【摘要】：第一部分 IL-33基因多態(tài)性與漢族人群遲發(fā)性阿爾茨海默氏病的相關(guān)性研究 研究背景 阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一種發(fā)生于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性病變,至今病因不明。該病特征性表現(xiàn)是進(jìn)行性記憶力減退和認(rèn)知功能障礙,是目前老年人癡呆的最主要原因。AD病理學(xué)的特征性改變?yōu)棣?淀粉樣肽(β-amyl oid, Aβ)沉積形成的老年斑,由tau蛋白異常聚集形成的神經(jīng)原纖維纏結(jié),大腦皮層細(xì)胞不同程度的減少,以及星形膠質(zhì)細(xì)胞的增生和肥大。流行病學(xué)資料顯示,全球范圍內(nèi)約35,000,000人罹患此病；此外,隨著年齡的增加每5年該病發(fā)病率即會(huì)成倍增長(zhǎng)。阿爾茨海默病根據(jù)發(fā)病年齡分為：早發(fā)性家族性AD和遲發(fā)性AD (late-onset AD, LOAD),后者發(fā)病年齡晚于65歲,占AD總?cè)藬?shù)的90%以上。AD受遺傳背景影響很大,導(dǎo)致該病的病因錯(cuò)綜復(fù)雜,迄今未完全明了。已有研究表明個(gè)體內(nèi)在的免疫反應(yīng)及繼之導(dǎo)致的神經(jīng)免疫反應(yīng)在AD的發(fā)病機(jī)理中占有重要地位。此外,AD的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)在很大程度上也與免疫基質(zhì)的基因突變有關(guān)系,包括白介素-1(IL-1),IL-6, IL-18等。 IL-33是細(xì)胞因子IL-1超家族中的新成員,它在基質(zhì)細(xì)胞,如上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá),炎癥刺激能促進(jìn)IL-33的表達(dá)。IL-33可由中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)多種細(xì)胞和組織表達(dá)。TLR激動(dòng)劑刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞后,似乎可生成IL-33。IL-33還可通過膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)生成促炎癥因子,因此,IL-33在中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病中可能伴有致病因素的角色,如AD。此外,IL-33在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮一定的保護(hù)性作用,后者是眾所周知的AD的危險(xiǎn)因素。因此,IL-33可能在AD的發(fā)病機(jī)制中可能發(fā)揮重要作用。 最近有研究證實(shí),IL-33基因多態(tài)性(rs11792633及rs7044343)與高加索人群AD顯著相關(guān)。為了驗(yàn)證IL-33是否是亞洲人群AD的候選基因,我們首次開展了亞洲漢族人群的IL-33基因多態(tài)性研究,以明確IL-33與北方漢族人群LOAD的相關(guān)性。 目的 通過分析比較IL-33基因rs 1792633及rs7044343多態(tài)位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率在LOAD組與對(duì)照組中分布的差異,探討IL-33基因多態(tài)性與LOAD發(fā)病的相關(guān)性。 研究對(duì)象 本研究采用美國(guó)神經(jīng)病學(xué)、語言障礙和卒中研究所-老年性癡呆和相關(guān)疾病學(xué)會(huì)(NINCDS—ADRDA)中“很可能AD (probable)"標(biāo)準(zhǔn),選擇LOAD患者322例,并選擇同期就診的382例健康查體者作為對(duì)照。所有研究對(duì)象均為中國(guó)北方漢族人且無親緣關(guān)系。 研究方法 測(cè)定研究對(duì)象的一般特征,確保兩組研究人員在年齡、性別、BMI、血壓數(shù)值、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、膽固醇、血糖上均無顯著差異。所有受試者進(jìn)行ApoE基因分型。抽取外周血抗凝處理后,提取全血基因組DNA。應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解析-電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)技術(shù)探測(cè)IL-33基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs11792633和rs7044343基因型和等位基因。 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.5軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。