第一部分誘導性一氧化氮合酶參與阿爾茲海默病模型鼠病理進程 研究背景與目的:一氧化氮(NO)作為神經遞質具有多種功能,但在病理情況下,大量表達的NO可導致神經損傷。中樞神經系統(tǒng)內的NO主要由神經元型一氧化氮合酶(nNOS)和誘導性一氧化氮合酶(iNOS)合成。近期研究提示iNOS參與了阿爾茲海默病(AD)的發(fā)病進程。本實驗室既往研究證實長期D-半乳糖注射結合雙側卵巢切除是一種復合因素AD動物模型。本學位論文擬進一步研究iNOS是否參與該AD模型的病理進程。 方法和結果:成年雌性ICR小鼠行雙側卵巢摘除,術后腹腔注射D-半乳糖100mg/kg/d,持續(xù)8周,進行下列研究,結果如下: 1.生化結果顯示,與對照組相比,模型組腦內NO生成量增高,iNOS活性增高,nNOS活性下降;Western blot結果顯示模型組iNOS表達量上調,而nNOS表達量下調。 2.免疫組化結果顯示,與對照組相比,模型組海馬和大腦皮層IBa1陽性小膠質細胞和膠質纖維酸性蛋白(GFAP)陽性星形膠質細胞數(shù)目和活化比例明顯增多。 3.免疫熒光及雙標染色結果顯示,模型組部分MAC-1陽性小膠質細胞和血管周圍GFAP陽性星形膠質細胞共表達iNOS,并可見神經元樣細胞也表達iNOS,而對照組未見明顯共表達免疫熒光信號。 結論:D-半乳糖注射結合內源性卵巢激素剝奪AD模型小鼠腦中存在iNOS表達增高,這種表達增高來源于激活的小膠質細胞、血管周圍活化的星形膠質細胞以及神經元細胞。 第二部分谷氨酸能神經元和星形膠質細胞參與福爾馬林誘導的急性疼痛傳遞 研究背景與目的:谷氨酸作為中樞神經系統(tǒng)內主要的興奮性遞質具有多種神經功能;星形膠質細胞通過谷氨酸-谷氨酰胺循環(huán)調節(jié)突觸間隙谷氨酸濃度,從而參與谷氨酸神經傳遞過程。既往研究顯示脊髓后角谷氨酸能神經元和星形膠質細胞參與福爾馬林誘導的痛覺傳遞。在此研究基礎上,本實驗擬進一步研究谷氨酸能神經元以及星形膠質細胞是否參與以及如何參與中樞痛覺傳遞。方法與結果:ICR小鼠右后足背面皮下注射2.5%的福爾馬林40μl后,進 行下列研究,結果如下: 1.行為學測試顯示,模型組疼痛行為持續(xù)時間明顯高于對照組。 2. c-Fos/谷氨酸雙標染色結果證實模型組在脊髓后角、丘腦腹后外側核和大腦感覺皮層均可見c-Fos/谷氨酸雙標染色細胞,而在對照組谷氨酸陽性細胞內未見明顯c-Fos表達。 3.膠質纖維酸性蛋白免疫熒光染色顯示,相比于對照組,模型組脊髓后角胞體肥大的活化星形膠質細胞比例明顯增多,但丘腦腹后外側核和大腦感覺皮層星形膠質細胞活化不明顯。 4.脊髓后角免疫組化染色、免疫印跡及光密度分析結果顯示,與對照組相比,模型組脊髓后角谷氨酸轉運體1、谷氨酸/天冬氨酸轉運體、谷氨酰胺合酶和水通道蛋白4表達上調。 結論:谷氨酸能神經元在脊髓后角、丘腦腹后外側核、初級感覺皮層三個水平參與福爾馬林誘導的急性疼痛傳遞。脊髓后角星形膠質細胞通過上調谷氨酸轉運體、谷氨酰胺合酶和水通道蛋白4表達,增加對突觸間隙中谷氨酸的再攝取,從而參與急性疼痛傳遞的調節(jié)。
【學位單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2010
【中圖分類】：R749.16
【部分圖文】：

生化檢測顯示：與對照組相比，模型組NO生成量增多，iNOS活性增高。總NOS活性兩者之間沒有顯著性差異（圖1）。圖1. 腦內NO含量及NOS活性 *表示與對照組相比P<0.05，n=1014

南京醫(yī)科NOS表達量變化lot 及光密度分析結果顯示，與對照組相比，模型組 iS 表達量降低（圖 2）。免疫組化結果顯示：相比于對 陽性神經元數(shù)量明顯減少，但 iNOS 陽性細胞數(shù)量和。這些 iNOS 陽性細胞具體包括兩種類型：小膠質細個細胞輪廓；另一種為神經元樣，胞漿淡染，胞核體細胞層以及齒狀回的顆粒細胞層。

南京醫(yī)科大學碩士學位論圖 3. 海馬 iNOS 和 nNOS 免疫陽性細胞的表達與分布 對照組可見淡染小膠質樣細胞并表現(xiàn)為胞體瘦小，突起纖細的靜息狀態(tài)（三角所示）；模型組可見深染的小膠質樣細胞并表現(xiàn)為胞體肥大，突起粗短激活狀態(tài)（三角所示），另在錐體細胞層可見 iNOS 陽性反應產物分布，部分為深染色神經元樣細胞（箭頭所示）。相比于對照組，模型組 nNOS 免疫陽性細胞數(shù)量明顯減少。標尺=50 μm。3.3. IBa1免疫陽性小膠質細胞在小鼠腦內的表達變化小鼠腦內 IBa1 免疫組化染色顯示，與對照組相比，模型組在海馬及皮層區(qū)域的陽性染色明顯增多，并可見激活的小膠質細胞，表現(xiàn)為細胞胞體肥大，突起增粗（圖 4、5）。

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 楊麗娟;鄔力祥;劉發(fā)益;周p

本文編號：2815960