【摘要】：第一部分 IL-33基因多態(tài)性與漢族人群遲發(fā)性阿爾茨海默氏病的相關性研究 研究背景 阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一種發(fā)生于中樞神經系統的退行性病變,至今病因不明。該病特征性表現是進行性記憶力減退和認知功能障礙,是目前老年人癡呆的最主要原因。AD病理學的特征性改變?yōu)棣?淀粉樣肽(β-amyl oid, Aβ)沉積形成的老年斑,由tau蛋白異常聚集形成的神經原纖維纏結,大腦皮層細胞不同程度的減少,以及星形膠質細胞的增生和肥大。流行病學資料顯示,全球范圍內約35,000,000人罹患此�。淮送�,隨著年齡的增加每5年該病發(fā)病率即會成倍增長。阿爾茨海默病根據發(fā)病年齡分為：早發(fā)性家族性AD和遲發(fā)性AD (late-onset AD, LOAD),后者發(fā)病年齡晚于65歲,占AD總人數的90%以上。AD受遺傳背景影響很大,導致該病的病因錯綜復雜,迄今未完全明了。已有研究表明個體內在的免疫反應及繼之導致的神經免疫反應在AD的發(fā)病機理中占有重要地位。此外,AD的發(fā)生風險在很大程度上也與免疫基質的基因突變有關系,包括白介素-1(IL-1),IL-6, IL-18等。 IL-33是細胞因子IL-1超家族中的新成員,它在基質細胞,如上皮細胞、內皮細胞中表達,炎癥刺激能促進IL-33的表達。IL-33可由中樞神經系統(CNS)多種細胞和組織表達。TLR激動劑刺激星形膠質細胞后,似乎可生成IL-33。IL-33還可通過膠質細胞誘導生成促炎癥因子,因此,IL-33在中樞神經系統炎性疾病中可能伴有致病因素的角色,如AD。此外,IL-33在動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮一定的保護性作用,后者是眾所周知的AD的危險因素。因此,IL-33可能在AD的發(fā)病機制中可能發(fā)揮重要作用。 最近有研究證實,IL-33基因多態(tài)性(rs11792633及rs7044343)與高加索人群AD顯著相關。為了驗證IL-33是否是亞洲人群AD的候選基因,我們首次開展了亞洲漢族人群的IL-33基因多態(tài)性研究,以明確IL-33與北方漢族人群LOAD的相關性。 目的 通過分析比較IL-33基因rs 1792633及rs7044343多態(tài)位點的基因型頻率和等位基因頻率在LOAD組與對照組中分布的差異,探討IL-33基因多態(tài)性與LOAD發(fā)病的相關性。 研究對象 本研究采用美國神經病學、語言障礙和卒中研究所-老年性癡呆和相關疾病學會(NINCDS—ADRDA)中“很可能AD (probable)"標準,選擇LOAD患者322例,并選擇同期就診的382例健康查體者作為對照。所有研究對象均為中國北方漢族人且無親緣關系。 研究方法 測定研究對象的一般特征,確保兩組研究人員在年齡、性別、BMI、血壓數值、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、膽固醇、血糖上均無顯著差異。所有受試者進行ApoE基因分型。抽取外周血抗凝處理后,提取全血基因組DNA。應用基質輔助激光解析-電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)技術探測IL-33基因單核苷酸多態(tài)性位點rs11792633和rs7044343基因型和等位基因。 統計學方法 應用SPSS11.5軟件做統計學分析。應用student-t檢驗或卡方檢驗比較兩組間人群一般特征的差異,采用Alquein 3.0軟件檢驗各SNP位點的基因型分布頻率是否符合Hardy-Weinberg平衡；SNPs的等位基因和基因型頻率分布在病例組和對照組的比較采用χ2檢驗,必要時使用Yates校正,計算比值比(OR)及其95%可信區(qū)間(CI)表示相對風險度,進行多因素Logistic回歸分析來校正潛在的混淆因素。使用SHE(http://www.analysis.biox.cn/myAnalysis.php)和Haploview3.32程序檢驗兩種SNP間連鎖不平衡,構建單體型。所有統計學檢驗均為雙側概率檢驗,以P0.05為差異有統計學意義的標準。 結果 1.對兩組受試者進行ApoE基因分型,AD組病人ApoEε4(+)病例為138例,對照組為92例,差別有統計學意義(P0.001)。如預期所料,APOEε4等位基因攜帶者患LOAD風險較APOEε4(-)者顯著增高(OR=2.36,95% CI：1.71-3.26, P0.01)。 2.SNPrs11792633基因型和等位基因頻率在兩組中分布差異有統計學意義(基因型p=0.018,等位基因p=0.005)。按是否攜帶ApoEε4等位基因進行分組后,ApoEε4(-)亞組中,rs11792633基因型和等位基因頻率在兩組中分布差異仍有統計學意義(基因型p=0.042,等位基因P=0.013)；rs11792633的次要等位基因(T)在AD中有保護性作用(OR=0.73,95%CI,0.59-0.91,p=0.005)。 3.SNPrs7044343基因型和等位基因頻率在兩組中分布差異無統計學意義(基因型p=0.153,等位基因p=0.276)。按是否攜帶ApoEε4等位基因進行分組后仍未觀察到顯著性。 4.多因素logistic回歸分析,排除年齡、性別和ApoEε4等位基因的影響后,攜帶rs11792633等位基因T(TT+CT)的人群患LOAD的風險是非攜帶rs11792633等位基因T(CC)人群的0.67倍(OR=0.67,95%CI=0.48-0.92,P=0.015)。 