【摘要】： 目的 靜脈注射經過分子修飾的人重組腦源性神經營養(yǎng)因子的復合物，觀察其在體條件下對阿爾茨海默病轉基因鼠的海馬CA1區(qū)神經元數目的影響。 方法 1．材料 BDNF、BDNF-PEG-biotin／OX26-SA、PEG-biotin、OX26-SA和Sphacryl S300HR層析柱購自Pharmacia，老年癡呆轉基因鼠購自北京中國協和醫(yī)科大學，實驗所需其它試劑由我校組織工程學實驗室提供。 2．制備PEG-biotin／OX26-SA復合物 參照W．D．等法人的方法，通過抗生物素蛋白-生物素技術，將3.9mg的PEG-biotin和6.5mg的OX26-SA共同混合于1ml的0.05M Na_2HPO_4／0.5M NaCl(PH=7.0)中。該反應室溫下進行30分鐘。將樣品放置到Sphacryl S300HR層析柱中，用0.01M Na_2HPO_4／0.5M NaCl(PH=7.4)配制的0.05％聚山梨醇酯-20以30ml／hr的速度洗脫產物PEG-biotin／OX26-SA，并用Centriprep-10濃縮，作為實驗對照組用藥。 3．實驗動物分組 取40只AD轉基因鼠，隨機分為實驗組、實驗對照組和空白對照組，每組10只。實驗組靜脈注射BDNF-PEG-biotin／OX26-SA復合物，實驗對照組一組靜脈注射PEG-biotin／OX26-SA復合物，另一組注射BDNF，空白對照組靜脈注射0.9％的生理鹽水。每日清晨經鼠尾靜脈注射給藥，連續(xù)一周。 4．HE染色和海馬神經元計數 在最后一次給藥后的24小時處死動物并取腦。切除3mm額極皮質后取冠狀切片，固定、包埋、切片、脫蠟，行HE染色，光學顯微鏡下計數海馬CA1區(qū)神經元的數目，以確證經過分子修飾的BDNF外周給藥后對海馬神經元的作用。 5.統計學分析 每組數據用平均值土標準差表示，組間采用單因素方差分析。 結果 通過鍵合反應將PEG一hiotin與0X26一SA鍵合，制備對照藥物PEG- bioti可0X26一SA。經鼠尾靜脈注射給藥，連續(xù)一周后，實驗組海馬CAI區(qū) 神經元的數目增加，實驗對照組海馬CAI區(qū)神經元的密度無明顯變化。實 驗組與對照組治療結果差異顯著。 結論 經過分子修飾的BDNF在體內可以穿越血腦屏障，其外周給藥對AD 鼠海馬神經元有保護作用。
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R749.161

【參考文獻】

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1 劉朝暉,胡海濤,馬東亮,許杰華,楊蓬勃;重組人BDNF對Alzheimer病模型神經元作用的實驗研究[J];西安交通大學學報(醫(yī)學版);2003年01期

本文編號：2746040