應(yīng)用student-t檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)比較兩組間人群一般特征的差異,采用Alquein 3.0軟件檢驗(yàn)各SNP位點(diǎn)的基因型分布頻率是否符合Hardy-Weinberg平衡；SNPs的等位基因和基因型頻率分布在病例組和對(duì)照組的比較采用χ2檢驗(yàn),必要時(shí)使用Yates校正,計(jì)算比值比(OR)及其95%可信區(qū)間(CI)表示相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度,進(jìn)行多因素Logistic回歸分析來校正潛在的混淆因素。使用SHE(http://www.analysis.biox.cn/myAnalysis.php)和Haploview3.32程序檢驗(yàn)兩種SNP間連鎖不平衡,構(gòu)建單體型。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn),以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果 1.對(duì)兩組受試者進(jìn)行ApoE基因分型,AD組病人ApoEε4(+)病例為138例,對(duì)照組為92例,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。如預(yù)期所料,APOEε4等位基因攜帶者患LOAD風(fēng)險(xiǎn)較APOEε4(-)者顯著增高(OR=2.36,95% CI：1.71-3.26, P0.01)。 2.SNPrs11792633基因型和等位基因頻率在兩組中分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(基因型p=0.018,等位基因p=0.005)。按是否攜帶ApoEε4等位基因進(jìn)行分組后,ApoEε4(-)亞組中,rs11792633基因型和等位基因頻率在兩組中分布差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(基因型p=0.042,等位基因P=0.013)；rs11792633的次要等位基因(T)在AD中有保護(hù)性作用(OR=0.73,95%CI,0.59-0.91,p=0.005)。 3.SNPrs7044343基因型和等位基因頻率在兩組中分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(基因型p=0.153,等位基因p=0.276)。按是否攜帶ApoEε4等位基因進(jìn)行分組后仍未觀察到顯著性。 4.多因素logistic回歸分析,排除年齡、性別和ApoEε4等位基因的影響后,攜帶rs11792633等位基因T(TT+CT)的人群患LOAD的風(fēng)險(xiǎn)是非攜帶rs11792633等位基因T(CC)人群的0.67倍(OR=0.67,95%CI=0.48-0.92,P=0.015)。 5.單倍體型TC在AD組的頻率顯著低于對(duì)照組(31.9% vs.37.2%,OR=0.77,95%CI=0.62-0.96,P=0.02)。 結(jié)論 1.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,中國(guó)北方漢族人群ApoE基因多態(tài)性與LOAD易感性有關(guān),ApoEε4等位基因攜帶者患LOAD風(fēng)險(xiǎn)明顯升高。 2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,中國(guó)北方漢族人群IL-33基因多態(tài)性與LOAD易感性有關(guān),IL-33單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs11792633等位基因T及單倍體型TC可減低LOAD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。SNPrs7044343基因多態(tài)性與LOAD之間無明顯相關(guān)性。 第二部分 ADAM10基因多態(tài)性與漢族人群遲發(fā)性阿爾茨海默氏病的相關(guān)性研究 研究背景 阿爾茨海默氏病(AD)發(fā)病機(jī)制和學(xué)說中,最重要的是淀粉樣蛋白β(Aβ)的異常沉積。Aβ主要來源于淀粉樣蛋白前體蛋白(APP),APP被p分泌酶和γ分泌酶裂解后,就會(huì)生成具有神經(jīng)毒性的Aβ。然而,目前認(rèn)為APP還有另?xiàng)l裂解途徑,即APP可被α分泌酶裂解,生成可溶性的裂解產(chǎn)物APPs-a,從而可阻礙Aβ的生成,這為治療AD打開了一個(gè)新的視野。目前證實(shí)ADAM10(去整合素-金屬蛋白酶10)即APP的α分泌酶。 目前有實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了ADAM10基因中的9個(gè)SNP,發(fā)現(xiàn)rs2305421基因多態(tài)性與AD有相關(guān)性(P=0.003),此相關(guān)性在一個(gè)大規(guī)模的基因組相關(guān)研究(GWAS)中也得到證實(shí)。上述研究都是針對(duì)高加索人群進(jìn)行的實(shí)驗(yàn),目前尚無針對(duì)亞洲人群的此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。 目的 通過分析比較ADAM10基因rs 2305421多態(tài)位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率在LOAD組與對(duì)照組中分布的差異,探討ADAM10基因多態(tài)性與LOAD發(fā)病的相關(guān)性。 