目的探討N-甲基-D-天門冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)在妊娠期慢性應(yīng)激致子代抑郁中的介導(dǎo)作用。方法第一部分:選取健康SPF級KM小鼠,雌雄比2:1配對合籠,見栓小鼠單籠飼養(yǎng),記為妊娠第一天(G1),將G7孕鼠分為妊娠期應(yīng)激組與空白對照組。應(yīng)激組孕鼠施加慢性應(yīng)激,對照組小鼠正常飼養(yǎng)。子鼠出生后分成:孕期應(yīng)激+生理鹽水組(CPS+SAL),孕期正常+生理鹽水組(CON+SAL),孕期正常+子代正常組(CON),孕期應(yīng)激+0.05mg·kg~(-1) MK-801組(CPS+ANT-0.05),孕期應(yīng)激+0.1mg·kg~(-1) MK-801組(CPS+ANT-0.1),孕期應(yīng)激+0.3mg·kg~(-1) MK-801組(CPS+ANT-0.3)。通過糖水偏好實驗、懸尾實驗和強(qiáng)迫游泳實驗觀察子代抑郁程度;HE染色觀察海馬神經(jīng)元病理變化;ELISA法檢測海馬腦組織NMDAR水平;WB法檢測海馬組織mTOR和p-mTOR(Ser2448)蛋白含量,RT-PCR法檢測小鼠海馬mTOR mRNA水平。第二部分:取出生7天的SPF級的Sprague-Dawley(SD)大鼠,冰上取腦作冠狀切片,體外培養(yǎng)海馬腦片,通過加入CRH和NMDAR拮抗劑將實驗分為以下幾組:正常對照組(control),1.0μM CRH+溶劑對照組(CRH),1.0μM CRH+10μM MK-801組(Low),1.0μM CRH+20μM MK-801組(Middle),1.0μM CRH+50μM MK-801組(High)。通過WB檢測腦片組織mTOR(Ser2448)蛋白含量。結(jié)果1.糖水偏好實驗顯示CPS+SAL組小鼠的糖水偏好率相對于CON+SAL組明顯下降(P0.05),與CPS+SAL組相比,CPS+ANT-0.05,CPS+ANT-0.1和CPS+ANT-0.3組的糖水偏好率均升高(P0.05)。2.懸尾實驗結(jié)果顯示,CON組與CON+SAL組差異無顯著性,與CON+SAL組相比,CPS+SAL組小鼠的不動時間明顯延長(P0.05),與CPS+SAL組相比,CPS+ANT-0.05和CPS+ANT-0.1組懸尾不動時間明顯減少(P0.05)。3.強(qiáng)迫游泳實驗結(jié)果顯示,與CON+SAL組相比,CPS+SAL組不動時間延長(P0.05),與CPS+SAL組相比,CPS+ANT-0.05,CPS+ANT-0.1和CPS+ANT-0.3組的不動時間明顯減少(P0.05),其中CPS+ANT-0.1組的不動時間最接近正常水平。4.HE結(jié)果顯示,CON和CON+SAL組小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞染色清晰,排列整齊,數(shù)量較多,CPS+SAL組海馬CA3區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞排列松散,核仁著色深,核固縮現(xiàn)象明顯,神經(jīng)元數(shù)量減少。CPS+ANT-0.05組、CPS+ANT-0.1組和CPS+ANT-0.3組小鼠海馬CA3區(qū)細(xì)胞排列規(guī)矩整齊,細(xì)胞形態(tài)較CPS+SAL組有明顯改善,核仁明顯。5.ELISA結(jié)果顯示,與CON+SAL組相比,CPS+SAL組海馬NMDAR水平明顯升高(P0.05),與CPS+SAL組相比,CPS+ANT-0.1組和CPS+ANT-0.3組NMDAR水平降低(P0.05),CPS+ANT-0.05組與CPS+SAL組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6.WB結(jié)果顯示與CON+SAL組相比,CPS+SAL組小鼠mTOR表達(dá)量顯著下降(P0.05),與CPS+SAL組相比,CPS+ANT-0.05組,CPS+ANT-0.1組和CPS+ANT-0.3組海馬mTOR表達(dá)量均升高;與CON+SAL組比較,CPS+SAL組海馬組織p-mTOR表達(dá)顯著下降(P0.05),CPS+ANT-0.05和CPS+ANT-0.3組海馬p-mTOR表達(dá)也降低且有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),與CPS+SAL組相比,CPS+ANT-0.05,CPS+ANT-0.1和CPS+ANT-0.3組海馬p-mTOR表達(dá)均升高(P0.05)。7.RT-PCR結(jié)果顯示CPS+SAL組海馬mTOR mRNA水平相對CON+SAL組略高,但是各組之間mTOR mRNA表達(dá)水平無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。8.海馬腦片mTOR蛋白檢測的結(jié)果顯示,與control組相比,CRH組的mTOR表達(dá)顯著下降(P0.05),與CRH組相比,Low,Middle和High組腦片mTOR表達(dá)上升且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而Low,Middle和High組腦片mTOR含量與control組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論NMDAR介導(dǎo)了妊娠期慢性應(yīng)激致子代抑郁,此作用可能與其抑制mTOR激活,導(dǎo)致子代海馬CA3區(qū)神經(jīng)元發(fā)生損傷有關(guān)。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R749.4
【部分圖文】：

