第一部分誘導(dǎo)性一氧化氮合酶參與阿爾茲海默病模型鼠病理進(jìn)程 研究背景與目的:一氧化氮(NO)作為神經(jīng)遞質(zhì)具有多種功能,但在病理情況下,大量表達(dá)的NO可導(dǎo)致神經(jīng)損傷。中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的NO主要由神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)和誘導(dǎo)性一氧化氮合酶(iNOS)合成。近期研究提示iNOS參與了阿爾茲海默病(AD)的發(fā)病進(jìn)程。本實(shí)驗(yàn)室既往研究證實(shí)長期D-半乳糖注射結(jié)合雙側(cè)卵巢切除是一種復(fù)合因素AD動(dòng)物模型。本學(xué)位論文擬進(jìn)一步研究iNOS是否參與該AD模型的病理進(jìn)程。 方法和結(jié)果:成年雌性ICR小鼠行雙側(cè)卵巢摘除,術(shù)后腹腔注射D-半乳糖100mg/kg/d,持續(xù)8周,進(jìn)行下列研究,結(jié)果如下: 1.生化結(jié)果顯示,與對照組相比,模型組腦內(nèi)NO生成量增高,iNOS活性增高,nNOS活性下降;Western blot結(jié)果顯示模型組iNOS表達(dá)量上調(diào),而nNOS表達(dá)量下調(diào)。 2.免疫組化結(jié)果顯示,與對照組相比,模型組海馬和大腦皮層IBa1陽性小膠質(zhì)細(xì)胞和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目和活化比例明顯增多。 3.免疫熒光及雙標(biāo)染色結(jié)果顯示,模型組部分MAC-1陽性小膠質(zhì)細(xì)胞和血管周圍GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞共表達(dá)iNOS,并可見神經(jīng)元樣細(xì)胞也表達(dá)iNOS,而對照組未見明顯共表達(dá)免疫熒光信號(hào)。 結(jié)論:D-半乳糖注射結(jié)合內(nèi)源性卵巢激素剝奪AD模型小鼠腦中存在iNOS表達(dá)增高,這種表達(dá)增高來源于激活的小膠質(zhì)細(xì)胞、血管周圍活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞以及神經(jīng)元細(xì)胞。 第二部分谷氨酸能神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞參與福爾馬林誘導(dǎo)的急性疼痛傳遞 研究背景與目的:谷氨酸作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的興奮性遞質(zhì)具有多種神經(jīng)功能;星形膠質(zhì)細(xì)胞通過谷氨酸-谷氨酰胺循環(huán)調(diào)節(jié)突觸間隙谷氨酸濃度,從而參與谷氨酸神經(jīng)傳遞過程。既往研究顯示脊髓后角谷氨酸能神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞參與福爾馬林誘導(dǎo)的痛覺傳遞。在此研究基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)擬進(jìn)一步研究谷氨酸能神經(jīng)元以及星形膠質(zhì)細(xì)胞是否參與以及如何參與中樞痛覺傳遞。方法與結(jié)果:ICR小鼠右后足背面皮下注射2.5%的福爾馬林40μl后,進(jìn) 行下列研究,結(jié)果如下: 1.行為學(xué)測試顯示,模型組疼痛行為持續(xù)時(shí)間明顯高于對照組。 2. c-Fos/谷氨酸雙標(biāo)染色結(jié)果證實(shí)模型組在脊髓后角、丘腦腹后外側(cè)核和大腦感覺皮層均可見c-Fos/谷氨酸雙標(biāo)染色細(xì)胞,而在對照組谷氨酸陽性細(xì)胞內(nèi)未見明顯c-Fos表達(dá)。 3.膠質(zhì)纖維酸性蛋白免疫熒光染色顯示,相比于對照組,模型組脊髓后角胞體肥大的活化星形膠質(zhì)細(xì)胞比例明顯增多,但丘腦腹后外側(cè)核和大腦感覺皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞活化不明顯。 4.脊髓后角免疫組化染色、免疫印跡及光密度分析結(jié)果顯示,與對照組相比,模型組脊髓后角谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體1、谷氨酸/天冬氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體、谷氨酰胺合酶和水通道蛋白4表達(dá)上調(diào)。 結(jié)論:谷氨酸能神經(jīng)元在脊髓后角、丘腦腹后外側(cè)核、初級(jí)感覺皮層三個(gè)水平參與福爾馬林誘導(dǎo)的急性疼痛傳遞。脊髓后角星形膠質(zhì)細(xì)胞通過上調(diào)谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體、谷氨酰胺合酶和水通道蛋白4表達(dá),增加對突觸間隙中谷氨酸的再攝取,從而參與急性疼痛傳遞的調(diào)節(jié)。
【學(xué)位單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R749.16
【部分圖文】：

生化檢測顯示：與對照組相比，模型組NO生成量增多，iNOS活性增高。總NOS活性兩者之間沒有顯著性差異（圖1）。圖1. 腦內(nèi)NO含量及NOS活性 *表示與對照組相比P<0.05，n=1014

南京醫(yī)科NOS表達(dá)量變化lot 及光密度分析結(jié)果顯示，與對照組相比，模型組 iS 表達(dá)量降低（圖 2）。免疫組化結(jié)果顯示：相比于對 陽性神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，但 iNOS 陽性細(xì)胞數(shù)量和。這些 iNOS 陽性細(xì)胞具體包括兩種類型：小膠質(zhì)細(xì)個(gè)細(xì)胞輪廓；另一種為神經(jīng)元樣，胞漿淡染，胞核體細(xì)胞層以及齒狀回的顆粒細(xì)胞層。

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論圖 3. 海馬 iNOS 和 nNOS 免疫陽性細(xì)胞的表達(dá)與分布 對照組可見淡染小膠質(zhì)樣細(xì)胞并表現(xiàn)為胞體瘦小，突起纖細(xì)的靜息狀態(tài)（三角所示）；模型組可見深染的小膠質(zhì)樣細(xì)胞并表現(xiàn)為胞體肥大，突起粗短激活狀態(tài)（三角所示），另在錐體細(xì)胞層可見 iNOS 陽性反應(yīng)產(chǎn)物分布，部分為深染色神經(jīng)元樣細(xì)胞（箭頭所示）。相比于對照組，模型組 nNOS 免疫陽性細(xì)胞數(shù)量明顯減少。標(biāo)尺=50 μm。3.3. IBa1免疫陽性小膠質(zhì)細(xì)胞在小鼠腦內(nèi)的表達(dá)變化小鼠腦內(nèi) IBa1 免疫組化染色顯示，與對照組相比，模型組在海馬及皮層區(qū)域的陽性染色明顯增多，并可見激活的小膠質(zhì)細(xì)胞，表現(xiàn)為細(xì)胞胞體肥大，突起增粗（圖 4、5）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 楊麗娟;鄔力祥;劉發(fā)益;周p

本文編號(hào)：2815960