【摘要】： 目的:1.通過OVX結(jié)合注射D-gal建立復合因素AD動物模型,闡明雌激素剝奪和氧化應激在AD發(fā)生發(fā)展中的協(xié)同作用;2.研究與探索星形膠質(zhì)細胞參與此AD模型的發(fā)病過程及機制。 方法:1.3月齡雌性SD大鼠,隨機分為對照組(C)、OVX結(jié)合注射D-gal模型組(O+D)、單純OVX組(O)、單純注射D-gal組(D)和17-β雌二醇替代治療組(O+D+E),6周后進行行為學測定、基底前腦膽堿能神經(jīng)元ChAT免疫組化染色、海馬區(qū)Aβ免疫組化染色、海馬及皮質(zhì)電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察和脂褐素與突觸的定量分析來驗證此模型。2.應用此模型(O+D),以2周和6周為觀察時間點,通過海馬區(qū)GFAP的免疫組化染色和western-blotting檢測、GSH的生化檢測、AChE組織化學染色與光密度分析及AChE活性測定、突觸和血-腦屏障周圍超微結(jié)構(gòu)觀察以及HRP通透性實驗來研究星形膠質(zhì)細胞在此模型中的病理改變與功能障礙。 結(jié)果:1.與C組相比,O+D組、O+D+E組、D組、O組均出現(xiàn)不同程度的行為學和病理學損害,以O(shè)+D組損害最為明顯,具體表現(xiàn)為:(1)開場實驗中,穿越格數(shù)明顯減少;Y型迷宮達到學會標準的測試次數(shù)增多;跳臺實驗中,錯誤次數(shù)增加、潛伏期縮短。(2)在MS、NDB區(qū)域的ChAT免疫陽性膽堿能神經(jīng)元明顯減少,染色變淺,突起變短。(3)在海馬的齒狀回、CA1和下托觀察到了其他組沒有出現(xiàn)的細胞內(nèi)Aβ沉積。(4)超微結(jié)構(gòu)損害:細胞核變形扭曲;核內(nèi)染色質(zhì)聚集成不規(guī)則的高電子密度的塊狀;核膜破裂、不完整;胞漿內(nèi)含有大量脂褐素、次級溶酶體;線粒體出現(xiàn)腫脹扭曲、變形,嵴斷裂、空泡樣變;細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)類似NFT改變;大量變性的突觸結(jié)構(gòu)。脂褐素數(shù)量明顯增加,突觸數(shù)量明顯減少。2.(1)與C組和2w O+D組相比,6w O+D組大鼠在水迷宮行為學實驗中,到達平臺的潛伏期明顯延長;穿越平臺次數(shù)和在目標象限時間明顯減少,而C組與2wO+D組大鼠之間沒有統(tǒng)計學差異。(2)與C組和2w O+D組大鼠相比,6w O+D組大鼠在海馬區(qū)出現(xiàn)了明顯的膽堿能纖維終末的密度下降與AChE活性降低,而C組與2w O+D組大鼠之間沒有統(tǒng)計學差異。(3)與C組相比,2w與6w O+D組大鼠海馬區(qū)GFAP水平明顯增加,但兩組間沒有統(tǒng)計學差異。(4)與C組和2w O+D組相比,6w O+D組出現(xiàn)了明顯的GSH水平的降低。而2w O+D組則觀察到了GSH水平的輕度升高,但與C組相比并沒有明顯的差異。(5)在2w和6wO+D組大鼠海馬區(qū)出現(xiàn)了廣泛的星形膠質(zhì)細胞活化。與C組靜息態(tài)星形膠質(zhì)細胞細長的突起相比,兩組O+D活化的星形膠質(zhì)細胞胞體肥大,突起增粗深染,呈高度分支狀;此外,許多6w O+D組GFAP陽性的星形膠質(zhì)細胞出現(xiàn)了胞體類似崩解的退行性改變。(6)電鏡結(jié)果顯示6w O+D組大鼠海馬內(nèi)星形膠質(zhì)細胞出現(xiàn)了糖原顆粒和膠質(zhì)纖維絲的聚集或缺失、線粒體的腫脹或分布異常為特征的退行性改變。尤其在海馬突觸密集的區(qū)域,水樣變性的星形膠質(zhì)細胞突起高度腫脹,包繞著變性的突觸結(jié)構(gòu)。此外,在許多2w和6w O+D組大鼠海馬腦毛細血管周圍包繞著許多腫脹的星形膠質(zhì)細胞終足。尤其在6w O+D組大鼠毛細血管內(nèi)皮細胞出現(xiàn)扭曲變形和空泡化。上述病理改變并沒有在C組出現(xiàn)。(7)6w O+D組大鼠的海馬及大腦皮質(zhì)的一些區(qū)域出現(xiàn)了血管周圍區(qū)域HRP的泄漏。而在C組HRP反應產(chǎn)物則分布在血管內(nèi),沒有明顯的外泄。 結(jié)論:1.雌激素剝奪和氧化應激在AD發(fā)生發(fā)展中的協(xié)同作用。2.OVX結(jié)合注射D-gal可以作為一個較好模擬AD病癥的動物模型。3.星形膠質(zhì)細胞在此模型病變的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R749.16

【參考文獻】

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本文編號：2781783