【摘要】：目的探討促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)是否介導(dǎo)妊娠期慢性應(yīng)激致子代抑郁及其可能機(jī)制。方法以20天子代雄鼠為研究對象,實(shí)驗(yàn)小鼠分為正常對照組(Control組)、產(chǎn)前應(yīng)激+溶劑對照組(CPS組)、產(chǎn)前應(yīng)激+CRHR1拮抗劑組(CPS+ANT組)。應(yīng)用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、糖水偏好實(shí)驗(yàn)和曠場實(shí)驗(yàn)對子代雄鼠抑郁程度進(jìn)行檢測。子代雄鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化通過HE染色并在顯微鏡下觀察。子代雄鼠海馬m TOR的表達(dá)量應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測。應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測m TOR m RNA水平的變化。子代雄鼠海馬CRH水平變化運(yùn)用ELISA法檢測。再以7天子代SD大鼠為研究對象,超凈臺冰上取腦,體外培養(yǎng)海馬腦片,通過培養(yǎng)液里加入和不加入CRH或CRHR1拮抗劑,實(shí)驗(yàn)分為正常對照組(Control組)、1.0μM CRH+溶劑對照組(CRH組)、1.0μM CRH+0.1μM CRHR1拮抗劑組(Low組)、1.0μM CRH+1.0μM CRHR1拮抗劑組(Middle組)、1.0μM CRH+10μM CRHR1拮抗劑組(High組)。應(yīng)用Western blot法檢測海馬腦片組織m TOR的表達(dá)量。結(jié)果1.強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)顯示,與Control組相比,CPS組子代雄鼠不動時(shí)間增多(P0.05);與CPS組相比,CPS+ANT組子代雄鼠不動時(shí)間減少(P0.05)。2.曠場實(shí)驗(yàn)顯示,與Control組相比,CPS組子代雄鼠鼠爬行總路程、平均速度、穿越象限次數(shù)、站立次數(shù)減少(P0.05);與CPS組相比,CPS+ANT組子代雄鼠爬行總路程、平均速度、穿越象限次數(shù)、站立次數(shù)增加(P0.05)。3.糖水偏好實(shí)驗(yàn)顯示,與Control組相比,CPS組子代雄鼠糖水偏好率下降(P0.05);與CPS組相比,CPS+ANT組子代雄鼠糖水偏好率增高(P0.05)。4.HE染色實(shí)驗(yàn)顯示,Control組小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元染色清晰,數(shù)量相對較多,排列緊密整齊,細(xì)胞核表現(xiàn)出圓形,核仁較明顯;CPS組神經(jīng)元排列疏松絮亂,數(shù)量較少,脫失現(xiàn)象明顯,部分細(xì)胞核濃染、固縮。CPS+ANT組小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元染色清晰,數(shù)量較多,呈椎體狀、圓球狀,細(xì)胞核呈圓形,核仁明顯。用Image-Pro Plus Image分析軟件計(jì)數(shù)海馬CA3區(qū)神經(jīng)元總數(shù),結(jié)果顯示,與Control組(173.00±8.888)相比,CPS組(85.67±8.737)神經(jīng)元總數(shù)明顯減少(P0.05);與CPS組相比,CPS+ANT組(171.67±6.506)神經(jīng)元總數(shù)明顯增多(P0.05)。5.RT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示,與Control組相比,CPS組子代雄鼠海馬m TOR基因m RNA表達(dá)差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),CPS+ANT組子代雄鼠海馬m TOR基因m RNA表達(dá)顯著升高(P0.05)。與CPS組相比,CPS+ANT組子代雄鼠海馬m TOR基因m RNA表達(dá)顯著升高(P0.05)。6.WB結(jié)果顯示,與Control組相比,CPS組小鼠海馬組織m TOR表達(dá)量減少(P0.05);與CPS組相比,CPS+ANT組小鼠海馬組織的m TOR表達(dá)量增加(P0.05);Control組與CPA+ANT組小鼠海馬組織m TOR表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。7.RT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示,與Control組相比,CPS組子代雄鼠海馬m TOR基因m RNA表達(dá)差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),CPS+ANT組子代雄鼠海馬m TOR基因m RNA表達(dá)顯著升高(P0.05)。與CPS組相比,CPS+ANT組子代雄鼠海馬m TOR基因m RNA表達(dá)顯著升高(P0.05)。8.ELISA法檢測小鼠海馬CRH結(jié)果顯示,三組子代雄鼠海馬CRH濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與Control組相比,CPS組子代雄鼠海馬CRH水平升高(P0.05);與CPS組相比,CPS+ANT組小鼠海馬CRH水平降低(P0.05)。9.體外培養(yǎng)海馬腦片WB結(jié)果顯示,與Control組相比,CRH組海馬腦片m TOR表達(dá)量顯著減少(P0.05);與CRH組相比,Low組,Middle組和High組海馬腦片m TOR表達(dá)量均顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);Low組,Middle組和High組三組海馬腦片m TOR表達(dá)量與Control組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Low組,Middle組和High組海馬腦片m TOR表達(dá)量組內(nèi)比較差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但是Middle組海馬腦片m TOR表達(dá)量有升高趨勢。結(jié)論CRH介導(dǎo)了妊娠期慢性應(yīng)激致子代雄鼠抑郁,其機(jī)制可能與妊娠期慢性應(yīng)激致子代海馬CRH升高,下調(diào)m TOR蛋白表達(dá),進(jìn)而引起海馬CA3區(qū)神經(jīng)元損傷有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R749.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2772366