阿片是歷史悠久的鎮(zhèn)痛藥，但由于其成癮性使阿片類生物堿中嗎啡和海洛因的濫用成為全球性的醫(yī)學(xué)和社會問題。其中海洛因比嗎啡有更強的成癮性。目前對阿片類生物堿成癮、耐受及戒斷機制方面的研究較為深入，而阿片對外周組織的作用研究甚少。本研究的目的是通過研究海洛因?qū)Υ笫蟀被岱纸獯x關(guān)鍵酶谷氨酸脫氫酶（GLDH）基因表達的調(diào)控作用來認識海洛因?qū)Υ笫蟀被岱纸獯x的影響，以期為阿片類藥物的研究增添新的內(nèi)容。 在研究中我們選用成年雄性Wistar大鼠50只，隨機分為5組，每組10只，分別作為生理鹽水對照組、3天海洛因依賴組、9天海洛因依賴組、3天自然戒斷組和8天自然戒斷組。按照劑量逐日遞增的原則，生理鹽水對照組腹腔注射生理鹽水9天后處死，3天海洛因依賴組和9天海洛因依賴組分別腹腔注射海洛因3天和9天后處死，3天自然戒斷組和8天自然戒斷組均腹腔注射海洛因9天后再分別自然戒斷3天和8天后處死。處死大鼠立即采集血漿及組織分別于－20℃冰箱和液氮中凍存。血漿用于測定GLDH酶活性，頂葉、肝臟和小腸組織除測定GLDH酶活性之外還提取其中的總RNA作RT-PCR和Southern雜交來檢測該組織中GLDH mRNA的含量。 頂葉組織在海洛因作用后GLDH表達受到抑制。RT-PCR和Southern雜交結(jié)果一致顯示3天海洛因依賴組、9天海洛因依賴組、3天自然戒斷組和8天自然戒斷組大鼠頂葉中GLDH mRNA含量均低于對照組，分別為對照組的0.65倍、0.60倍、0.52倍和0.61倍。酶學(xué)測定也顯示各實驗組大鼠GLDH酶活性均低于對照組（p0.01）。這說明海洛因抑制頂葉GLDH基因表達的調(diào)控作用發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平，但不能排除翻譯及翻譯后水平的調(diào)控。頂葉GLDH 活性下降，一方面可能通過減少氨基酸氧化供能而影響腦的正常功能，另一方面還可能由于谷氨酸含量升高而參與戒斷反應(yīng)的發(fā)生。 肝臟組織富含GLDH。肝臟組織RT－PCR的結(jié)果顯示3天海洛因依賴組大鼠肝臟中GLDH mRNA的含量比生理鹽水對照組下降，而9天海洛因依賴組大 WP=56 鼠肝臟中GLDH mRNA的含量與3天海洛因依賴組持平，是生理鹽水對照組的0.73倍。戒斷3天后GLDH mRNA含量有所升高并高于對照組，戒斷8天時則降至對照組水平。Southern雜交結(jié)果與RT-PCR結(jié)果一致，相互印證了結(jié)果的可靠性。說明海洛因在轉(zhuǎn)錄水平上能夠抑制大鼠肝臟GLDH的表達。酶學(xué)測定表明，肝臟中GLDH活性在海洛因給藥后降低，3天和9天海洛因依賴組肝臟中GLDH活性均低于對照組。戒斷3天時，GLDH活性升高并明顯高于對照組（p0.05）。戒斷8天后GLDH活性降至對照組水平。說明海洛因依賴時GLDH酶活性降低。3天自然戒斷組大鼠GLDH活性升高，可能是因為突然停藥導(dǎo)致的反跳現(xiàn)象。GLDH mRNA含量變化與GLDH 酶活性變化趨勢一致，說明海洛因?qū)Ω闻KGLDH 基因表達的調(diào)控作用發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上，但還不能排除翻譯及翻譯后加工水平上的調(diào)控。 小腸是阿片作用的重要靶點之一。阿片類藥物減慢胃腸蠕動導(dǎo)致便秘，引起食欲下降等。長期阿片作用，使進食減少并進一步引起營養(yǎng)不良、免疫力低下、體重下降甚至惡病質(zhì)。戒斷后胃腸蠕動過速引發(fā)腹瀉也是促進體重下降的因素之一。