【摘要】：研究背景阿爾茨海默病(Alzherimer' s disease AD)是一種神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變,多發(fā)生于老年期,是癡呆最常見的原因。隨著老齡化社會的發(fā)展,AD對人類健康的影響越來越被大家關(guān)注。阿爾茨海默病多隱襲起病,進(jìn)行性加重,其主要臨床表現(xiàn)為記憶力減退、認(rèn)知功能障礙、行為損害、言語障礙等,最終喪失日常生活能力。AD的發(fā)病率日益增長,在中國的流行病學(xué)調(diào)查顯示:目前在老年人群中AD患病人口已經(jīng)超過600萬,預(yù)計到2050年患病人口將超過2000萬,是世界上AD患病人口最多、增長速度最快的地區(qū),而目前針對AD尚缺乏有效的診治措施。阿爾茨海默病的經(jīng)典病理特征被公認(rèn)為是腦內(nèi)β淀粉樣蛋白(Aβ)異常沉積所致老年斑的形成、細(xì)胞內(nèi)高度磷酸化的tau蛋白聚集形成神經(jīng)纖維纏結(jié)以及神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目的缺失。但其具體的發(fā)病機(jī)制目前尚不明確。針對AD的發(fā)病機(jī)制目前存在多種假說,其中Aβ過度沉積假說被大多數(shù)人認(rèn)可,但是隨著針對清除A β來治療AD的臨床試驗的失敗,人們希望能夠?qū)ふ业叫碌陌悬c來治療AD。而線粒體是細(xì)胞產(chǎn)能的重要部分,對維持細(xì)胞的正常功能至關(guān)重要,線粒體功能障礙可以導(dǎo)致細(xì)胞的損傷甚至死亡。神經(jīng)元細(xì)胞是耗能較高的細(xì)胞,而且由于其不能儲存能量,對線粒體產(chǎn)生ATP的功能非常依賴,因此推測線粒體功能障礙可以導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞的死亡而引發(fā)臨床癥狀。目前在AD的發(fā)病機(jī)制中線粒體功能障礙已成為研究的熱點。線粒體功能障礙包括線粒體DNA損傷、線粒體動力學(xué)失平衡、線粒體能量代謝障礙、ROS產(chǎn)生增多等。引起上述情況的任一因素都可能參與到線粒體功能障礙的機(jī)制中去。在線粒體內(nèi)進(jìn)行的三羧酸循環(huán)中有一個關(guān)鍵酶是琥珀酸輔酶A合成酶,它是由α β異源二聚體構(gòu)成,包括恒定不變的α亞單位和可變的β亞單位,其中SCS α亞單位是由SUCLG1編碼的,而SCS β亞單位有2種形式,分別是由SUCLA2編碼的ADP形成β亞單位和SUCLG2編碼的GDP形成β亞單位。該酶存在于線粒體基質(zhì)中,催化琥珀酰輔酶A和NTP(ATP/GTP)轉(zhuǎn)化為琥珀酰、輔酶A和NDP(ADP/GDP)的可逆反應(yīng)。既往我們關(guān)注SUCLA2基因的缺失可以導(dǎo)致線粒體DNA耗竭綜合征,即表現(xiàn)為一組以高耗能器官功能障礙為主的臨床綜合征,但其根本病理特征是線粒體DNA的拷貝數(shù)減少;而且SUCLA2可能特異性地高表達(dá)于神經(jīng)元中,因此我們推測由于SUCLA2與線粒體DNA完整性及線粒體動力學(xué)的重要聯(lián)系,它可能參與了 AD的發(fā)生發(fā)展過程。因此。我們的研究主要圍繞SUCLA2在Aβ刺激的神經(jīng)元中的變化以及這種變化可能導(dǎo)致的線粒體功能障礙的機(jī)制進(jìn)行研究,以希望能夠?qū)で箨P(guān)于AD診治的新的靶點。研究目的1、研究SUCLA2是否高表達(dá)于神經(jīng)元中并且應(yīng)用A β 1-42寡聚體處理神經(jīng)元細(xì)胞后SUCLA2表達(dá)量的變化。2、研究SUCLA2下調(diào)后導(dǎo)致線粒體功能障礙的機(jī)制。