目的本課題旨在研究Alzheimer病(AD)和血管性癡呆(Vasculardementia,VD)患者外周血中MIF、MCP-1的表達(dá)水平及其與病情程度、影響因素的關(guān)系。在此基礎(chǔ)上,通過反復(fù)夾閉、再通雙側(cè)頸總動(dòng)脈同時(shí)腹腔注射硝普鈉法制造VD大鼠模型,觀察VD大鼠海馬組織MIF、MCP-1的表達(dá)及變化,探討MIF、MCP-1在AD及VD中的作用及意義。 方法 第一章AD及VD患者外周血MIF、MCP-1的表達(dá)及其變化 1.臨床資料:收集我院2006年6月至2008年1月的門診及住院AD患者64例,男性34例,女性30例,年齡53～90(75.84±8.11)歲。VD患者37例,男28例,女9例,年齡56～91(74.35±8.93)歲。對照組為同期門診體檢者50例,男性29例,女性21例,年齡53～87(72.71±9.99)歲。對照組與AD及VD組在年齡、危險(xiǎn)因素和合并癥等方面相匹配,均排除心、肝和腎等器質(zhì)性病變,以及感染、自身免疫和惡性腫瘤等疾病。 2.AD,VD患者以及正常對照者,均進(jìn)行MMSE、ADL、HIS、GDS及抑郁焦慮量表檢查,并收集臨床和實(shí)驗(yàn)室資料,均于晨起空腹抽血。測定血漿MIF、MCP-1濃度參照ELISA試劑盒說明書操作。離心收集外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),其MIF、MCP-1 mRNA表達(dá)水平用熒光定量PCR檢測。 3.用SPSS11.5 for windows軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示,多個(gè)獨(dú)立樣本的比較用單因素方差分析;計(jì)數(shù)資料用分?jǐn)?shù)表示,組間比較用x~2檢驗(yàn),單因素相關(guān)性采用Spearman分析法,多因素回歸采用多元逐步回歸分析法,F_(引入)=3.84,F_(刪除)=2.71。以P＜0.05為差異顯著性檢驗(yàn)界限 第二章VD大鼠模型海馬組織MIF、MCP-1的表達(dá)變化 1.動(dòng)物準(zhǔn)備:二十周齡Wistar大鼠,體重300±20g,雌雄各半,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,寄養(yǎng)于廣東省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究中心動(dòng)物中心。 2.通過反復(fù)夾閉、再通雙側(cè)頸總動(dòng)脈同時(shí)腹腔注射硝普鈉制造VD大鼠模型,經(jīng)Morris水迷宮檢驗(yàn)大鼠的學(xué)習(xí)、記憶功能來驗(yàn)證模型的成功建立。按模型組、假手術(shù)組、對照組分為3組,每組8只,手術(shù)前后均進(jìn)行Morris水迷宮檢驗(yàn)。一周后處死大鼠,取腦組織,在海馬區(qū)周圍多點(diǎn)取材,每份標(biāo)本一半液氮保存,用于提取蛋白及mRNA;另一半用10%中性緩沖甲醛溶液保存,制做蠟塊,行HE染色和免疫組化。 3.運(yùn)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。定向航行實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期的測量結(jié)果使用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的多因素方差分析�？臻g探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用單因素方差分析。其余統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,同第一章。 結(jié)果 第一章AD及VD患者外周血MIF、MCP-1的表達(dá)及其變化 1.MIF、MCP-1血漿的濃度和PBMC mRNA的表達(dá)水平:VD組＞AD組＞對照組,AD及VD組均高于對照組(P＜0.018),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;VD組稍高于AD組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.102)。 2.根據(jù)簡易精神狀況檢查量表(MMSE)評分(重度組≤10分,中度組11分～20分,輕度組21分～24分)及總體衰退量表(GDS)評分(重度組6～7級,中度組4～5級,輕度組3級)評判患者的病情程度,若兩者評分不一致時(shí)取較嚴(yán)重的等級。將AD患者分為重度組18例,中度組33例和輕度組13例。VD患者分為重度組16例,中度組16例和輕度組5例。 AD及VD患者3組不同嚴(yán)重程度患者M(jìn)IF、MCP-1血漿的濃度和PBMC mRNA的表達(dá)水平的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。重度組顯著高于輕中度組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.041);中度組稍高于輕度組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.100)(P＞0.100)。 3.經(jīng)逐步多元回歸分析顯示:MIF蛋白濃度與MMSE評分、膽固醇、C反應(yīng)蛋白、MIF mRNA表達(dá)水平相關(guān);MCP-1蛋白濃度與MMSE評分、收縮壓、MCP-1mRNA表達(dá)水平相關(guān);MIF、MCP-1蛋白濃度與與性別、年齡、高血壓病史、糖尿病史、高血脂病史、吸煙史、酗酒史、血沉、舒張壓、空腹血糖、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、葉酸、維生素B12均無明顯相關(guān)。 