那么機體自身氨基酸的代謝是否參與了體重的變化？從我們的實驗結(jié)果來看，3天海洛因依賴組與9天海洛因依賴組大鼠小腸組織中GLDH mRNA的含量均明顯高于對照組，分別為對照組的1.50倍和3.01倍。自然戒斷3天時GLDH mRNA水平降到對照組的1.40倍，自然戒斷8天時GLDH mRNA水平是對照組的1.31倍。說明在轉(zhuǎn)錄水平上，海洛因誘導(dǎo)了小腸組織GLDH的表達。小腸組織酶學(xué)結(jié)果顯示海洛因用藥3天時大鼠小腸中GLDH酶活性無明顯變化。給藥9天時GLDH酶活性明顯升高并高于對照組（p0.05）。在自然戒斷過程中，小腸中GLDH酶活性仍明顯升高。酶含量與mRNA水平變化不完全一致，說明海洛因誘導(dǎo)小腸GLDH基因表達存在轉(zhuǎn)錄、翻譯和（或）翻譯后水平的多級調(diào)控。這種誘導(dǎo)作用很可能通過GLDH 活性的增強而加強氨基酸的分解代謝，參與阿片類藥物降低體重及免疫力等作用。 GLDH是細胞內(nèi)酶，正常生理條件下,血液中GLDH的活性很低。在我們的 WP=57 實驗當(dāng)中，3天海洛因依賴組與9天海洛因依賴組大鼠血漿中GLDH活性均比生理鹽水對照組升高(p0.05),并且9天海洛因依賴組血漿GLDH活性高于3天海洛因依賴組。自然戒斷后，血漿中GLDH活性下降至低于對照組，到自然戒斷8天時又升高并明顯高于生理鹽水對照組（p0.01）。血漿中GLDH酶活性的升高是組織釋放GLDH入血的結(jié)果，由此推斷，海洛因可能從整個機體水平上增加GLDH基因表達進而促進氨基酸的分解代謝。血漿中GLDH酶活性的升高也可能主要來源于小腸組織，至于海洛因是否影響其他外周組織中GLDH酶活性并進而影響血漿中GLDH酶活性還有待于進一步研究。 綜上所述，海洛因誘導(dǎo)GLDH在大鼠小腸中的基因表達，抑制GLDH在頂葉和肝臟中的基因表達。海洛因?qū)Υ笫箜斎~和肝臟GLDH基因表達的調(diào)控主要是在轉(zhuǎn)錄水平上，但不能排除存在翻譯及翻譯后加工的調(diào)控。海洛因?qū)Υ笫笮∧cGLDH基因表達的調(diào)控存在轉(zhuǎn)錄水平、翻譯及翻譯后加工的多級調(diào)控。海洛因依賴和戒斷大鼠小腸中GLDH基因表達的增強促進了氨基酸的分解代謝，可能參與了阿片類藥物依賴和戒斷時體重的下降
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R749.6
【文章目錄】：
英文縮寫詞表
前言
實驗方法
    一、 海洛因依賴及戒斷大鼠模型的建立
    二、 血漿及頂葉、肝臟、小腸組織GLDH活性檢測
    三、 頂葉、肝臟和小腸組織中GLDH mRNA水平的檢測
        1 GLDH 引物的設(shè)計
        2 異硫氰酸胍法提取頂葉、肝臟、小腸總RNA
        3 RT-PCR法檢測各組織mRNA水平
        4 雜交檢測組織mRNA水平
        5 統(tǒng)計學(xué)方法
實驗結(jié)果
    一、 血清GLDH活性
    二、 頂葉GLDH活性
    三、 肝臟GLDH活性
    四、 小腸GLDH活性
    五、 頂葉mRNA 含量
    六、 肝臟mRNA 含量
    七、 小腸mRNA 含量
    八、 頂葉雜交結(jié)果
    九、 肝臟雜交結(jié)果
討論
參考文獻
中文摘要
英文摘要
致謝

【參考文獻】

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本文編號：2851581