研究方法1、新生小鼠大腦皮層原代神經(jīng)元培養(yǎng):將新生鼠在70%的酒精中清洗,然后取出全腦,放入DMEM中浸泡;在顯微鏡下分離皮層,去腦膜,將剝好的皮層放在另一個盛放DMEM的培養(yǎng)皿中;(以上過程冰盒上操作)將剝好腦膜的皮層迅速拿回超凈臺中,放置在冰盒上,吸取多余的DMEM,用無菌刀片將腦組織徹底切碎,轉(zhuǎn)移至10ml離心管中;用冷的HBSS清洗2遍,靜置后吸去上清液;吸取5.5mlHBSS放入另一個離心管中,加入2ml胰酶混勻放入37℃孵箱預(yù)熱;將腦組織放入預(yù)熱的胰酶中,將混合物放入37℃水浴箱中水浴15分鐘,每5分鐘混勻一次;加入1mlFBS終止消化。混勻后等組織徹底沉至管底棄去上清液,用NeurobasalA重懸沉淀,用移液管輕柔吹打15次左右,將消化好的組織吹散;將吹打混勻的細(xì)胞用40nm濾網(wǎng)過濾,將濾過的液體轉(zhuǎn)移至另一個10ml的離心管中,室溫下200g、5分鐘離心;離心后棄去上清液,用神經(jīng)元培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,顯微鏡下計數(shù),然后按大約4～6X106/ml種入提前被多聚賴氨酸包被的孔板中,然后放入37℃、5%的C02孵箱中。原代神經(jīng)元細(xì)胞大約需3-4天半量換液。2、新生小鼠的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng):將新生鼠在70%的酒精中清洗,然后取出全腦,放入DMEM中浸泡;將盛有全腦的培養(yǎng)皿放置在顯微鏡冰盒上,在顯微鏡下分離皮層,去腦膜,將剝好的皮層放在另一個盛放DMEM的培養(yǎng)皿中(冰盒上);將剝好腦膜的皮層迅速拿回超凈臺中,放置在冰盒上,吸取多余的DMEM,用無菌刀片將腦組織徹底切碎,轉(zhuǎn)移至10ml離心管中;用冷的HBSS清洗2遍,靜置后吸去上清液;吸取5.5mlHBSS放入另一個離心管中,加入2ml胰酶混勻放入37℃孵箱預(yù)熱;將腦組織放入預(yù)熱的胰酶中,將混合物放入37℃水浴箱中水浴15分鐘,每5分鐘混勻一次;加入1mlFBS終止消化�；靹蚝蟮冉M織徹底沉至管底棄去上清液,用DMEM(+10%FBS)重懸沉淀,用移液管輕柔吹打25次左右;將吹打混勻的細(xì)胞用40nm濾網(wǎng)過濾,將濾過的液體轉(zhuǎn)移至另一個10ml的離心管中,室溫下200g、5分鐘離心;離心后棄去上清液,用膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,顯微鏡下計數(shù),種入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,然后放入37℃、5%的CO2孵箱中。根據(jù)培養(yǎng)皿中細(xì)胞生長的密度、狀態(tài)及培養(yǎng)基顏色的變化適時更換完全培養(yǎng)基,一般每隔1-2天更換1次。培養(yǎng)基用前在37℃水浴鍋中預(yù)熱。換液時先棄掉舊的培養(yǎng)基,用PBS洗2遍,再加入新的培養(yǎng)基。細(xì)胞傳代時先用PDL包被培養(yǎng)瓶/孔板,傳代之前用ddH20清洗干凈晾干;當(dāng)細(xì)胞滿90%左右傳代。首先吸凈培養(yǎng)基,用37℃預(yù)熱的無菌PBS沖洗3遍后,加入1ml預(yù)熱的0.25%的胰酶,待細(xì)胞輕輕敲擊后可脫落時,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化。收集消化的細(xì)胞至15ml離心管中,1000rpm、5分鐘離心,棄去上清,用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,根據(jù)所需密度進(jìn)行接種,置于37℃、5%的CO2孵箱中培養(yǎng)。3、Western blot免疫印跡:將樣本用1 X loading buffer進(jìn)行提取、收集,然后加入沸水中煮沸10分鐘。將制好的SDS-PAGE膠安放至垂直電泳槽中,加入1 X running buffer,70V,30分鐘預(yù)電泳。