【摘要】： 研究背景： 卒中后抑郁是卒中發(fā)生后常見的并發(fā)癥,1977年Folstein等首次報道抑郁是腦卒中后常見的伴隨癥狀,稱為卒中后抑郁(post-stroke depression, PSD)。一項多中心研究表明,腦卒中后的患者約有61%患有抑郁。目前對于PSD的定義還未明確,普遍認(rèn)為PSD是指腦卒中后出現(xiàn)不同程度的抑郁癥狀并且癥狀持續(xù)2周以上。PSD的總體發(fā)病率為40%-50%,急性期的發(fā)病率約為33%,而康復(fù)期的發(fā)病率會稍升高,女性發(fā)病是男性發(fā)病的2倍,PSD的患者情緒低落,參加活動的興趣減少,使康復(fù)時間延長,使服藥依從性降低,給患者軀體及精神上帶來沉重的負(fù)擔(dān),影響日常生活、學(xué)習(xí)和工作,增加家庭和社會的負(fù)擔(dān),這樣又進一步會加重PSD的病情。 腦卒中是急性腦血管病的總稱,是一類疾病。根據(jù)第四次全國腦血管學(xué)術(shù)會議制定的腦卒中的診斷,腦卒中又分為出血性卒中和缺血性卒中,出血性卒中包括腦出血和蛛網(wǎng)膜下腔出血,缺血性卒中包括腦血栓形成、腦栓塞、腔隙性梗塞和短暫性腦缺血發(fā)作。腦卒中的發(fā)病率高、致殘率高和死亡率高,隨著診療技術(shù)的提高,腦卒中本身所致的危害性也隨著下降,但是由腦卒中引起的并發(fā)癥之一抑郁狀態(tài)的危害性,越來越受到人們的關(guān)注。 根據(jù)DSM-Ⅳ中抑郁的診斷,抑郁是指患者心境低落、與所處的境遇不相稱,可以從悶悶不樂到悲痛欲絕,甚至發(fā)生木僵狀態(tài),嚴(yán)重者可出現(xiàn)妄想、幻覺等精神疾病癥狀,某些病例中焦慮與運動性激越比抑郁更為顯著。抑郁的病因可概括為生物學(xué)因素和社會心理學(xué)因素,兩者互相影響,其中生物學(xué)因素為主要因素。生物學(xué)因素包括三個方面：一為遺傳易感性,即有抑郁家族史的人群患抑郁的幾率是一般人群的2倍；二為神經(jīng)遞質(zhì)的改變,存在兩種學(xué)說：(1)單胺假說：此假說于60年代提出,認(rèn)為抑郁是腦中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)[去甲腎上腺素(Norepinephrine,NE)和5-羥色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)】功能不足引起；(2)受體假說：70年代以來人們對突觸后受體敏感性的改變開始重視,提出抑郁癥是腦中NE／5-HT的受體敏感性增高的緣故；三為神經(jīng)內(nèi)分泌研究,即抑郁病人下丘腦-垂體-腎上腺軸功能障礙,血漿皮質(zhì)醇水平提高,尿皮質(zhì)醇及代謝產(chǎn)物也高。 PSD的發(fā)病機制目前尚不明確。近年來學(xué)者們對PSD進行了一系列的研究,普遍認(rèn)為是由社會心理學(xué)、神經(jīng)解剖學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)等多方面因素介導(dǎo)的。目前研究較多的為以下三個方面：(1)卒中后抑郁與卒中的部位的相關(guān)性研究：Robinson等認(rèn)為卒中的部位是卒中后抑郁發(fā)生的決定因素。研究發(fā)現(xiàn)左前半球和左前皮質(zhì)下?lián)p害累及左額葉背外側(cè)者更易發(fā)生PSD,病灶越接近額極,PSD發(fā)生率越高。NE和5-HT神經(jīng)元胞體位于腦干,其軸突通過丘腦下部、基底神經(jīng)節(jié)區(qū),環(huán)繞胼胝體和放射冠,然后由前向后通過深層皮質(zhì),并逐漸發(fā)出分支,末端終止于表層,形成額葉／顳葉-基底節(jié)-腦干腹側(cè)環(huán)路,該環(huán)路負(fù)責(zé)調(diào)控情緒、睡眠和認(rèn)知等,當(dāng)病灶累及以上環(huán)路時,引起NE和5-HT之間的平衡失調(diào)及其通路破壞從而導(dǎo)致抑郁。Frishkoff等研究發(fā)現(xiàn),PSD患者左半球額部的N400效應(yīng)早于其他部位出現(xiàn),且持續(xù)時間長。但也有學(xué)者認(rèn)為卒中后抑郁與卒中的病變部位無關(guān)。因此,有關(guān)卒中后抑郁與卒中病變部位的相關(guān)性目前仍未有一致的結(jié)論。(2)卒中后抑郁與神經(jīng)遞質(zhì)的相關(guān)性研究：NE和5-HT是神經(jīng)系統(tǒng)的重要遞質(zhì),與人類的情感活動和精神活動緊密相關(guān)。NE和5-HT水平的下降會引起情緒低落等抑郁癥狀。卒中后引起NE和或5-HT神經(jīng)元損傷,就會引起NE和5-HT的合成減少,或者引起突觸后膜的5-HT受體數(shù)目和或敏感性改變都會導(dǎo)致抑郁.