【摘要】： [背景]帕金森病(Parkinson's disease, PD)和阿爾茨海默病(Alzheimer disease, AD)是常見(jiàn)于中老年人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,其病因和發(fā)病機(jī)制目前尚不十分清楚。PD在臨床癥狀上與AD有很大的重疊性,在PD病人中也可產(chǎn)生某些認(rèn)知功能的損害甚至發(fā)展為癡呆。而AD在疾病的中晚期,甚至早期也常出現(xiàn)帕金森綜合癥的表現(xiàn),是否兩者在發(fā)病機(jī)制上存在某種聯(lián)系成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。 近年來(lái)的研究提示,免疫炎性反應(yīng)與神經(jīng)系統(tǒng)的變性疾病包括PD及AD的發(fā)病機(jī)理有著密切的關(guān)系。無(wú)論在各種PD和AD動(dòng)物模型還是在PD和AD患者的病理尸檢中,都發(fā)現(xiàn)在變性的神經(jīng)元周?chē)奂罅勘患せ畹男∧z質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞,這些小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放大量的炎性因子、炎性蛋白、神經(jīng)毒素,包括白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、腫瘤壞死因子a(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)、α1-抗糜蛋白酶(α1-antichymotrypsin, ACT)等。這些高表達(dá)的炎性因子主要存在于PD患者的黑質(zhì)紋狀體系統(tǒng)和AD患者β淀粉樣蛋白(Amyloidβ-protein,Aβ)斑塊和老年斑(senile plaque,SP)的中心。以上的證據(jù)提示,小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞異常激活后釋放的炎性因子可能參與了PD的多巴胺能神經(jīng)元和AD的神經(jīng)元進(jìn)行性變性過(guò)程。本研究利用檢測(cè)外周血清炎性因子的水平變化及炎性因子基因多態(tài)性研究,進(jìn)一步研究PD和AD可能的發(fā)病原因和發(fā)病機(jī)理。 在炎性因子參與AD的致病過(guò)程中,Aβ起著重要作用。淀粉樣前體蛋白(Amyloid Precursor Protein,APP)經(jīng)過(guò)分泌酶的分解產(chǎn)生Aβ。在血小板中包含了外周循環(huán)中95%以上的APP。在AD患者腦中APP經(jīng)p分泌酶參與的淀粉源途徑分解產(chǎn)生沉積在SP中的Aβ,而與在腦組織中的變化相似的是,在AD患者的血小板中,APP代謝的淀粉源途徑被激活,促使Aβ沉積形成AD特異性病理改變中的老年斑。單克隆抗體22C11可以封閉APP的氨基末端,用其做免疫印跡,可以把這些APP分成分子量為120-130kDa和110kDa的兩個(gè)片段。近來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),AD患者血小板中的APP兩種片段的比例(APP ratio,APPr)與正常對(duì)照組相比有明顯下降。 [目的]通過(guò)觀察PD患者和AD患者外周血清IL-1β、IL-6、TNF-α、ACT的水平及檢測(cè)IL-6、ACT和載脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)基因多態(tài)性,進(jìn)一步了解PD和AD的病因和發(fā)病機(jī)制,為開(kāi)發(fā)新的能夠延緩PD和AD進(jìn)程的藥物尋找一些特異的生物學(xué)標(biāo)記,為提供安全有效的治療方法提供理論依據(jù),同時(shí)我們測(cè)定我國(guó)AD患者外周血小板源性的APPr的變化,并分析炎性蛋白ACT對(duì)APPr的影響,以期發(fā)現(xiàn)我國(guó)AD患者APPr的特點(diǎn),為找到AD診斷的外周生物學(xué)新指標(biāo)提供新思路。 [方法]本文采用病例-對(duì)照研究,選取PD患者150例,AD患者100例,健康對(duì)照100例,于清晨對(duì)PD患者、AD患者及健康對(duì)照空腹采集靜脈血,提出全血基因組DNA后,采用基因芯片對(duì)所有對(duì)象進(jìn)行IL-6、ACT和ApoE基因多態(tài)性的檢測(cè),分析各基因多態(tài)性與疾病的關(guān)系。并各選取40例分離血清后,采用夾心式酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進(jìn)行IL-1β, IL-6, TNF-α, ACT的測(cè)定,分析各炎性因子與PD和AD的關(guān)系。運(yùn)用蛋白免疫的方法(Western Blot),對(duì)40例AD患者與30例對(duì)照組的血小板APPr進(jìn)行測(cè)定,采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以P0.05或P0.01為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 [結(jié)果] 1、病例組和對(duì)照組年齡、性別匹配,具有可比性。 2.、AD組、PD組和對(duì)照組三組血清中IL-1β水平不同,組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=105.959,P=0.000)。PD組血清IL-1β水平高于AD組和對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。AD組血清IL-1β水平也高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) 3、AD組、PD組和對(duì)照組三組血清中IL-6水平不同,組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=8.352,P=0.000)。AD組與PD組血清IL-6水平高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) 4.