將Marker蛋白及目標(biāo)蛋白按所需要求加入孔中,進(jìn)行電泳。電泳分為二階段:一階段30-40V,二階段150V,根據(jù)蛋白Marker的位置確定電泳時間,待所需檢測的蛋白分離后結(jié)束電泳斷開電源。按所需準(zhǔn)備PVDF膜及濾紙,將PVDF膜使用之前浸泡于甲醇中,轉(zhuǎn)膜夾上下均需有4層濾紙;將托盤中加入遇冷的轉(zhuǎn)膜液,根據(jù)marker指示按需切膠。低溫條件下開始轉(zhuǎn)膜。采用恒流180mA,根據(jù)蛋白分子量調(diào)整轉(zhuǎn)膜時間。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后取出PVDF膜,自然晾干,甲醇浸泡1分鐘,去離子水浸泡1分鐘,用0.5%PS水平搖床上染膜,拍照后用去離子水清洗底色。根據(jù)Marker做好分子量標(biāo)記,裁剪所需條帶,用1×TBST配置的5%牛奶或5%BSA(根據(jù)不同蛋白要求)室溫下水平搖床上封閉1小時。倒掉牛奶后用1TBST清洗,分別加入適當(dāng)比例配置的一抗,4℃水平搖床過夜。第二天回收一抗,將膜用TBST洗膜3次,每次置于水平搖床上10分鐘;加入相對應(yīng)的二抗,放于室溫水平搖床上1小時�；厥斩�,用TBST水平搖床上洗膜3次,每次10分鐘;洗膜結(jié)束后用濾紙吸干洗膜液,在目標(biāo)蛋白所對應(yīng)的位置均勻涂抹顯影液,使用Alpha Flurochem Q成像分析系統(tǒng)顯影。4、Aβ寡聚體的制備及細(xì)胞處理:在通風(fēng)櫥內(nèi),用HIFP重懸凍干粉Aβ1-42(1mgAβ+300ulHIFP),用冰袋提前冷卻超聲水浴鍋,充分混勻后放在超聲水浴鍋30分鐘溶解。將上述溶液10000rpm、5分鐘離心,轉(zhuǎn)移上清液再次離心,條件相同,保留上清液,將2次收集的上清液混合,按所需量分別裝入EP管中。在無菌通風(fēng)櫥中干燥過夜,將Aβ溶液中的HIFP完全揮發(fā),其管底就是Aβ肽膜。將其存于-80℃冰箱備用。處理細(xì)胞前取出肽膜,用無菌DMS0 60 μl反復(fù)吹打溶解肽膜,加入900 μ 1PBS(PH=8.0)在10℃超聲水浴中5分鐘使其充分溶解,在10℃10000rcf離心5分鐘,吸取上清液,用BCA法測定Aβ的濃度。將Aβ溶液4℃孵育過夜,該產(chǎn)物可視為A β寡聚體狀態(tài),用Western blot免疫印跡法進(jìn)行驗證。按照所需濃度將Aβ加入細(xì)胞培養(yǎng)液中刺激細(xì)胞。進(jìn)行細(xì)胞處理時需注意要將每孔細(xì)胞的培養(yǎng)基調(diào)整至等量。5、質(zhì)粒制備及細(xì)胞轉(zhuǎn)染:用無菌剪刀沿標(biāo)記剪下標(biāo)有質(zhì)粒的濾紙,將其放入EP中。在每個EP中加入40 μ 1的無菌去離子水,浸泡濾紙,封口膜封口,做好標(biāo)記,-20℃冰箱保存。配制LB培養(yǎng)基,制備LA培養(yǎng)皿,制備感受態(tài)細(xì)胞(Stb13按說明書操作),在細(xì)菌超凈臺中涂板,待菌液吸收后將其倒置放入37℃孵箱中過夜。觀察過夜培養(yǎng)的菌落,選取單菌落進(jìn)行搖菌擴(kuò)增。用小提質(zhì)粒盒(NucleoSpin Plamsid)進(jìn)行質(zhì)粒提取。將提取的質(zhì)粒細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。制好病毒后分裝標(biāo)記,-80℃冰箱保存,使用時4℃融化即可。將病毒直接加入神經(jīng)元細(xì)胞中,每孔加入4 μl,孵育3-6天后收集細(xì)胞,TRC只需加一次,跟最長時間的病毒一致即可。6天后做Western檢測蛋白。6、線粒體膜電位、樹突線粒體含量以及ATP的測定:將原代培養(yǎng)的神經(jīng)元與200nM的TMRM和400nM的線粒體示蹤綠色染料在細(xì)胞培養(yǎng)箱(5%C02、37℃)中共同孵育30分鐘,預(yù)熱神經(jīng)元培養(yǎng)基,將神經(jīng)元取出后用預(yù)熱的培養(yǎng)基洗滌,然后再放入培養(yǎng)箱中孵育15分鐘。