4.AD及VD患者M(jìn)IF、MCP-1的表達(dá)與MMSE評分的相關(guān)分析:AD組血漿MIF、MCP-1的濃度(rMIF=-0.415,rMCP-1=-0.366)和PBMC mRNA的表達(dá)水平(rMIF=-0.47,rMCP-1=-0.325)均與MMSE評分呈負(fù)相關(guān)(P＜0.009)。VD組血漿MIF、MCP-1的濃度(rMIF=-0.516,rMCP-1=-0.396)和PBMC MIF mRNA的表達(dá)水平(rMIF=-0.578,rMCP-1=-0.505)均與MMSE評分亦呈負(fù)相關(guān)(P＜0.015)。 第二章VD大鼠模型海馬組織MIF、MCP-1的表達(dá)變化 1.記憶能力測定:通過Morris水迷宮檢測大鼠記憶能力,結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)過訓(xùn)練己學(xué)會游迷宮的各組大鼠中,模型組大鼠學(xué)習(xí)、記憶能力有顯著的降低:在定向航行試驗(yàn)中,模型組與假手術(shù)組、對照組相比,逃避潛伏期顯著延長(P=-0.000);在空間探索試驗(yàn)中,模型組在原平臺象限跨越平臺次數(shù)比假手術(shù)組和對照組顯著減少(P＜0.007)。但假手術(shù)組和對照組之間在這兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.359)。 2.病理學(xué)檢查結(jié)果:HE染色,200倍光鏡下對照組及假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)大錐體細(xì)胞排列緊密而規(guī)整,細(xì)胞核圓而大,核仁清晰。模型組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞層幾乎完全脫失,出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤,亦可見錐體細(xì)胞層次斷裂,神經(jīng)細(xì)胞脫失現(xiàn)象明顯,且細(xì)胞核體積變小,呈核固縮現(xiàn)象。 3.免疫組化結(jié)果:與假手術(shù)組、對照組大鼠相比,模型組大鼠海馬組織MIF、MCP-1的陽性表達(dá)增多。 4.應(yīng)用蛋白免疫印跡和熒光定量PCR技術(shù)檢測,與假手術(shù)組和對照組相比,模型組大鼠海馬組織MIF、MCP-1蛋白含量及其mRNA的表達(dá)水平增高(P＜0.049),但假手術(shù)組和對照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.681)。 結(jié)論 1.AD及VD患者外周血MIF、MCP-1蛋白和mRNA表達(dá)水平升高,提示MIF、MCP-1參與AD及VD的發(fā)病過程,炎性反應(yīng)可能是與AD及VD的發(fā)病機(jī)制之一。 2.AD及VD患者病情越重MIF、MCP-1血漿濃度和PBMC mRNA表達(dá)水平越高,提示MIF、MCP-1血漿濃度和PBMC mRNA表達(dá)水平可能成為預(yù)測AD及VD病情程度的分子生物學(xué)指標(biāo),并可能對無創(chuàng)性動(dòng)態(tài)監(jiān)測AD及VD病情進(jìn)展具有臨床意義。 3.多元逐步回歸分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)MIF蛋白濃度與MMSE評分、膽固醇、C反應(yīng)蛋白、MIF mRNA表達(dá)水平相關(guān);MCP-1蛋白濃度與MMSE評分、收縮壓、MCP-1 mRNA表達(dá)水平相關(guān);MIF、MCP-1蛋白濃度與性別、年齡、高血壓病史、糖尿病史、高血脂病史、吸煙史、酗酒史、血沉、舒張壓、空腹血糖、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、葉酸、維生素B12均無明顯相關(guān)。 4.VD大鼠模型海馬組織MIF、MCP-1的表達(dá)增高。大鼠海馬區(qū)周圍有炎癥反應(yīng)發(fā)生及MIF、MCP-1免疫陽性細(xì)胞高表達(dá),提示MIF、MCP-1可能是VD炎癥過程中的重要炎性介質(zhì),并揭示炎癥反應(yīng)可能是VD的重要發(fā)病機(jī)制。 5.VD大鼠模型海馬區(qū)域MIF、MCP-1蛋白及其mRNA的表達(dá)增高,提示MIF、MCP-1可能參與了VD的非特異性免疫炎癥反應(yīng)過程,干預(yù)MIF、MCP-1表達(dá)可能是今后VD防治研究的一條新途徑。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R749.16
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一章 AD、VD患者外周血MIF、MCP-1的表達(dá)及其變化
    1.1 材料和方法
    1.2 結(jié)果
    1.3 討論
第二章 VD大鼠模型海馬組織MIF、MCP-1的表達(dá)變化
    2.1 材料與方法
    2.2 結(jié)果
    2.3 討論
結(jié)論
問題與展望
參考文獻(xiàn)
附錄一 英文縮略詞表
附錄二 中文版簡易智能狀態(tài)檢查
附錄三 總體衰退表
攻讀學(xué)位期間的論文發(fā)表情況
致謝
統(tǒng)計(jì)學(xué)審稿證明

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2890968