(3)卒中后抑郁與神經(jīng)營養(yǎng)的相關(guān)性研究：腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子是神經(jīng)營養(yǎng)家族的主要成員,它參與了神經(jīng)的再生、分化以及損傷后修復(fù)有關(guān)。 近年來許多學(xué)者都研究了同型半胱氨酸不但和卒中有關(guān),而且與抑郁呈正相關(guān)關(guān)系。Bottiglieri等發(fā)現(xiàn)50%的抑郁患者血中總Hcy水平高于其他人群對照組。Tolmunen等還發(fā)現(xiàn)抑郁的危險程度隨著血中總Hcy水平的增高而增加。 同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)是甲硫氨酸代謝過程中一個關(guān)鍵的中間代謝產(chǎn)物,有兩條途徑：最主要的途徑是經(jīng)過N5-甲基四氫葉酸在甲硫氨酸合成酶(Methionine Synthase,MS或者MTR)作用下提供甲基轉(zhuǎn)變甲硫氨酸,此途徑需要葉酸和維生素B12輔助,N5-CH3-FH4是四氫葉酸經(jīng)N5,N10-亞甲基四氫葉酸還原酶(N5, N10-methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)催化5,10-亞甲基四氫葉酸而產(chǎn)生；另一條途徑是通過胱硫醚縮合酶(Cystathionine (?)-Synthase,CBS)催化與絲氨酸縮合成胱硫醚,后者進一步生成半胱氨酸和酮丁酸。 Hcy引起抑郁的機制可能涉及以下三個方面：(1)Hcy升高會影響單胺遞質(zhì)的甲基化過程。(2)Hcy導(dǎo)致的鈉、鉀2ATP酶的抑制可能與抑郁有關(guān)。(3)Hcy及其代謝產(chǎn)物可作為離子通道和幾種代謝型谷氨酸受體激動劑而產(chǎn)生神經(jīng)毒性作用。NE或5-HT是導(dǎo)致抑郁癥發(fā)生的重要神經(jīng)遞質(zhì)。血漿Hcy水平升高提示體內(nèi)最重要的甲基直接供給體S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)的生成減少。使得甲基化代謝無法正常進行,其中影響之一就是NE無法甲基化生成腎上腺素,引起NE在神經(jīng)末梢堆積。當(dāng)神經(jīng)末梢胞漿中游離的NE濃度過高時,會反饋抑制囊泡中NE的生物合成,當(dāng)沖動到達神經(jīng)末梢時,NE釋放到突觸間隙減少,功能降低,從而引起抑郁的產(chǎn)生。有研究已發(fā)現(xiàn)同型半胱氨酸作用于神經(jīng)遞質(zhì)的機制是通過抑制兒茶酚胺和SAM中催化甲基化反應(yīng)的酶類。 Reynols等在70年代第一次提出同型半胱氨酸-甲基供體途徑與抑郁之間的關(guān)系。Bryen等已經(jīng)證明了Hcy與神經(jīng)遞質(zhì)有關(guān)。Hcy與神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)的實驗中,最直接證明的研究是發(fā)現(xiàn)抑郁患者若血中Hcy水平高則腦脊液中的SAM、5-HT和NE等神經(jīng)遞質(zhì)會降低,間接的研究表明SAM可以作為抗抑郁藥物,且效果要優(yōu)于安慰劑和三環(huán)類抗抑郁藥。 在Hcy甲基化過程中有一些限速酶如MTHFR、CBS和MTR,其中MTHFR是同型半胱氨酸代謝中最關(guān)鍵的酶。人類MTHFR基因定位于常染色體1p36.3上,包括11個外顯子和10個內(nèi)含子,cDNA全長212 kb。MTHFR基因至少有7個位點發(fā)生C→T堿基變異,分別位于559,677,692,764,985,1 015和1081處,目前研究認(rèn)為位于第4外顯子的C677T堿基突變最為常見。C677T(丙氨酸→纈氨酸)堿基變異可產(chǎn)生HinfI限制性酶切位點,使MTHFR熱敏感性改變而致酶活性改變,突變純合子酶活性只有正常的30%,雜合子酶活性為正常的65%。許多研究認(rèn)為MTHFR基因的677C→T的突變引起了MTHFR活性的降低,從而升高了血中Hcy的水平。Osvaldo等研究發(fā)現(xiàn)攜帶MTHFR C677T的TT基因型的參與者要比攜帶CC基因型的參與者血中Hcy要高0.19mg／L。對挪威老年人群進行研究中發(fā)現(xiàn)攜帶TT基因型的MTHFR基因與抑郁有關(guān),而不攜帶TT基因型的與抑郁無關(guān)。在另外一些研究中還發(fā)現(xiàn)MTHFR基因的677C→T的突變與抑郁呈正相關(guān)關(guān)系。 