用帶孵箱的尼康倒置顯微鏡進(jìn)行圖像采集。ATP含量的測定通過 Luminescent ATP Detection Assay Kit 檢測。7、數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)分析:Western blot圖像由美國衛(wèi)生院ImageJ軟件進(jìn)行條帶灰度處理及分析,將目標(biāo)蛋白灰度值以相應(yīng)線粒體內(nèi)參蛋白或細(xì)胞總蛋白內(nèi)參蛋白調(diào)整處理后,將對照組數(shù)值設(shè)置為1,然后進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。數(shù)據(jù)分析通過ImageJ軟件處理分析。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS軟件(IBM software)進(jìn)行單因素方差分析、Bonferroni事后檢驗法分析或t檢驗重復(fù)檢測并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。各組間的分布和變異基本一致。p0.05被認(rèn)為是有統(tǒng)計學(xué)意義的。所有數(shù)據(jù)均表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。研究結(jié)果1.Aβ寡聚體可以誘導(dǎo)神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡我們用正常野生型C57/BL小鼠(出生24小時內(nèi))進(jìn)行神經(jīng)元原代細(xì)胞的培養(yǎng),選取生長狀態(tài)良好的細(xì)胞加入制備好的A β寡聚體,孵育24-48小時,觀察細(xì)胞的生存狀態(tài),發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元細(xì)胞大部分凋亡崩解成細(xì)胞碎片(Fig1-2)。同時我們分析了 DMSO及Aβ濃度對實驗細(xì)胞活性的影響(Fig4-5),證實在該實驗條件下神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡是由Aβ造成的。2.SUCLA2特異性表達(dá)于神經(jīng)元細(xì)胞我們通過正常野生型C57/BL新生小鼠進(jìn)行大腦皮層細(xì)胞原代神經(jīng)元培養(yǎng)及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng),選取生長狀態(tài)良好的細(xì)胞提取蛋白,通過Western blot免疫印記比較SUCLA2、SUCLG1、SUCLG2表達(dá)量在這兩種細(xì)胞中的變化,提示SUCLA2特異性表達(dá)于神經(jīng)元中,并且在成熟神經(jīng)元中表達(dá)量更高(Fig 6,P0.05)。3.SUCLA2表達(dá)量的變化:在Aβ毒性神經(jīng)元中SUCLA2表達(dá)量明顯下降,而且隨著Aβ濃度的升高及作用時間的延長下降更明顯我們對正常C57/BL新生小鼠進(jìn)行大腦皮層細(xì)胞原代神經(jīng)元的培養(yǎng),同時制備A β寡聚體,用BCA法測定其濃度,在神經(jīng)元中分別加入0.1umol/1和1.Oumol/1進(jìn)行細(xì)胞刺激,孵育24、48小時后,分別收取蛋白,通過Western blot免疫印記法檢測蛋白表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)在A β毒性神經(jīng)元中SUCLA2表達(dá)量明顯下降,并且隨著Aβ濃度的升高下降及作用時間的延長更明顯(Fig 7,P0.05)。