【摘要】：背景 抑郁癥是由各種原因引起的以顯著而持久的心境低落為主要臨床特征的一類心境及情感障礙，其發(fā)病率、復(fù)發(fā)率和自殺率高，就診率和臨床治愈率低，且主要累及青壯年人群。抑郁癥在人群中的患病率是5%～10%，大約50％的服藥病人仍然反復(fù)發(fā)作。抑郁癥患者自殺行為的發(fā)生率為28.5%～63.7%,大約有15%抑郁癥患者最終死于自殺。隨著目前現(xiàn)代化、城市化加快和人口增加，人群將面臨快節(jié)奏、高競爭、高擁擠及貧富差距加大的生活現(xiàn)狀，抑郁癥的發(fā)病率會越來越高。WHO預(yù)測，到2020年抑郁癥將成為導(dǎo)致人類死亡和殘疾的第二大疾病。因此，加強對抑郁癥發(fā)病機制和防治的研究，具有十分重要的戰(zhàn)略意義。 目的 本實驗旨在應(yīng)用突觸差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，揭示可能的抑郁癥突觸分子生物學(xué)機制，本研究可能給抑郁癥的診斷治療和抗抑郁藥物的臨床使用提供豐富的理論依據(jù)。 方法 本實驗分三部分：第一部分，海馬突觸體提取方法的優(yōu)化；第二部分，抑郁癥大鼠模型的制備；第三部分，抑郁模型大鼠海馬突觸體差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析。主要方法及技術(shù)路線如下： 1.常用的組織勻漿方法有三種:液氮勻漿、手動玻璃勻漿和電動機械勻漿，為選擇一個優(yōu)化的勻漿方法，我們比較了上述三種不同勻漿方法結(jié)合差異密度梯度離心所提取的海馬突觸體效果，評價的指標(biāo)是透射電鏡的形態(tài)學(xué)觀察和WB實驗的突觸蛋白純度分析。 2．建立抑郁癥大鼠模型，實驗分為兩組，抑郁組和對照組，對抑郁組進(jìn)行慢性不可預(yù)見輕度刺激（CMS）。每周應(yīng)用9種，連續(xù)4周，每周進(jìn)行蔗糖水偏好試驗，判斷造模是否成功。 3．取抑郁和對照大鼠海馬組織，分別采用液氮勻漿方法和電動機械勻漿方法結(jié)合差異密度梯度離心法提取海馬突觸體，裂解提取突觸體蛋白質(zhì)，以Bradford法測定蛋白濃度，雙向凝膠電泳分離蛋白，選擇差異蛋白點進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜（MALDI-TOF/TOF-MS）分析。所得數(shù)據(jù)在SwissProt51.6/IPI數(shù)據(jù)庫檢索、鑒定蛋白質(zhì)。并對興趣蛋白進(jìn)行WB驗證。 結(jié)果 1.透射電鏡形態(tài)學(xué)觀察提示手動玻璃勻漿和電動機械勻漿方法所提取的突觸體較液氮勻漿提取的突觸體數(shù)目更多，更完整；WB分析顯示手動玻璃勻漿和電動機械勻漿方法提取的突觸標(biāo)志性蛋白Syntaxin純度分析無差異，但均較液氮勻漿的純度高。 2.兩次動物造模至第4周時，抑郁組大鼠的糖水消耗量，糖水偏好度均降低，較對照組和基線比較有顯著性差異（P 0.05）。 3．使用液氮勻漿提取的抑郁和對照大鼠海馬突觸體，雙向差異電泳-質(zhì)譜分析提示有16個差異蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)的功能分類為：囊泡調(diào)節(jié)/遞質(zhì)釋放/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，能量代謝，細(xì)胞骨架，物質(zhì)代謝。與突觸遞質(zhì)釋放和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)直接相關(guān)的蛋白質(zhì)有5個：突觸素Ⅱ、膜聯(lián)蛋白Ⅳ、Rab蛋白GDP-解離抑制因子β、腦型液泡ATP合酶亞單位B及G蛋白β2亞單位。 4．使用電動機械勻漿提取的抑郁和對照大鼠海馬突觸體，雙向差異電泳-質(zhì)譜分析提示有19個差異蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)功能分類為：突觸的胞吞/胞吐，能量代謝，細(xì)胞骨架，分子伴侶。與突觸的胞吞/胞吐相關(guān)的蛋白有6個：網(wǎng)格蛋白輕鏈A,網(wǎng)格蛋白輕鏈B，發(fā)動蛋白1，囊泡ATP合酶亞單位E1，突觸素2及囊泡融合ATP酶。兩個興趣蛋白，網(wǎng)格蛋白輕鏈A/B,WB驗證同雙向電泳結(jié)果基本一致。 結(jié)論 1．手動的玻璃勻漿和電動的機械勻漿方法提取的突觸效果相似，均比液氮勻漿方法提取的突觸效果要好。 2．兩批CMS大鼠模型均表現(xiàn)出明顯的快感缺失，與人類抑郁癥核心癥狀極為相似，表明CMS抑郁大鼠模型已經(jīng)成功建立。 3．使用液氮勻漿方法進(jìn)行的抑郁大鼠海馬突觸體差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)了一批與神經(jīng)遞質(zhì)傳遞和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)直接相關(guān)的差異表達(dá)蛋白質(zhì)，還包括一些突觸能量、物質(zhì)代謝和細(xì)胞骨架相關(guān)的差異表達(dá)信息。這可能是抑郁癥中海馬神經(jīng)元突觸傳導(dǎo)障礙的病理性蛋白分子基礎(chǔ)。 4．使用電動機械勻漿方法進(jìn)行的抑郁大鼠海馬突觸體差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析，所鑒定到的差異蛋白主要涉及與突觸的胞吐/胞吞相關(guān)的蛋白，這些蛋白的變化可能影響了突觸的神經(jīng)遞質(zhì)釋放、突觸囊泡的重回收和突觸LTD的表達(dá)，故突觸的胞吐/胞吞蛋白改變?yōu)橐钟舭Y異常突觸的傳遞和可塑性提供了新的證據(jù)，為抑郁癥發(fā)病機制的探索提供了新的線索。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R749.4
【圖文】：