、AD組、PD組和對(duì)照組三組血清中TNF-α水平不同,組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=48.702,P=0.000)。AD組與PD組血清TNF-α水平高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 5.、AD組、PD組和對(duì)照組三組血清中ACT水平不同,組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=20.966,P=0.000)。AD組與PD組血清ACT水平高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) 6、對(duì)40例AD患者進(jìn)行MMSE評(píng)分與血清IL-1β、IL-6、TNF-α、ACT水平的相關(guān)分析顯示：MMSE分值與血清IL-6水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.951,P0.05),兩者回歸系數(shù)具有顯著意義(P0.01)。MMSE分值與血清ACT水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.598,P0.05),兩者回歸系數(shù)具有顯著意義(P0.01)。 7、對(duì)40例PD患者進(jìn)行H-Y評(píng)分與血清IL-1β、IL-6、TNF-α、ACT水平的相關(guān)分析顯示：H-Y評(píng)分與血清IL-1β水平呈正相關(guān)(r=0.686,P0.05),兩者回歸系數(shù)具有顯著意義(P0.01)。H-Y評(píng)分與血清ACT水平呈正相關(guān)(r=0.874,P0.05),兩者回歸系數(shù)具有顯著意義(P0.01) 8、AD、PD患者的ApoE基因型分布與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。三組基因型分布中,ε3／3型都是最多的,AD組攜帶ε4等位基因的基因型(ε2／4、ε3／4、ε4／4)分布頻率高于對(duì)照組。三組ApoE等位基因頻率分布差異有顯著性(P0.05)。AD組中ApoEε2等位基因頻率較對(duì)照組低,ApoEε4等位基因頻率高于對(duì)照組,帶有ApoEε4等位基因患AD的風(fēng)險(xiǎn)是不帶有ε4等位基因的3.143倍,ε4等位基因與PD患病危險(xiǎn)性無(wú)相關(guān)(P0.05)。 9、AD和PD的IL-6各基因型分布及等位基因分布與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異,且與ApoEε4無(wú)相關(guān)性。 10、AD組ACT基因型和等位基因分布與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P0.05)。PD組ACT A／A基因型頻率明顯高于對(duì)照組(P0.05),且ACT A／A基因型使PD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加2.756倍。與ApoE基因相關(guān)性分析顯示,同時(shí)攜帶ε4與A等位基因的AD患者百分比增高,使AD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加2.984倍。PD組與對(duì)照組相比無(wú)相關(guān)性。 11、AD組血小板APPr小于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。將40例AD病人以血清ACT水平分成兩組后,AD合并高ACT組(血清ACT70mg/dl)和AD合并低ACT組(血清ACT60mg/dl)血小板APPr小于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；AD合并高ACT組與AD合并低ACT組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.125)。 [結(jié)論] 1、AD、PD患者的外周血清中所測(cè)的炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、ACT)水平升高可能是AD及PD發(fā)病的危險(xiǎn)因素,其中血清IL-6、ACT水平與AD患者認(rèn)知功能障礙程度相關(guān),血清IL-1β、ACT水平與PD患者運(yùn)動(dòng)障礙程度相關(guān)。 2、ApoEε4等位基因攜帶是AD的危險(xiǎn)因素,與PD患病危險(xiǎn)性無(wú)關(guān)。ApoEε2等位基因可能是AD的保護(hù)性因子。IL-6基因多態(tài)性與AD、PD的發(fā)病無(wú)明顯相關(guān)性。ACT A/A與PD的發(fā)病相關(guān),可能為PD發(fā)病的危險(xiǎn)因子。ACT基因與ApoE￡4協(xié)同作用影響AD的發(fā)病。 3、AD患者血小板APPr與對(duì)照組相比明顯下降。 4、不同血清ACT水平的AD患者血小板APPr相比無(wú)明顯差異,說(shuō)明ACT可能對(duì)APP的代謝無(wú)明顯影響。 5、血小板APPr有可能成為診斷AD的外周生物學(xué)指標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R742.5;R749.16
【圖文】：

對(duì)照組 4020 2067.20士5.2227.60士2.111.2.2病例組和對(duì)照組三組血清炎性因子水平比較各組血清IL一lp、IL一6、TNF一。、ACT水平結(jié)果見(jiàn)表2，圖1。表2病例組與對(duì)照組血清炎性因子水平比較(又士S)組別例數(shù)IL一lp(ng/l)IL一6(n留l)TNF一Q(ng/l)ACT(m留dl)40.48士 5.136.05士 2.3127.19士 3.1968.30土13.80組 4052.76士6.97 5.74士 1.97 25.83:I=4.3866.12士11.26AP]DD對(duì)照組4030.28士5.72 4.02士 1.9318.67士3.0650.13士10.27，一八口nnU口﨏了0.

本文編號(hào)：2802309