研究對(duì)象 本研究采用美國(guó)神經(jīng)病學(xué)、語言障礙和卒中研究所-老年性癡呆和相關(guān)疾病學(xué)會(huì)(NINCDS—ADRDA)中“很可能AD(probable)"標(biāo)準(zhǔn),選擇LOAD患者400例,并選擇同期就診的388例健康查體者作為對(duì)照。所有研究對(duì)象均為中國(guó)北方漢族人且無親緣關(guān)系。 研究方法 測(cè)定研究對(duì)象的一般特征,確保兩組研究人員在年齡、性別、BMI、血壓數(shù)值、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、膽固醇、血糖上均無顯著差異。所有受試者進(jìn)行ApoE基因分型。抽取外周血抗凝處理后,提取全血基因組DNA。應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解析-電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)技術(shù)探測(cè)ADAM10基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs23054213基因型和等位基因。 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.5軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。應(yīng)用student-t檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)比較兩組間人群一般特征的差異,采用Alquein 3.0軟件檢驗(yàn)各SNP位點(diǎn)的基因型分布頻率是否符合Hardy-Weinberg平衡；SNPs的等位基因和基因型頻率分布在病例組和對(duì)照組的比較采用χ2檢驗(yàn),必要時(shí)使用Yates校正,計(jì)算比值比(OR)及其95%可信區(qū)間(CI)表示相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度,進(jìn)行多因素Logistic回歸分析來校正潛在的混淆因素。所有統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn),以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果 1.對(duì)兩組受試者進(jìn)行ApoE基因分型,AD組病人ApoEε4(+)病例為222例,對(duì)照組為86例,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。如預(yù)期所料,APOE￡4等位基因攜帶者患LOAD風(fēng)險(xiǎn)較APOE￡4(-)者顯著增高(OR=4.38,95%CI：3.211-5.973,P0.01)。 2.SNPrs2305421基因型和等位基因頻率在兩組中分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(基因型p=0.8,等位基因p=0.783)。 3.按是否攜帶ApoEs4等位基因進(jìn)行分組后,ApoEs4(-)亞組中,rs2305421基因型和等位基因頻率在兩組中分布差異仍無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(基因型p=0.124,等位基因P=0.08)。 4.在ApoEs4(+)亞組中,rs2305421基因型和等位基因頻率在兩組中分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(基因型p=0.035,等位基因p=0.037)。AD組等位基因G頻率顯著低于對(duì)照組,等位基因G為保護(hù)性基因(OR=0.682,95%CI=0.476-0.978,P=0.037, Power=55%)。 5.多因素logistic回歸分析,排除年齡、性別和ApoEε4等位基因的影響后,rs2305421基因多態(tài)性隱性模型(GG：AA+AG)與AD仍有強(qiáng)相關(guān)性(OR=0.611,95%CI=0.408-0.931, P=0.023)。 結(jié)論 1.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,中國(guó)北方漢族人群ApoE基因多態(tài)性與LOAD易感性有關(guān),ApoE￡4等位基因攜帶者患LOAD風(fēng)險(xiǎn)明顯升高。 2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,中國(guó)北方漢族人群ADAM10基因多態(tài)性與LOAD易感性有關(guān),尤其是攜帶ApoEε4等位基因的人群,ADAM10單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs2305421的等位基因G可降低LOAD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R749.16
【圖文】：

ApoE基因分型PCR產(chǎn)物電泳圖

【共引文獻(xiàn)】

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1 蔡志友;晏勇;吳芳;李潔穎;;小膠質(zhì)細(xì)胞與阿爾茨海默病神經(jīng)炎癥[J];重慶醫(yī)學(xué);2008年07期

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本文編號(hào)：2791229