發(fā)布時(shí)間：2020-09-25 20:32

　　 研究背景 吸煙成癮是全球關(guān)注的一個(gè)嚴(yán)重問題。全世界約有1/3的成人吸煙,其導(dǎo)致的被動(dòng)吸煙公害不容忽視。世界衛(wèi)生組織(WHO)把每周有1天暴露于環(huán)境煙草煙霧(Environmental Tobacco Smoke,ETS)達(dá)15min以上定為被動(dòng)吸煙,被動(dòng)吸煙在全世界基本上不可避免。ETS又稱二手煙,是從煙草制品及吸煙者呼出來的煙霧中飄散出來的一種復(fù)雜的混合物,含有尼古丁(Nicotine,Nic)、煙焦油(Smoke tar oil,STO)等4000多種物質(zhì)。近年來,流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),青少年被動(dòng)吸煙與吸煙率呈正相關(guān)。煙草中的成癮性物質(zhì)作為一種慣用的依賴性物質(zhì),不僅給依賴者帶來很多身體和心理的危害,還預(yù)示著將來對其他依賴性物質(zhì)的濫用,常被稱為吸毒的入門藥。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)低劑量甲苯可以通過嗅覺吸入途徑成癮,丁香酚通過嗅覺通路給藥可以提高學(xué)習(xí)記憶能力。目前對煙草的成癮性和毒性的作用途徑和機(jī)制還不是很明確,本研究模擬人們長期處于亞慢性ETS暴露環(huán)境中對青少年小鼠進(jìn)行吸入染毒,研究被動(dòng)吸煙通過嗅覺通路是否成癮及長期吸入ETS及其主要成分物質(zhì)對小鼠神經(jīng)行為及體重與免疫力的影響,并探討嗅覺通路在吸煙成癮中的作用及其可能機(jī)制。 研究目的: 1.亞慢性吸入給藥建立小鼠ETS、Nic、STO慢性暴露模型,研究ETS、Nic、STO暴露與吸煙成癮的關(guān)系。 2.建立嗅上皮毀損模型,探討嗅覺通路在成癮中的作用。 3.ETS、Nic、STO亞慢性吸入對小鼠神經(jīng)行為學(xué)的影響。 4.研究ETS、Nic、STO對小鼠體重、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及外周血清中補(bǔ)體、免疫球蛋白水平的影響。 5.研究成癮相關(guān)腦區(qū)的嗅覺事件相關(guān)電位和神經(jīng)遞質(zhì)變化,探討ETS、Nic暴露作用機(jī)制。 研究方法: 1.ETS染毒實(shí)驗(yàn)階段,通過給藥劑量評估實(shí)驗(yàn)選擇小鼠給藥劑量及給藥方式。對小鼠進(jìn)行篩選并隨機(jī)分組:空白組、被動(dòng)吸煙組、嗅上皮毀損+被動(dòng)吸煙組;染毒實(shí)驗(yàn)臺(tái)內(nèi)小鼠ETS暴露染毒(亞慢性染毒時(shí)間一般1~3個(gè)月),染毒4w和8w時(shí)通過條件性位置偏愛實(shí)驗(yàn)(Conditioned Place Preference,CPP)、觀察小鼠活動(dòng)特征等檢測小鼠成癮性,通過自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)、洞板探洞實(shí)驗(yàn)、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)方法測定ETS、對小鼠中樞神經(jīng)興奮性及空間學(xué)習(xí)記憶等的影響。 2.Nic、STO染毒階段把小鼠隨機(jī)分為:空白組、Nic吸入組、嗅上皮毀損+Nic吸入組;STO吸入組、嗅上皮毀損+STO吸入組。在染毒8w時(shí)進(jìn)行CPP及神經(jīng)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)的觀察檢測。 3.計(jì)算小鼠體重增長率及脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)的變化,探討ETS、Nic、STO對小鼠體重增長與免疫力的影響;免疫比濁法檢測小鼠外周動(dòng)脈血清中的補(bǔ)體C3、C4及免疫球蛋白IgA、IgG、IgM水平,研究ETS及成分對小鼠非特異性免疫功能的影響。 4.通過立體定位儀進(jìn)行小鼠腦區(qū)定位,PowerLab多通道生理信號(hào)采集與處理系統(tǒng)記錄嗅吸ETS、Nic后小鼠嗅球、伏隔核、黑質(zhì)腦區(qū)電位的變化。 5.免疫組織化學(xué)方法檢測各組小鼠嗅球、海馬、皮層等腦區(qū)的GABA、nAChR及NMDAR的變化。 