20圖 1 妊娠期慢性應(yīng)激對子鼠糖水偏好率的影響以 20 天子代雄鼠為研究對象，實驗分為孕期應(yīng)激+生理鹽水組（CPS+SAL），鹽水組（CON+SAL），孕期正常+子代正常組（CON），孕期應(yīng)激+0.05mg k（CPS+ANT-0.05），孕期應(yīng)激+0.1mg kg-1 MK-801 組（CPS+ANT-0.1），孕期應(yīng)MK-801 組（CPS+ANT-0.3）。CPS+SAL 組： ±s=75.06±1.58，n=10；CON+SAL 組n=10；CON 組：89.87±3.45，n=10；CPS+ANT-0.05 組：87.67±6.13，n=10；CP82.48±9.97，n=10；CPS+ANT-0.3 組：85.84±7.53，n=10，與 CON+SAL 組比較CPS+SAL 組比較:#P<0.05Fig.1. Effects of chronic stress in pregnancy on the sucrose preference rate of soffspring20-day offspring male mice as the research object and randomly devided into the c

prenatal control+ offspring control group (CON), ch0.05mg kg-1 MK-801 injected group (CPS+ANT-0.05), chron0.1mg kg-1 MK-801 injected group (CPS+ANT-0.1), chronic prenaMK-801 injected group (CPS+ANT-0.3), CPS+SAL group： ±s=7group： ±s=88.47±4.67，n=10；CON group：89.87±3.45，n=10；CPSn=10；CPS+ANT-0.1 group：82.48±9.97，n=10；CPS+ANT-0.3 grouwith CON+SAL group: * P<0.05; compared with CPS+S懸尾實驗結(jié)果顯示，CON 組與 CON+SAL 組無明顯比，CPS+SAL 組小鼠的不動時間明顯延長（P＜0.05）CPS+ANT-0.05 和 CPS+ANT-0.1 組懸尾不動時間明顯減少組不動時間無明顯差異（P＞0.05），CPS+ANT-0.05，CPS組與 CON+SAL 組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示拮抗劑不良影響。

圖 3 妊娠期慢性應(yīng)激對子鼠強(qiáng)迫游泳實驗中以 20 天子代雄鼠為研究對象，實驗分為孕期應(yīng)激+生理鹽水組鹽水組（CON+SAL），孕期正常+子代正常組（CON），孕期應(yīng)（CPS+ANT-0.05），孕期應(yīng)激+0.1mg kg-1 MK-801 組（CPS+ANMK-801 組（CPS+ANT-0.3）。CPS+SAL 組： ±s=66.15±7.74，n=10n=10；CON 組：25.00±6.32，n=10；CPS+ANT-0.05 組：40.51±529.71±3.06，n=10；CPS+ANT-0.3 組：37.80±5.57，n=10，與 CCPS+SAL 組比較:#P<0.05Fig.3. Effects of chronic prenatal stress on immobility time 20-day offspring male mice as the research object and randomly dstress+ offspring saline-injected group (CPS+SAL), prenatal contro(CON+SAL), prenatal control+ offspring control group (CON), ch
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