目的： 本實驗?zāi)康脑谟谔接懜逪cy與PSD的對應(yīng)關(guān)系,MTHFR基因多態(tài)性在卒中后抑郁中的作用,探討MTHFR基因多態(tài)性與PSD的關(guān)系。 研究方法及分組： 以珠江醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院病人為研究人群,患者根據(jù)第四次全國腦血管學(xué)術(shù)會議做出卒中診斷和漢密爾頓抑郁量表做出抑郁診斷,按入組條件選擇入組病人例,分為卒中組50例(男32例,女18例)和卒中后抑郁組59例(男38例,女21例)。采用熒光偏振免疫法檢測血漿Hcy濃度。運用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性分析技術(shù)(Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP),采集被試者全血2mL,EDTA抗凝后采用苯酚-氯仿抽提法提取外周血白細(xì)胞和基因組DNA。利用PCR-RFLP應(yīng)用引物(上游5'-T GA A GG A GA A GGT GT CT G CGG GA-3',下游為：5'-A GG A CGGT G CGG T GA GA G T G-3')擴增MTHFR基因,用Hinf I內(nèi)切酶檢測MTHFR基因677C→T的多態(tài)性。比較基因頻率和基因型。運用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包,采用卡方檢驗比較卒中組與卒中后抑郁組各等位基因,基因型頻率分布的差異。 結(jié)果： 卒中后抑郁組血漿Hcy水平明顯高于卒中組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-12.840,P=0.000)。卒中后抑郁組血漿高Hcy發(fā)生率較卒中組高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-17.958,P=0.000)。進一步分層分析,卒中組內(nèi)男性和女性Hcy濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-0.716,P=0.477),說明卒中組內(nèi)男女性別不影響Hcy濃度的變化。卒中后抑郁組內(nèi)男性和女性Hcy濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=-0.657,P=0.516),說明卒中后抑郁組內(nèi)男女性別不影響Hcy濃度的變化。對于CC基因型的Hcy濃度,卒中組高于卒中后抑郁組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-3.192,P=0.004)；對于CT基因型的Hcy濃度,卒中后抑郁組高于卒中組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-3.782,P=0.001)；對于TT基因型的Hcy濃度,卒中后抑郁組高于卒中組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-3.746,P=0.001)。 經(jīng)卡方吻合度檢驗,卒中后抑郁組和對照組基因型分布均符合Hardy-weinberg平衡定律(P0.05),所選樣本具有群體代表性。卒中組與卒中后抑郁組基因型分布的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=10.312,P=0.006),卒中后抑郁組TT型頻率高于卒中組；卒中組和卒中后抑郁組基因型分布存在差異。卒中組與卒中后抑郁組等位基因頻率的差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=11.065,P=0.001),卒中后抑郁組T等位基因頻率高于卒中組。卒中組與卒中后抑郁組在等位基因頻率上確實存在差異,OR為2.510,95%CI為1.452-4.338,為攜帶T基因是發(fā)生卒中后抑郁的危險因素。 結(jié)論： 1.卒中后抑郁患者血漿Hcy濃度水平升高且血漿高Hcy發(fā)生率高于卒中患者。提示血漿Hcy濃度升高可能是卒中后抑郁的一個危險因素。 2.攜帶TT基因型和T等位基因?qū)cy濃度的影響最大。本研究發(fā)現(xiàn)性別和年齡對Hcy濃度的影響不明顯。 3.MTHFR基因C677T突變純合子(TT型)可能是卒中后抑郁的危險因素,可能是通過影響血漿Hcy的水平而參與卒中后抑郁的發(fā)病及臨床表現(xiàn),但具體機制還不清楚。有待于開展深入研究證實。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R749.1
【圖文】：