結(jié)果: 1.小鼠成癮性實(shí)驗(yàn)(CPP)檢測結(jié)果:(1)染毒4w時(shí)ETS暴露組小鼠CPP效應(yīng)沒有顯著差異性(P0.05);染毒8w時(shí)ETS暴露組小鼠與空白組及4w組比較產(chǎn)生明顯的CPP效應(yīng)(P0.05);(2)ETS+嗅上皮毀損組、Nic、STO染毒后CPP檢測結(jié)果與空白組比較,沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.神經(jīng)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:(1)小鼠自主活動(dòng)、洞板實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:ETS暴露組與空白組比較自主活動(dòng)次數(shù)明顯增加(P0.05),探洞次數(shù)明顯減少(P0.05);Nic暴露組自主活動(dòng)次數(shù)、探洞次數(shù)都明顯增加(P0.05);其他組與空白組比較均沒有明顯差異(P0.05)。(2)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中,ETS暴露組、嗅上皮毀損+被動(dòng)吸煙組、STO暴露組第一次穿越安全目標(biāo)的潛伏期時(shí)間明顯長于空白組(P0.05),平均游泳速度造模組均低于空白組(P0.05),ETS暴露組、嗅上皮毀損+Nic吸入組、STO暴露組穿越安全目標(biāo)的次數(shù)均低于空白組(P0.05)。 3.(1)體重增長率,ETS暴露組、STO暴露組小鼠明顯低于空白組(P0.05);小鼠脾臟指數(shù),ETS暴露組與空白組比較明顯降低(P0.05);(2)ETS組小鼠外周動(dòng)脈血清中C3、C4、IgA、IgG水平均明顯低于空白組(P0.05);Nic吸入組、嗅上皮毀損+被動(dòng)吸煙組小鼠血清中IgA、IgG水平均明顯低于空白組(P0.05)。 4.小鼠嗅球、伏隔核、黑質(zhì)OERP結(jié)果:(1)小鼠嗅球OERP:給予尼古丁氣味刺激時(shí),小鼠嗅球部位誘發(fā)電位與自發(fā)電位波形相似,頻率基本無變化,振幅偏小約0.1V;給予ETS刺激時(shí),小鼠嗅球部位誘發(fā)電位由自發(fā)電位的雙肩波變?yōu)閱渭绮?頻率減少一半,振幅基本無變化。(2)小鼠伏隔核OERP:給予尼古丁氣味刺激時(shí),小鼠伏隔核部位誘發(fā)電位與自發(fā)電位比較,振幅顯著升高,平均約增加0.075V,頻率約減少一半;給予ETS刺激時(shí),小鼠伏隔核部位誘發(fā)電位與自發(fā)電位比較,振幅有所增高,頻率有下降,但變化不明顯。(3)小鼠黑質(zhì)OERP:給予尼古丁氣味刺激時(shí),小鼠黑質(zhì)部位誘發(fā)電位與自發(fā)電位比較,由正性波變?yōu)樨?fù)性波,且振幅明顯增加約0.5V,頻率降低約一半;給予ETS刺激時(shí),小鼠黑質(zhì)部位誘發(fā)電位與自發(fā)電位比較,振幅有基本無變化,頻率下降明顯。 5.免疫組織化學(xué)結(jié)果:(1)GABA在小鼠大腦皮層、海馬部位的表達(dá),ETS暴露組與空白組比較陽性細(xì)胞數(shù)量明顯減少,Nic組與空白組比較變化不明顯。(2)nAChR在大腦皮層的表達(dá),ETS吸入組陽性表達(dá)明顯增加,Nic吸入模型組與與空白組比較陽性表達(dá)差異不明顯。(3)Glu受體NMDAR在小鼠大腦皮層、紋狀皮質(zhì)的表達(dá),ETS吸入組、Nic吸入組與空白組比較陽性表達(dá)明顯增加。 結(jié)論: 1.長期ETS暴露能夠引發(fā)小鼠產(chǎn)生CPP,而且嗅覺通路可能在成癮中起作用。 2.長期接觸ETS、STO導(dǎo)致小鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降及其它神經(jīng)行為學(xué)改變。 3.ETS、STO降低小鼠體重增長率及小鼠非特性性免疫功能。 4.ETS、Nic可誘發(fā)小鼠嗅球、伏隔核、黑質(zhì)等部位產(chǎn)生特征性O(shè)ERP電位變化。 5.ETS、Nic暴露引起嗅球、大腦皮層、海馬等部位神經(jīng)遞質(zhì)及受體表達(dá)的變化。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R749.6
【部分圖文】：

