【摘要】：精子發(fā)生是一個(gè)多階段,多步驟的持續(xù)分化過程,受到位于性染色體和常染色體上的一系列基因的調(diào)控。精子發(fā)生過程相關(guān)基因的研究對(duì)深入了解精子發(fā)生的分子機(jī)理和闡明男性原發(fā)不育的遺傳病因具有重要的理論和臨床意義。 四川大學(xué)華西醫(yī)院醫(yī)學(xué)遺傳研究室采用消減雜交、mRNA差異顯示、RACE等方法先后克隆了多個(gè)與生精過程相關(guān)的基因,如:TCP11、ZNF230、ZNF313、ZNF463等基因,其中多個(gè)為編碼鋅指蛋白的基因。人ZNF313基因定位于20q13,編碼的228個(gè)氨基酸的鋅指蛋白,同時(shí)含有C_2H_2和C_3HC_4鋅指結(jié)構(gòu)域。由于不同的加尾信號(hào)產(chǎn)生兩個(gè)不同長(zhǎng)度的轉(zhuǎn)錄本,其中750bp的轉(zhuǎn)錄本在睪丸組織中高表達(dá),同時(shí)也在多種組織中有表達(dá)。提示該基因有可能參與了睪丸組織的發(fā)育過程,調(diào)控了精子的發(fā)生。 本文選擇了人ZNF313基因?yàn)閷?duì)象,分別用含有U6和H1啟動(dòng)子的兩種shRNA表達(dá)載體構(gòu)建了針對(duì)人ZNF313基因的五個(gè)shRNA重組表達(dá)載體。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人正常肝HL-7702細(xì)胞株后,RT-PCR和蛋白印跡檢測(cè)結(jié)
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R749.16
【圖文】：

圖1插入片段的基本結(jié)構(gòu)1.3載體的線性化在克隆位點(diǎn)處選擇限制性內(nèi)切酶Xbal和Sall雙酶切消化pAV用+627載體。酶切組成:pAV用6+27，10林9/20林l;10xTbu價(jià)r，15林l;筋al和aszI(10U單l)，各5卜l;ddHZo，60林l;總體積100林l。37oe水浴4小時(shí)。選擇限制性內(nèi)切酶助211和Hindm雙酶切消化pSUPE助oe載體。酶切組成:pSUpE助eo，10林g/20“l(fā);10xMueffr，10林l;兔211和Hindlll(10U單l)，各5協(xié)l;ddHZO，65林l;總體積100林l。37oe水浴4小時(shí)。濃度1%的瓊脂糖凝膠電泳分離雙酶切產(chǎn)物，在紫外燈下用刀片從瓊脂糖凝膠上切下載體片段，然后用QAIGEN公司的QAIuqikc凝膠回收試劑

pAVU/6十27載體圖譜

pSUPER載體圖譜

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 馬用信,張思仲,吳洽慶,孫巖;人受精促進(jìn)肽受體基因(TCP11b)的剪接、克隆和差別表達(dá)[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào);2003年02期

本文編號(hào)：2798297