4.SUCLA2表達(dá)下調(diào)細(xì)胞模型中線粒體功能障礙的研究4.1 SUCLA2表達(dá)量同時下調(diào)SUCLG1的表達(dá)為了測定SUCLA2表達(dá)量下降對神經(jīng)元的影響,我們用C57/BL新生小鼠進(jìn)行大腦皮層細(xì)胞原代神經(jīng)元的培養(yǎng),將發(fā)育好的神經(jīng)元細(xì)胞暴露于特異性SUCLA2靶向的shRNA,對照組是暴露于非靶向基因的shRNA,用WB方法檢測神經(jīng)元中SUCLA2的表達(dá)水平。我們首先檢測出對SUCLA2下調(diào)最明顯的轉(zhuǎn)染病毒(Fig8,P0.05),將其進(jìn)行細(xì)胞處理。結(jié)果顯示SUCLA2shRNA誘導(dǎo)的神經(jīng)元中SUCLA2的表達(dá)量明顯下降(Fig9,P0.05)。同時觀察到SUCLA2下調(diào)神經(jīng)元中竟有SUCLG2的升高(Fig9,P0.05)。同時我們還發(fā)現(xiàn)SUCLG1的表達(dá)量竟然也隨著SUCLA2的下調(diào)而明顯下降(Fig9,P0.05)。根據(jù)這個結(jié)果我們推測用SUCLA2靶向shRNA下調(diào)SUCLA2的表達(dá)水平時,SCS這個酶的整體功能均下降。4.2 SUCLA2表達(dá)量下降抑制神經(jīng)元線粒體的生物能活性我們都知道神經(jīng)元的生理活動依賴于線粒體OXPHOS產(chǎn)生的ATP,而SCS催化TCA中底物水平磷酸化這一步反應(yīng),其底物參與到OXPHOS的電子傳遞中,因此對SCS活性的保持是呼吸鏈的正�；顒拥幕A(chǔ)。我們?yōu)榱藴y定SUCLA2表達(dá)量下降對線粒體能量產(chǎn)生的影響,用化學(xué)發(fā)發(fā)光法測定了 ATP的含量,發(fā)現(xiàn)SUCLA2靶向shRNA處理過的神經(jīng)元ATP的生成量明顯降低(Fig10,P0.01)。我們知道線粒體膜電位既是電子傳遞鏈活動的基礎(chǔ),也是其產(chǎn)物,因此我們也進(jìn)行了線粒體膜電位的檢測,結(jié)果顯示與對照組的神經(jīng)元相比,SUCLA2下調(diào)神經(jīng)元樹突線粒體在TMRM密度上減少了 36%(Fig10 a1和a3,P0.001);而在總的樹突細(xì)胞線粒體含量沒有顯著性差異(Fig10 a2和a3)。這些結(jié)果顯示SUCLA2缺乏引起的神經(jīng)元的線粒體膜電位崩潰,可能是線粒體氧化磷酸化效率受損的體現(xiàn)。根據(jù)這個結(jié)果,我們推測由于下調(diào)SUCLA2的表達(dá)水平,使神經(jīng)元線粒體的生物活性明顯下降。4.3 SUCLA2表達(dá)量下降影響線粒體動力學(xué)蛋白線粒體動力學(xué)是由線粒體融合和分裂蛋白共同控制,其動態(tài)平衡是維持線粒體功能的必要條件。為了明確SUCLA2缺乏是否影響線粒體融合和分裂蛋白,我們收集非靶向基因和SUCLA2shRNA分別處理的神經(jīng)元進(jìn)行免疫印記方法檢測線粒體融合蛋白包括mitofusin 2(Mfn2)和Optic atrophy1(Opa1)以及線粒體分裂蛋白fssion 1(Fis 1)、dynamin-like protein1(Dlp1)和磷酸化Dlp1(pD1p1 S616)。如Fig11-13所示,SUCLA2表達(dá)量下降引起的Mfn2、Opa1表達(dá)水平顯著下降。有趣的是,我們發(fā)現(xiàn)SUCLA2表達(dá)量下降也抑制了線粒體分裂蛋白的表達(dá)。SUCLA2下調(diào)神經(jīng)元顯著降低Fis1、DLP1的水平。結(jié)果表明SUCLA2表達(dá)量下降可以抑制線粒體融合及分裂蛋白表達(dá),使線粒體動力學(xué)失衡。研究結(jié)論1.SUCLA2特異性高表達(dá)于神經(jīng)元細(xì)胞中,因此其表達(dá)量的變化對神經(jīng)元細(xì)胞影響更大。