阿爾茨海默病(Alzheimer’s Disease, AD)是一種以進(jìn)行性癡呆為主要臨床表現(xiàn)的神經(jīng)退行性疾病。阿爾茨海默病發(fā)病的中心學(xué)說(shuō)認(rèn)為:β淀粉樣蛋白被分泌到胞外形成寡聚體,并進(jìn)一步聚集成難溶性淀粉樣斑塊,寡聚體和斑塊都具有神經(jīng)元毒性,從而引發(fā)阿爾茨海默病的一系列癥狀。β淀粉樣蛋白是由淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein, APP)經(jīng)過(guò)β分泌酶和γ分泌酶順序剪切后所產(chǎn)生。淀粉樣前體蛋白的另一條非淀粉樣剪切途徑可得到具有一定神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用的可溶性APP片段(α-form soluble amyloid precursor protein,αAPPs)。 迄今為止,許多工作主要集中于研究遺傳因素與阿爾茨海默病發(fā)病的關(guān)系,并且已經(jīng)獲得大量的證據(jù)。這些證據(jù)表明:遺傳變異能夠影響β淀粉樣蛋白的產(chǎn)生,并與家族型阿爾茨海默病的發(fā)生緊密相關(guān)。但絕大部分阿爾茨海默病病例屬于散發(fā)型,由包括遺傳因子和環(huán)境條件在內(nèi)的多種因素綜合作用導(dǎo)致疾病的發(fā)生和發(fā)展。這些因素中的受體功能或生理信號(hào)等能否以及如何影響β淀粉樣蛋白的產(chǎn)生至今也都還缺乏深入的研究。 有研究報(bào)道中樞煙堿受體亞型激動(dòng)可以降低β淀粉樣蛋白水平,改善認(rèn)知功能。在一系列研究的基礎(chǔ)上,有人提出包括α7煙堿受體亞型在內(nèi)的中樞煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)可能成為治療阿爾茨海默病的新靶點(diǎn)。但究竟哪種受體亞型在β淀粉樣蛋白的產(chǎn)生中發(fā)揮主要作用以及如何發(fā)揮作用還不太清楚。因此,建立特異性煙堿受體作用的細(xì)胞模型并在此模型上研究特異性煙堿受體亞型激動(dòng)與阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制之間的聯(lián)系等都是有意義的事。 本研究以α7 nAChR為研究對(duì)象,在建立共表達(dá)淀粉樣前體蛋白和α7 nAChR基因的細(xì)胞模型上探索α7 nAChR激動(dòng)后是否以及如何影響β淀粉樣蛋白的產(chǎn)生。 首先對(duì)轉(zhuǎn)染后的SH-EP1-α7 nAChR-APP695細(xì)胞株(轉(zhuǎn)染工作由本實(shí)驗(yàn)室研究生前期完成)進(jìn)行鑒定,證明共表達(dá)α7 nAChR和APP695基因的細(xì)胞模型已構(gòu)建成功。在此模型的基礎(chǔ)上觀(guān)察到激動(dòng)α7 nAChR可以降低細(xì)胞外Aβ水平。在進(jìn)一步的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外Aβ水平的降低可能與α7 nAChR激動(dòng)后在一定程度上抑制β、γ分泌酶活性有關(guān)。同時(shí)α7 nAChR激動(dòng)后雖然對(duì)α分泌酶活性沒(méi)有顯著性影響但由于總APP的表達(dá)量沒(méi)有明顯變化而其淀粉樣剪切途徑受抑制,從而使得αAPPs水平一定程度上升高。以上結(jié)果提示α7 nAChR激動(dòng)可能對(duì)阿爾茨海默病的防治具有積極意義。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類(lèi)】：R749.16
【部分圖文】：

圖 3 Western blot 鑒定 hAPP695 蛋白表達(dá)Western blot analysis of the expression p were applied. Lane 1: clone 3C; lane 2: c6: negative control (not transfected cell)測(cè) hAPP695 經(jīng)剪切后下游小分子淀后再經(jīng) SDS-PAGE 三層膠分離白的表達(dá)。所用抗體為 6E10，通的產(chǎn)物 αAPPs 和 C99（圖 4）。1 2

圖 8 hAPP695 基因熒光定量 PCR 擴(kuò)增曲線(xiàn)和融解曲線(xiàn)Fig. 8 Real-time PCR amplification plots using SYBR Green I.plification curve (linear view) of hAPP695 and GAPDH cDNA from the SH-EP1-α7 n695 cell model. B. Melting curve analysis for hAPP695 (melts at 91℃) indicates that cts were specific.

圖 12 煙堿受體激動(dòng)劑在 SH-EP1-α7 nAChR-hAPP695 細(xì)胞對(duì) α 分泌酶活性的影響Fig. 12 Effects of nAChR agonists and antagonists on α secretase activity in SH-EP1-α7nAChR-hAPP695 cells.GTS-21 (0.1 μM) increased α secretase activity levels at 6 h. Values are means ±SD. * p<0.05,**p<0.01 compared with control cells without treatment.

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 賈建軍,王魯寧,湯洪川,李振甲;淀粉樣β蛋白變性與阿爾茨海默病:發(fā)病機(jī)制與病理現(xiàn)狀[J];中國(guó)臨床康復(fù);2004年16期

本文編號(hào)：2819657