酶切反應(yīng):從擴增產(chǎn)物中各取20ul，分別加入2.sul限制性內(nèi)切酶 Hinf137oc水浴3h。最后分別以3%的瓊脂糖凝膠(已加入EB)電泳，電壓為SV/cm，lxTBE，45分鐘后凝膠成像系統(tǒng)下鑒定其基因型并攝像。如圖2: M1234567圖2為MTHFR基因PCR一盯LP產(chǎn)物結(jié)果2，7為野生純合型CC型，l，5，6為突變雜合型CT型，3，4為突變純合型TT型結(jié)果判斷:MTllFR基因第4位外顯子發(fā)生C*T堿基突變時，該段序列產(chǎn)生一個內(nèi)切酶Hifl的限制性酶切位點。上下游引物所特異擴增的片段長度為198bp

TT型的Hcy濃度差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (F=5.143，P=0.009)，卒中后抑郁組的CC型、CT型和TT型Hcy濃度差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F一 12.293，p一0.000)。如表7和圖3:表7卒中組和卒中后抑郁組與對照組Hcy濃度的比較(umol/L)組別基因型HcCT型F值P值卒中組卒中后抑郁組CC型 11.30士3.46 8.30士1.8613.58士2.7819.23士6.70丫濃度TT型14.41士1.6722.90士9.28 5.14312.293 0.009 0.000t值 3.192一3782一3746P值 0.004 0.001 0.00125.00叢因型.CC型.CT型口TT型2000不:型膚氨酸半同二卒中組卒中后抑郁組診斷圖3兩組間各基因型同型半膚氨酸的比較

【參考文獻】

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1 馬穎;劉紅;;卒中后抑郁的發(fā)病機制[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊);2009年03期

2 宋波;李艾帆;鄭紅;連建華;張世峰;賀穎;齊華;王茜;許予明;;缺血性腦血管病患者蛋氨酸合成酶基因A2756G多態(tài)性檢測[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2007年03期

3 孫文萍,萬琪,蘇明權(quán);腦梗死患者5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因位點多態(tài)性的研究[J];中華老年心腦血管病雜志;2003年01期

4 趙宇嵐,黃一寧;同型半胱氨酸、亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與腦血管病[J];國外醫(yī)學(xué)腦血管疾病分冊;2000年05期

5 穆紅,劉麗,黃繁嬙,劉明洲;PCR-RFLP法檢測N~5,N~(10)-亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性及其臨床意義[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2000年01期

6 張穎冬,朱志剛,劉陽;血漿Hcy水平及MTHFR基因多態(tài)性與腦梗死的關(guān)系[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2001年04期

7 王祖新;抑郁癥的病因?qū)W研究[J];中華內(nèi)科雜志;1998年08期

本文編號：2800890