表 1. ETS染毒小鼠4W、8w時(shí)CPP實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （ x±s， n=15，s）Tab 1. the CPP experiment results of mice inhaling ETS for 4 and 8 weeks4w 8w白箱時(shí)間(s) 白箱時(shí)間百分比（%） 白箱時(shí)間(秒) 白箱時(shí)間百A組） 318.83±98.49 26.71±8.14 312.45±95.34 26（B組） 411.24±135.19 34.25±11.21ab544.26±103.51ab4損+ ETS暴露組（C組）298.36±65.34 24.86±6.68 301.33±63.46 25a與空白組比較 p<0.05 ；b與 ETS 暴露組 4w 比較 p<0.05eaning other groups comparing A group P<0.05;bmeaning other groups comparing mice ETfor 4w group P<0.05

圖 2. ETS 對小鼠神經(jīng)行為學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)（小鼠自主活動(dòng)、洞板探洞、Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)）注：△與空白組比較 P <0.05e mice autonomic activities、visiting holes and morris water maze experiment results of mice inhfor 8 weeksNote:△ meaning other groups comparing the control group P <0.05鼠嗅覺吸入 Nic、STO 誘發(fā)成癮性及對神經(jīng)行為學(xué)的影響實(shí)驗(yàn)立 Nic、STO 嗅覺吸入模型，通過 CPP 實(shí)驗(yàn)檢測 ETS 能否誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)他神經(jīng)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)反應(yīng) ETS 對小鼠腦功能的影響。與方法

說明在本實(shí)驗(yàn)濃度 Nic、STO 吸入染毒 8w 沒有表 4. Nic、STO染毒8w小鼠CPP實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果（ x±s，n=12，s）Tab 4. the CPP experiment results of mice inhaling Nic、STO for 8 weeks白箱時(shí)間(s) 白箱時(shí)間百 324.57±87.64 26.7組） 342.29±86.54 27.0染毒組（C1組） 321.49±66.73 22.1組） 333.13±96.59 27.7染毒組（E1組） 308.06±40.03 25.6a與 A1 組比較 p<0.05；Note:ameaning other groups comparing A group p<0.05

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 劉汝青;宋宏;吳輝;楊軼戩;任鐵玲;蔡承鏗;余貴英;;被動(dòng)吸煙對兒童免疫功能的影響[J];環(huán)境與健康雜志;2006年02期

2 楊功煥,馬杰民,劉娜,周靈妮;中國人群2002年吸煙和被動(dòng)吸煙的現(xiàn)狀調(diào)查[J];中華流行病學(xué)雜志;2005年02期

3 牛靜萍,丁國武,李嶸;被動(dòng)吸煙對兒童生長發(fā)育的影響[J];中國婦幼保健;2003年12期

4 沈維干,李朝軍,陳彥,畢春明,張錫然,貢昌春;香煙煙霧水溶物對雌性小鼠生殖毒性的研究[J];中國公共衛(wèi)生;2000年03期

本文編號(hào)：2827032