研究目的 血管性癡呆(Vascular dementia,VD)是老年期癡呆的主要類型之一。而近年來,血管性認知障礙(Vascular cognitive impairment,VCI)越來越受到人們的關注,VD是其中的類型之一。臨床觀察發(fā)現(xiàn)VD患者存在血清甲狀腺激素(Thyroid hormone,TH)水平異常,而臨床并無甲狀腺功能低下表現(xiàn),多數(shù)研究認為此現(xiàn)象屬于非甲狀腺疾病綜合征(Nonthyroidal illness syndrome,NTIS)。但我們的前期工作表明,慢性腦缺血大鼠存在中樞甲狀腺功能異常及認知障礙,而補充外源性TH的慢性腦缺血大鼠的水迷宮成績無明顯障礙,提示慢性腦缺血大鼠的學習記憶障礙與中樞甲狀腺功能受損有關。本課題擬在前期工作基礎上,利用雙側頸總動脈永久性結扎制成慢性腦缺血致VCI大鼠和腹腔注射四氯化碳制成慢性肝纖維化致NTIS大鼠,比較外周和腦組織中甲狀腺功能及認知能力;比較腦組織中TH中樞轉運蛋白—有機陰離子轉運多肽1C1(Organic aniontransporting polypeptide1C1,OPTA1C1)mRNA和單羧酸轉運蛋白8(Monocarboxylate transporter 8,MCT8)mRNA水平;探討慢性腦缺血認知障礙大鼠腦內TH水平和其代謝過程的相關因素變化;研究其腦組織TH代謝異常變化是NTIS的伴隨癥狀還是有其獨立的發(fā)生機制,從而為臨床VCl的防治提供新的思路。 研究方法 1.實驗分組:26只SPF成年SD大鼠,性別不限,隨機分為三組:正常對照組(9只);慢性腦缺血致VCI組(7只)(永久性結扎雙側頸總動脈5周);腦外疾病(慢性肝纖維化)致NTIS組(10只)(四氯化碳,玉米油1:6稀釋,腹腔注射,3次/周,共8周)。 2.各組大鼠于實驗終點進行Morris水迷宮測試,進行定位航行試驗、空間探索試驗。 3.NTIS大鼠試驗終點對取肝臟,用10%中性緩沖甲醛溶液保存,制作蠟塊,行HE染色。 4.各組大鼠均于實驗終點應用放射免疫法測定血清T_3、T_4、FT_3、FT_4、rT_3、TSH、TRH濃度和腦組織中T_3、T_4、rT_3濃度。 5.各組大鼠均于實驗終點采用熒光定量PCR法測定腦組織中TH轉運蛋白OATP1C1mRNA和MCT8mRNA的表達水平。 6.統(tǒng)計方法:運用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理,實驗數(shù)據(jù)以均值±標準差(x±s)表示。定向航行實驗逃避潛伏期的測量結果使用重復測量數(shù)據(jù)的多因素方差分析。多個獨立樣本的比較用單因素方差(one-way ANOVA)分析,多重比較采用LSD法進行分析。以P＜0.05為差異顯著性檢驗界限。 研究結果 一.NTIS組大鼠肝臟病理學: HE染色,200倍光鏡下NTIS組大鼠肝臟肝小葉結構尚存在,肝細胞腫脹排列成索狀,部分胞漿內有膽汁淤積,匯管區(qū)慢性炎細胞浸潤伴纖維組織增生,部分纖維組織伸入肝小葉內,將肝小葉分割呈結節(jié)狀,局灶假小葉形成。 二.水迷宮結果: 通過Morris水迷宮測試大鼠的學習記憶能力,結果發(fā)現(xiàn)VCI組大鼠學習記憶能力顯著降低: 1.定向航行測定:三組間逃避潛伏期差異有統(tǒng)計學意義(F=4.783,P=0.024)。進一步多重分析,VCI組較NTIS組和正常組逃避潛伏期顯著延長(P＜0.026,P＜0.013)。NTIS組與正常組逃避潛伏期差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.585)。定向航行實驗不同天數(shù)之間差異有統(tǒng)計學意義(F=9.518,P=0.000)。 2.空間探索實驗:VCI組較NTIS組及正常組時間縮短,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.016,P＜0.047),NTIS組與正常組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.756)。 三.血清TH測定結果: 1.T_4、FT_3、FT_4濃度NTIS組較正常組顯著降低(P＜0.008,P＜0.000,P＜0.000),T_3濃度NTIS組較正常組降低(P＜0.04);2.T_3、T_4、FT_3濃度VCI組較正常組降低(P＜0.001,P＜0.006,P＜0.009),FT_4濃度VCI組較正常組降低(P＜0.016);3.TSH、rT_3濃度VCI及NTIS組與正常組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.618,P＞0.434);4.TRH濃度VCI組和NTIS組均較正常組增高(P＜0.014,P＜0.023)。 四.腦組織TH測定結果: 1.T_3、T_4、rT_3濃度VCI組較正常組降低(P＜0.042,P＜0.049,P＜0.049); 2.T_3、T_4、rT_3濃度VCI組較NTIS組降低(P＜0.008,P＜0.012,P＜0.008); 3.T_3、T_4、rT_3濃度NTIS組與正常組比之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.453,P＞0.526,P＞0.420)。 五.腦組織甲狀腺激素轉運蛋白轉錄水平測定結果: 1.OATP1C1mRNA測定結果:OATP1C1mRNA水平NTIS組較VCI組和正常組顯著增高(P＜0.030,P＜0.008),VCI組與正常組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.710)。 2.MCT8mRNA測定結果:MCT8mRNA水平NTIS組及VCI組均較正常組增高(P＜0.014,P＜0.047),NTIS組和VCI組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.738)。 研究結論 1.慢性腦缺血認知障礙大鼠和慢性肝纖維化大鼠均有NTIS現(xiàn)象。 2.下丘腦-垂體-甲狀腺軸功能紊亂是NTIS的發(fā)病機制之一。 3.慢性腦缺血大鼠腦組織TH濃度(T_3、T_4、rT_3)明顯降低,其認知能力障礙,可能與腦內甲狀腺功能低下有關。 4.慢性肝纖維化大鼠腦組織TH濃度(T_3、T_4、rT_3)無明顯變化,認知能力正常。 5.中樞TH轉運蛋白OATP1C1、MCT8代償性增高是維持NTIS大鼠中樞TH水平相對穩(wěn)定的關鍵因素。 6.中樞TH轉運蛋白尤其是OATP1C1的功能障礙是導致慢性腦缺血大鼠中樞TH水平低下的重要因素。 7.慢性腦缺血認知障礙大鼠與肝纖維化大鼠雖都有NTIS表現(xiàn),但中樞TH水平和中樞TH轉運蛋白OATP1C1、MCT8水平有顯著差別。慢性腦缺血大鼠出現(xiàn)中樞甲狀腺功能低下,可能引起“腦甲減”。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2009
【中圖分類】：R749.1
【部分圖文】：

5.腦組織 OATPIClmRNA和MCT8mRNA表達水平在熒光定量PCR過程中，初始模板量的對數(shù)與C(T)循環(huán)數(shù)之間呈線性關系:(見圖6)，提示結果準確，所檢測樣品溶解曲線只有單一峰(見圖7，圖8，圖9)，說明沒有非特異性擴增產(chǎn)生。S怕 ndardCUrVe縱1縱2縱35000.1))6())).007以刀.008以刃.00以兀舊.00廣|l|仁j卜!l!||仁

本文編號：2823564