2.A β毒性神經(jīng)元內(nèi)SUCLA2的表達(dá)量明顯下降,而且隨著A β濃度的升高和作用時間的延長,SUCLA2的表達(dá)量進(jìn)一步下降。3.SUCLA2表達(dá)量下降介導(dǎo)的線粒體功能障礙,可能由于以下機(jī)制產(chǎn)生:琥珀酸輔酶A功能的失活、OXPHOS效率受損以及線粒體分裂融合平衡的破壞。4.我們的研究數(shù)據(jù)進(jìn)一步闡述了 SUCLA2在神經(jīng)元細(xì)胞中對線粒體生理功能的維持有關(guān)鍵作用,提示了 SUCLA2將來可能是治療AD的一個潛在的新靶點。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R749.16
【圖文】：

又對線粒體的能量合成和質(zhì)量控制進(jìn)行調(diào)控。線粒體融合蛋ｆｕｓｉｎ邋１，Ｍｆｎｌ）、線粒體融合蛋白邋２邋（ｍｉｔｏｆｕｓｉｎ邋２，Ｍｆｎ２）、視神經(jīng)（ｏｐｔｉｃ邋ａｔｒｏｐｈｙ邋１，０ＰＡ１）是調(diào)控線粒體融合的３個主要蛋白，首膜上的Ｍｆｎｌ、Ｍｆｎ２通過卷曲結(jié)構(gòu)域的順式作用誘導(dǎo)外膜融合，然后上的０ＰＡ１介導(dǎo)下完成內(nèi)膜融合；線粒體分裂蛋白ｌ（ｆｉｓｓｉｏｎ邋ｌ，Ｆｉｓ關(guān)蛋白１邋（ｄｙｎａｍｉａ－ｒｅｌａｔｅｄ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋１，Ｄｒｐｌ）和線粒體分裂ｃｈｏｎｄｒｉａｌ邋ｆｉｓｓｉｏｎ邋ｆａｃｔｏｒ，Ｍｆｆ）是控制線體力分裂的主要蛋白位于線粒體外膜上的Ｆｉｓｌ和Ｍｆｆ把定位于細(xì)胞質(zhì)的Ｄｒｐｌ募集至線后Ｄｒｐｌ通過進(jìn)行自組裝螺旋狀多聚環(huán)環(huán)繞線粒體，激活了邋ＧＴＰ酶活粒體使其一分為二，完成分裂［７］。不管是線粒體的分裂還是融合出現(xiàn)膜的穩(wěn)定性都可能受到影響，繼之電子傳遞鏈的功能也會受到影響，失衡、生物合成障礙、氧化應(yīng)激損傷以及ｍｔＤＮＡ損傷等等，從而引起失［８］。逡逑［１邋ｉｖ？Ｍ＞ｎ邋］邐Ｉ邋Ｋｕｉｏｎ邋Ｊ逡逑

ＭｔＤＮＡ由１６５６９ｂｐ組成，呈雙鏈閉合環(huán)狀ｎ）和輕鏈（ｌｉｇｈｔ邋ｃｈａｉｎ）兩部分。ＭｔＤＮＡ裸露地存在線粒體內(nèi)膜，無組蛋白與其結(jié)合。ＭｔＤＮＡ的編碼功能是，在各個基因之間沒有內(nèi)含子序列存在；其部分基因Ａ的任何突變都會累及到基因組中的一個重要功能區(qū)，其中兩個ｒＲＮＡ基因（１６ＳｒＲＮＡ、１２ＳｒＲＮＡ），２２個ｔＲＮ（包括１個細(xì)胞色素ｂ基因，２個ＡＴＰ酶亞單位的基因亞單位的基因）。位于Ｄ環(huán)區(qū)的ＨＳＰ邋（ｈｅａｖｙ邋ｓｔｒａｎｄ邋ｐｒｔｒａｎｄ邋ｐｒｏｍｏｔｅｒ）是線粒體基因組轉(zhuǎn)錄的兩個主要啟動相比，具有其獨特的遺傳特征：１．半自主性；２．母系４．突變的閾值效應(yīng)；５．遺傳密碼的特性；６．突變率極的突變率，缺乏組蛋白保護(hù)，而且不像核ＤＮＡ那樣具突變所導(dǎo)致的線粒體功能障礙的發(fā)生率明顯增高。逡逑￣＾0１逡逑

邐山東大學(xué)博士學(xué)位論文邐逡逑酰輔酶Ａ。這種反應(yīng)產(chǎn)物（一分子輔酶和一個乙�；噙B），經(jīng)過三羧酸循環(huán)中逡逑的酶促反應(yīng)最終分解生成二氧化碳并脫氫，傳遞質(zhì)子給輔酶煙酰胺腺嘌呤二核苷逡逑酸（ＮＡＤ＋）和黃素腺嘌呤（ＦＡＤ），使之成為ＮＡＤＨ邋＋邋Ｈ＋和ＦＡＤＨ２。ＮＡＤＨ邋＋邋Ｈ＋和逡逑ＦＡＤＨ２會繼續(xù)參與到氧化磷酸化中過程中通過呼吸鏈被氧化成ＮＡＤ＋和ＦＡＤ，并生逡逑成水。在這個過程中會生成ＡＴＰ，用來給細(xì)胞的正�；顒犹峁┠芰�。因此，ＴＣＡ逡逑不但是各種有機(jī)物質(zhì)氧化分解的共同途徑、釋放能量最多的氧化分解階段，并且逡逑架起了三大類物質(zhì)相互轉(zhuǎn)化、相互聯(lián)系的橋梁。逡逑簧６^悴ǚ郟牽斟危瑁媯澹

本文編號：2790504