5.單倍體型TC在AD組的頻率顯著低于對照組(31.9% vs.37.2%,OR=0.77,95%CI=0.62-0.96,P=0.02)。 結論 1.本實驗結果表明,中國北方漢族人群ApoE基因多態(tài)性與LOAD易感性有關,ApoEε4等位基因攜帶者患LOAD風險明顯升高。 2.本實驗結果表明,中國北方漢族人群IL-33基因多態(tài)性與LOAD易感性有關,IL-33單核苷酸多態(tài)性位點rs11792633等位基因T及單倍體型TC可減低LOAD發(fā)生風險。SNPrs7044343基因多態(tài)性與LOAD之間無明顯相關性。 第二部分 ADAM10基因多態(tài)性與漢族人群遲發(fā)性阿爾茨海默氏病的相關性研究 研究背景 阿爾茨海默氏病(AD)發(fā)病機制和學說中,最重要的是淀粉樣蛋白β(Aβ)的異常沉積。Aβ主要來源于淀粉樣蛋白前體蛋白(APP),APP被p分泌酶和γ分泌酶裂解后,就會生成具有神經毒性的Aβ。然而,目前認為APP還有另條裂解途徑,即APP可被α分泌酶裂解,生成可溶性的裂解產物APPs-a,從而可阻礙Aβ的生成,這為治療AD打開了一個新的視野。目前證實ADAM10(去整合素-金屬蛋白酶10)即APP的α分泌酶。 目前有實驗檢測了ADAM10基因中的9個SNP,發(fā)現rs2305421基因多態(tài)性與AD有相關性(P=0.003),此相關性在一個大規(guī)模的基因組相關研究(GWAS)中也得到證實。上述研究都是針對高加索人群進行的實驗,目前尚無針對亞洲人群的此項實驗。 目的 通過分析比較ADAM10基因rs 2305421多態(tài)位點的基因型頻率和等位基因頻率在LOAD組與對照組中分布的差異,探討ADAM10基因多態(tài)性與LOAD發(fā)病的相關性。 研究對象 本研究采用美國神經病學、語言障礙和卒中研究所-老年性癡呆和相關疾病學會(NINCDS—ADRDA)中“很可能AD(probable)"標準,選擇LOAD患者400例,并選擇同期就診的388例健康查體者作為對照。所有研究對象均為中國北方漢族人且無親緣關系。 研究方法 測定研究對象的一般特征,確保兩組研究人員在年齡、性別、BMI、血壓數值、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、膽固醇、血糖上均無顯著差異。所有受試者進行ApoE基因分型。抽取外周血抗凝處理后,提取全血基因組DNA。應用基質輔助激光解析-電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)技術探測ADAM10基因單核苷酸多態(tài)性位點rs23054213基因型和等位基因。 統計學方法 應用SPSS11.5軟件做統計學分析。應用student-t檢驗或卡方檢驗比較兩組間人群一般特征的差異,采用Alquein 3.0軟件檢驗各SNP位點的基因型分布頻率是否符合Hardy-Weinberg平衡；SNPs的等位基因和基因型頻率分布在病例組和對照組的比較采用χ2檢驗,必要時使用Yates校正,計算比值比(OR)及其95%可信區(qū)間(CI)表示相對風險度,進行多因素Logistic回歸分析來校正潛在的混淆因素。所有統計學檢驗均為雙側概率檢驗,以P0.05為差異有統計學意義的標準。 結果 1.對兩組受試者進行ApoE基因分型,AD組病人ApoEε4(+)病例為222例,對照組為86例,差別有統計學意義(P0.01)。如預期所料,APOE￡4等位基因攜帶者患LOAD風險較APOE￡4(-)者顯著增高(OR=4.38,95%CI：3.211-5.973,P0.01)。 2.SNPrs2305421基因型和等位基因頻率在兩組中分布差異無統計學意義(基因型p=0.8,等位基因p=0.783)。 3.按是否攜帶ApoEs4等位基因進行分組后,ApoEs4(-)亞組中,rs2305421基因型和等位基因頻率在兩組中分布差異仍無統計學意義(基因型p=0.124,等位基因P=0.08)。 4.在ApoEs4(+)亞組中,rs2305421基因型和等位基因頻率在兩組中分布差異有統計學意義(基因型p=0.035,等位基因p=0.037)。AD組等位基因G頻率顯著低于對照組,等位基因G為保護性基因(OR=0.682,95%CI=0.476-0.978,P=0.037, Power=55%)。 5.多因素logistic回歸分析,排除年齡、性別和ApoEε4等位基因的影響后,rs2305421基因多態(tài)性隱性模型(GG：AA+AG)與AD仍有強相關性(OR=0.611,95%CI=0.408-0.931, P=0.023)。 結論 1.本實驗結果表明,中國北方漢族人群ApoE基因多態(tài)性與LOAD易感性有關,ApoE￡4等位基因攜帶者患LOAD風險明顯升高。 2.本實驗結果表明,中國北方漢族人群ADAM10基因多態(tài)性與LOAD易感性有關,尤其是攜帶ApoEε4等位基因的人群,ADAM10單核苷酸多態(tài)性位點rs2305421的等位基因G可降低LOAD發(fā)生風險。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R749.16
【圖文】：

ApoE基因分型PCR產物電泳圖

【共引文獻】

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1 蔡志友;晏勇;吳芳;李潔穎;;小膠質細胞與阿爾茨海默病神經炎癥[J];重慶醫(yī)學;2008年07期

2 吳軍;王愛桃;閔U

本文編號：2791229