【摘要】：背景與目的 血管性癡呆(Vascular dementia, VD)在老年癡呆中占第二位,但有研究表明,在亞洲高齡人群中VD的發(fā)病率甚至高于阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)居第一位。隨著社會老齡化和人口平均壽命的增加,腦血管疾病發(fā)病率日趨增多,VD的發(fā)病率也隨之有逐年上升的趨勢。由于本病具有患病率和致殘率高、治療療效差、病程長等特點,給社會和病人的家庭帶來了沉重的經(jīng)濟和精神負擔(dān)。因此,對VD及其治療方法的研究成為了21世紀的重要課題,越來越引起全世界各國學(xué)者及醫(yī)師的普遍關(guān)注。 目前VD的治療藥物有膽堿酯酶抑制劑,增加神經(jīng)營養(yǎng)制劑,腦細胞代謝活化劑、神經(jīng)生長因子及營養(yǎng)因子、抗氧化劑等,但療效均不明確。丁苯酞(dl-n-butylphthalide, dl-NBP)最早用于急性缺血性卒中的治療,并取得了滿意的療效,近年來有部分醫(yī)師把丁苯酞用于VD的治療,但丁苯酞對VD是否有效及其作用機制如何,目前研究甚少。 VD的發(fā)病基礎(chǔ)是缺血,機制之一是神經(jīng)元的缺失,突觸素的減少,因此如果能使損傷后的神經(jīng)得以修復(fù)及重塑,就有可能改善VD的相關(guān)癥狀甚至治愈該疾病。神經(jīng)修復(fù)及突觸重塑已經(jīng)成為人們高度關(guān)注的醫(yī)學(xué)熱門話題,并有大量的實驗研究已經(jīng)證實了神經(jīng)修復(fù)及突觸重塑的存在,而生長相關(guān)蛋白-43(GAP-43)和突觸素P38是神經(jīng)損傷重塑中的兩個重要因子。本研究即通過建立VD大鼠模型,觀察其學(xué)習(xí)記憶能力及GAP-43和P38在蛋白及基因水平上的表達變化和丁苯酞注射液對其影響，旨在探討丁苯酞注射液治療VD的療效及作用機制。 材料與方法 1.實驗動物及分組健康雄性Wistar大鼠80只(鄭州大學(xué)實驗動物中心提供),體重350-450g,鼠齡為14-15周。隨機分為假手術(shù)組(n=25),VD組(n=28),丁苯酞組(n=27),實驗中VD組、丁苯酞組各死亡3只。 2.模型制備及藥物干預(yù)采用雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎制備VD模型,丁苯酞組給予丁苯酞注射液6mg/kg (臨用前制成乳劑)腹腔注射,每日一次,共6周,假手術(shù)組和VD組給予相同劑量的生理鹽水腹腔注射,每日一次,共6周。 3.學(xué)習(xí)記憶能力測定腹腔注射結(jié)束后用MG-Y-型迷宮對其學(xué)習(xí)和記憶能力進行測定,大鼠受到電擊后從起步區(qū)直接逃到安全區(qū)為正確反應(yīng),連續(xù)10次測試中有9次正確反應(yīng)為達到學(xué)會標(biāo)準(zhǔn)。學(xué)習(xí)能力：達到學(xué)會標(biāo)準(zhǔn)前所需的電擊次數(shù)。記憶能力：學(xué)習(xí)測試后休息24小時,同法檢測,記錄大鼠電擊10次中的正確反應(yīng)次數(shù)。 4.標(biāo)本制備學(xué)習(xí)記憶能力測試完畢,將大鼠麻醉,假手術(shù)組、VD、丁苯酞組各取出3只,經(jīng)心臟灌注內(nèi)固定取腦,取出海馬組織用甲醛固定,行HE染色觀察形態(tài)學(xué)變化；其余大鼠麻醉后迅速斷頭取腦,分離出海馬組織(冰上操作)立即置液氮中保存,分為兩組檢測系統(tǒng)：1nRNA檢測、蛋白檢測。各個系統(tǒng)每組標(biāo)本基本相同(詳見實驗結(jié)果表)。 5.觀察指標(biāo)GAP-43和P38蛋白定量測定應(yīng)用Western blotting技術(shù)檢測,mRNA應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測；組織形態(tài)學(xué)改變應(yīng)用HE染色。 