【摘要】： 目的：觀察阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)小鼠發(fā)病過程中下丘腦內不同時期促性腺激素釋放激素(gonadotropin releasing hormone, GnRH)表達水平的變化,并探討GnRH與AD小鼠發(fā)病機制的相關性。方法：10周齡昆明種雌性小鼠140只,根據(jù)跳臺實驗成績和體重分層后按取樣周期隨機分為七組：0d、30d、45d、60d、75d和90d組,每組20只,各組又設正常對照組和AD模型組各10只。正常對照組腹腔注射生理鹽水和灌胃三蒸水,AD模型組腹腔注射D-半乳糖(120mg·kg-1·d-1)和灌胃氯化鋁(10mg·kg-1·d-1),連續(xù)給藥時間按分組確定。跳臺實驗觀察AD小鼠學習和記憶能力；蛋白免疫印跡法(Western blot)測定海馬蘇氨酸231位點磷酸化tau蛋白(Tau-pThr231)水平；酶聯(lián)免疫法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)測定血清雌二醇(Estradiol, E2)水平；免疫組織化學觀察小鼠腦組織中Aβ40、GnRH及其受體(gonadotropin releasing hormone receptor, GnRHR)的表達及分布；結果：(1)與正常對照組比較,AD模型組小鼠45d、60d、75d、90d時學習成績下降(P0.05),記憶錯誤次數(shù)增多(P0.01),潛伏期縮短(P0.05)；(2)與正常對照組比較,AD模型組小鼠45d、60d、75d、90d時Aβ40和Tau-pThr231表達增高(P0.05)；(3)與正常對照組比較,AD模型組小鼠血清雌二醇水平隨造模給藥時間延長呈下降趨勢。90d時E2水平明顯降低(P0.05)；(4)與正常對照組比較,AD模型組小鼠60d、75d、90d時GnRH表達減少(P0.05); GnRHR未見差異。結論：(1)隨著造模給藥時間延長,AD小鼠學習記憶能力逐漸減退,腦組織中Aβ40的表達逐漸升高,Tau-pThr231表達水平呈增高趨勢,與Aβ40的表達呈正相關,Tau-pThr231可以標定AD模型小鼠的發(fā)病進程。(2)血清雌二醇含量、下丘腦GnRH表達水平隨著AD小鼠發(fā)病的時間進程呈下降趨勢,與AD的病理改變有相關性。其參與AD發(fā)病進程的可能機制為：隨著AD病程的進展,下丘腦分泌的GnRH減少,體內雌二醇水平下降,從而使Aβ40沉積和Tau-pThr231表達增強,進而促進了AD的病情發(fā)展。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R749.16
【圖文】：

圖1小鼠下丘腦從前往后結構示意圖(摘自Kei仇a.J.Fr肛水lin《TheMouseBraininstereotaxiccoor動加ates》一seeondedition)實驗免疫組織化學染色采用SABC法，具體步驟如下:(l)切片經脫蠟致水:二甲苯I和二甲苯11脫蠟各IOmin，依次100%酒精I、100%酒精n、95%酒精、85%酒精、70%酒精，浸泡各smin，蒸餾水浸泡smin;(2)消除內源性過氧化物酶活性:3%HZO:溶液新鮮配置，室溫孵育1smin，蒸餾水沖洗，sminX3次;(3)微波抗原修復:將石蠟切片浸入0.o1M構椽酸鹽緩沖液中，保鮮膜封口，微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔IOmin后繼續(xù)加熱至沸騰后斷電，冷卻，PBS沖洗，sminx3次;(4)滴加5%BSA封閉液，置于37℃40min后甩去多余液體;

BCA法測定小鼠海馬組織蛋白勻漿的蛋白濃度，然后各組取等量蛋白上樣行SDS一PAGE后的電泳圖，同標準蛋白Marker比較，在68kDa處可見一較清晰條帶，目的蛋白分子量為68kDa與理論值相符，結果見如下圖2。團a105-50es35—25_圖2各組海馬組織的SDS一隊GE F19.2SDS一 PAGEanalysisofhiPPoeamPusineachgrouP3.2蛋白免疫印 跡(Westemblot)用抗幾u一pThr231抗體對目的蛋白進行鑒定，結果見圖2。正常對照組無免疫印跡條帶，說明Tau一pThr231在正常狀態(tài)下不表達或表達量極微。而AD模型組約30d時，Tau一pThr231開始有少量表達，并且隨造模時間延長表達量逐漸升高，75d時有所下降，但仍在高位表達。Lane 123生 5678幾u一Tbr231必礁簇68kDap一aetin42kDa圖3海馬組織Tau一pThrZ引蛋白免疫印跡 F193:WesternblotoftauProtein(tau一 PThr231)inrathiPPoeamPus.注:1至7泳道依次為正常對照組:od、15d、30d、45d、60d、75d和90d條帶;9至15泳道依次為AD模型組:od、15d、30d、45d、60d、75d和90d條帶;第8泳道為MarkerNote:Lanel一7， ControlgrouPod、 1sd、30d、45d、60d、 75dand90d:Laneg一15

50es35—25_圖2各組海馬組織的SDS一隊GEF19.2SDS一PAGEanalysisofhiPPoeamPusineachgrouP3.2蛋白免疫印跡(Westemblot)用抗幾u一pThr231抗體對目的蛋白進行鑒定，結果見圖2。正常對照組無免疫印跡條帶，說明Tau一pThr231在正常狀態(tài)下不表達或表達量極微。而AD模型組約30d時，Tau一pThr231開始有少量表達，并且隨造模時間延長表達量逐漸升高，75d時有所下降，但仍在高位表達。Lane123生5678

【參考文獻】

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本文編號：2769593