在孵育液中急性??給予４００?ｎＭ寡聚態(tài)八卩４２處理２０?ｍｉｎ后，海馬神經(jīng)元的活性突觸終末扣數(shù)量并沒(méi)??有明顯變化（圖３．２?Ａ，Ｂ）。這一結(jié)果表明，納摩爾級(jí)寡聚態(tài)Ａｐ４２對(duì)ｍＥＰＳＣｓ頻??率的影響與突觸前遞質(zhì)釋放位點(diǎn)的數(shù)量無(wú)關(guān)。??Ａ?ＡＰ?Ｂ??圖３．２寡聚態(tài)Ａｐ？對(duì)離體海馬神經(jīng)元活性突觸終末扣數(shù)量沒(méi)有明顯影響。（Ａ）離體培養(yǎng)的海??馬神經(jīng)元對(duì)照姐和寡聚態(tài)Ａ（３４２處理組活性突觸終末扣ＦＭ１－４３標(biāo)記的典型圖。Ｂａｒ＝５０?ｐｎ。??（Ｂ）對(duì)照組與寡聚態(tài)Ａｐ４２處理組海馬神經(jīng)元活性突觸終末扣ＦＭ１－４３標(biāo)記的數(shù)量統(tǒng)計(jì)圖。??對(duì)照繼，ｎ?＝?１１；寡聚態(tài)?Ａ０４２?處理組，ｎ?＝?１１。／－ｔｅｓｔ。Ｄａｔａ?ａｒｅ?ｍｅａｎ?土?ＳＥＭ。??３．３納摩爾級(jí)寡聚態(tài)Ａｐ４２對(duì)小鼠海馬ＣＡ１區(qū)興奮性突觸前遞質(zhì)釋放??幾率有明顯抑制作用??由于寡聚態(tài)Ａｐ４２對(duì)突觸前遞質(zhì)釋放位點(diǎn)數(shù)量沒(méi)有影響，那么ｍＥＰＳＣｓ頻率的??降低很有可能是突觸遞質(zhì)釋放幾率的變化造成的。我們?cè)谛∈蠛ｑR腦片上進(jìn)行了??雙脈沖異化（ｐａｉｒｅｄ－ｐｕ丨ｓｅ?ｆａｃｉｌｉｔａｔｉｏｎ，?ＰＰＦ）實(shí)驗(yàn)，即用全細(xì)胞模式記錄ＣＡ１區(qū)錐??體神經(jīng)元時(shí)，在距記錄細(xì)胞３００?（ａｍ的位置上放置雙極刺激電極，通過(guò)給予相差５０??１９??

?實(shí)驗(yàn)結(jié)果??ｍｓ的兩個(gè)刺激后記錄到的兩個(gè)ＥＰＳＣｓ?（圖３．３Ａ）。這兩個(gè)ＥＰＳＣ幅度的比值與神??經(jīng)遞質(zhì)釋放幾率成反比關(guān)系，因而可以用這一比值對(duì)遞質(zhì)釋放幾率進(jìn)行間接估計(jì)。??我們發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組小鼠相比，在給予寡聚態(tài)Ａｐ４２后，ＰＰＦ?ｒａｔｉｏ明顯增加（圖３．３??Ａ），這間接表明寡聚態(tài)Ａｐ４２可能造成了小鼠海馬神經(jīng)元突觸遞質(zhì)釋放幾率的降低。??為了直接證明寡聚態(tài)Ａｐ４２對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)釋放幾率的抑制作用，我們用一種重復(fù)??刺激的方式對(duì)突觸前待釋放囊泡池（ｒｅａｄｉｌｙ?ｒｅｌｅａｓａｂｌｅ?ｐｏｏｌ，?ＲＲＰ）的大小和神經(jīng)遞??質(zhì)釋放幾率進(jìn)行了估算（圖３．３Ｂ）。將刺激記錄得到的ＥＰＳＣ幅度做成累積曲線圖??（圖３．３?Ｂ），然后對(duì)最后２０個(gè)刺激的線性增加區(qū)進(jìn)行線性回歸計(jì)算，與縱坐標(biāo)的??交點(diǎn)數(shù)值即代表ＰＰＲ的大小，與此同時(shí)，遞質(zhì)釋放幾率等于第一個(gè)ＥＰＳＣ的幅度??值與ＲＲＰ的大小的比值。結(jié)果表明

【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]EFR3A調(diào)節(jié)寡聚態(tài)Aβ誘導(dǎo)的鼠海馬興奮性神經(jīng)遞質(zhì)釋放異常的機(jī)制[D]. 何洋.浙江大學(xué) 2017
[2]星形膠質(zhì)細(xì)胞在免疫刺激誘發(fā)的幼年小鼠癲癇發(fā)作易感中的作用及機(jī)制[D]. 秦花萍.浙江大學(xué) 2016



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