6.統(tǒng)計學(xué)方法所有實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)誤(x±s)表示,采用單因素方差分析對多組數(shù)據(jù)進行比較,用S-N-K法進行組間兩兩比較,所有數(shù)據(jù)采用spss17.0軟件進行統(tǒng)計分析,α=0.05。 結(jié)果 1Y迷宮實驗VD大鼠組學(xué)習(xí)記憶能力最差(學(xué)習(xí)成績71.60士4.10,記憶成績4.24±1.20),丁苯酞組居中(學(xué)習(xí)成績53.04±3.57,記憶成績6.20±0.93),而假手術(shù)組學(xué)習(xí)記憶能力最強(學(xué)習(xí)成績39.88±3.97,記憶成績7.36±1.25)三組間的成績有顯著性差異,P0.05. 2海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)比較HE染色后在光鏡下觀察到：假手術(shù)組海馬區(qū)神經(jīng)元排列緊密,數(shù)量多,細胞核大清晰,染色均勻,核仁明顯；VD組神經(jīng)元排列不規(guī)整,細胞少,胞核深染,固縮,胞漿增多,核仁消失；丁苯酞組正常細胞較VD組多,但較假手術(shù)組減少,排列較密,核仁呈橢圓形或圓形,染色質(zhì)豐富,固縮變性的神經(jīng)元少見。 3mRNA測定結(jié)果VD組,丁苯酞組海馬區(qū)GAP-43mRNA的表達較假手術(shù)組上調(diào)(P均0.05),且丁苯酞組較VD組上調(diào)明顯(P0.05)；在P38mRNA的表達上,丁苯酞組較假手術(shù)組,VD組均上調(diào)(均P0.05),而VD組和假手術(shù)組無明顯差別(P0.05)。假手術(shù)組、VD組、丁苯酞組GAP-43mRNA表達依次為：0.49±0.05,1.11士0.18,1.31±0.06；P38mRNA依次為：0.58±0.06,0.60±0.06,1.28±0.04。 4蛋白測定結(jié)果在GAP-43蛋白表達上,丁苯肽組較假手術(shù)組和VD組均上調(diào)(P均0.05),而假手術(shù)組和VD組無明顯差別(P0.05)；在P38蛋白表達上,VD組、丁苯酞組較假手術(shù)組均下降(P均0.05),但VD組下降更明顯(P0.05)。假手術(shù)組、VD組、丁苯酞組GAP-43蛋白表達依次為：1.17±0.05,1.19±0.05,1.61±0.04；P38蛋白表達依次為：1.71±0.04,1.32±0.06,1.57±0.05。 結(jié)論 1VD大鼠海馬組織內(nèi)P38蛋白表達下調(diào)與大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力損害密切相關(guān),是VD導(dǎo)致認知功能障礙的分子機制之一； 2GAP-43mRNA、GAP-43蛋白及P38mRNA在缺血后的表達變化不是VD大鼠認知功能障礙的分子機制； 3GAP-43和P38兩者在mRNA和蛋白的變化是丁苯酞注射液改善VD認知障礙的分子機制； 4丁苯酞注射液亦可能參與上調(diào)GAP-43的蛋白表達而上調(diào)P38的蛋白表達,從而促進突觸的重塑和新突觸的形成,最終改善VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R749.13

【參考文獻】

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1 田先翔;梅瓊彬;楊偉峰;;大鼠血管性癡呆模型的制作[J];湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2007年01期

2 胡增\

本文編號：2802995