CMS大鼠模型的建立Fig.2-1TheestablishmentofCMSratmodel

(b) 糖水偏好度平均值（±標(biāo)準(zhǔn)誤）曲線圖在模型建立期間CMS和對照組大鼠的糖水消耗量（a）與偏好度（b）平均值（±標(biāo)準(zhǔn)誤）曲MS組應(yīng)激第四周時與基線比較 (Bonferroni檢驗)，#P＜0.01 CMS組與對照組相應(yīng)時間點比 Curve distribution of mean values (± S.E.M.) of sucrose intake (a) and preference (b) of the groups of rats during the CMS-model establishment. *P < 0.01 vs. respective baselironi test);#P < 0.01 vs. respective control values (LSD test). 論郁癥是一種以情緒低落，快感缺失，思維遲鈍，行為遲緩為主要癥，可伴有睡眠減少，體重降低等軀體癥狀。病因和發(fā)病機制不清，社會應(yīng)激是其產(chǎn)生的重要原因。抑郁癥動物模型是一個必不可少的物模型的使用主要在于以下兩方面：①發(fā)現(xiàn)和研究新的抗抑郁藥；的神經(jīng)生物學(xué)。那么,抑郁癥都有哪些動物模型呢?在抑郁癥的研究

2 結(jié) 果2.1 海馬突觸樣品的制備與透射電鏡檢測模型成功建立后，我們進(jìn)行了兩組大鼠海馬突觸樣品的制備。如圖2-1a所示，不連續(xù)蔗糖密度梯度離心分離后，大鼠海馬勻漿樣品在離心管中形成了4個條帶，位于1.0 M-1.2 M 蔗糖溶液區(qū)間的條帶為突觸體組分，隨后的透射電鏡檢測進(jìn)一步

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 鄭麗芳,明亮;抑郁癥動物模型的研究與應(yīng)用[J];安徽醫(yī)藥;2005年11期

2 林濤,蔡焯基;抑郁癥海馬部位的神經(jīng)可塑性改變及影像學(xué)研究[J];國際精神病學(xué)雜志;2005年04期

3 徐林;;抑郁癥的神經(jīng)可塑性機制[J];中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年04期

4 江文慶;杜亞松;;抑郁癥病理生理機制的神經(jīng)可塑性假說[J];上海精神醫(yī)學(xué);2006年02期

5 郭建友,李昌煜,葛衛(wèi)紅;抑郁癥動物模型研究進(jìn)展[J];中國臨床康復(fù);2004年10期

6 王麗峰,彭瑞云,胡向軍;突觸素及調(diào)節(jié)突觸可塑性特征與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的關(guān)系[J];中國臨床康復(fù);2005年01期

7 潘玉芹;林文娟;;海馬5-羥色胺系統(tǒng)與抑郁癥[J];中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué);2006年04期

8 毛榕榕;田孟;徐林;;抑郁的大腦:抑郁癥的神經(jīng)生物學(xué)研究和抗抑郁新藥研發(fā)[J];自然雜志;2009年03期

本文編號：2776406