【摘要】： 目的 靜脈注射經(jīng)過(guò)分子修飾的人重組腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的復(fù)合物，觀察其在體條件下對(duì)阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因鼠的海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)目的影響。 方法 1．材料 BDNF、BDNF-PEG-biotin／OX26-SA、PEG-biotin、OX26-SA和Sphacryl S300HR層析柱購(gòu)自Pharmacia，老年癡呆轉(zhuǎn)基因鼠購(gòu)自北京中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)，實(shí)驗(yàn)所需其它試劑由我校組織工程學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。 2．制備PEG-biotin／OX26-SA復(fù)合物 參照W．D．等法人的方法，通過(guò)抗生物素蛋白-生物素技術(shù)，將3.9mg的PEG-biotin和6.5mg的OX26-SA共同混合于1ml的0.05M Na_2HPO_4／0.5M NaCl(PH=7.0)中。該反應(yīng)室溫下進(jìn)行30分鐘。將樣品放置到Sphacryl S300HR層析柱中，用0.01M Na_2HPO_4／0.5M NaCl(PH=7.4)配制的0.05％聚山梨醇酯-20以30ml／hr的速度洗脫產(chǎn)物PEG-biotin／OX26-SA，并用Centriprep-10濃縮，作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組用藥。 3．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 取40只AD轉(zhuǎn)基因鼠，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和空白對(duì)照組，每組10只。實(shí)驗(yàn)組靜脈注射BDNF-PEG-biotin／OX26-SA復(fù)合物，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組一組靜脈注射PEG-biotin／OX26-SA復(fù)合物，另一組注射BDNF，空白對(duì)照組靜脈注射0.9％的生理鹽水。每日清晨經(jīng)鼠尾靜脈注射給藥，連續(xù)一周。 4．HE染色和海馬神經(jīng)元計(jì)數(shù) 在最后一次給藥后的24小時(shí)處死動(dòng)物并取腦。切除3mm額極皮質(zhì)后取冠狀切片，固定、包埋、切片、脫蠟，行HE染色，光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的數(shù)目，以確證經(jīng)過(guò)分子修飾的BDNF外周給藥后對(duì)海馬神經(jīng)元的作用。 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 每組數(shù)據(jù)用平均值土標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間采用單因素方差分析。 結(jié)果 通過(guò)鍵合反應(yīng)將PEG一hiotin與0X26一SA鍵合，制備對(duì)照藥物PEG- bioti可0X26一SA。經(jīng)鼠尾靜脈注射給藥，連續(xù)一周后，實(shí)驗(yàn)組海馬CAI區(qū) 神經(jīng)元的數(shù)目增加，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組海馬CAI區(qū)神經(jīng)元的密度無(wú)明顯變化。實(shí) 驗(yàn)組與對(duì)照組治療結(jié)果差異顯著。 結(jié)論 經(jīng)過(guò)分子修飾的BDNF在體內(nèi)可以穿越血腦屏障，其外周給藥對(duì)AD 鼠海馬神經(jīng)元有保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類(lèi)號(hào)】：R749.161

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉朝暉,胡海濤,馬東亮,許杰華,楊蓬勃;重組人BDNF對(duì)Alzheimer病模型神經(jīng)元作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年01期

本文編號(hào)：2746040