發(fā)布時間：2020-07-07 09:22

【摘要】：目的:阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一種進行性神經系統(tǒng)變性疾病,臨床主要表現(xiàn)為進行性記憶減退和認知障礙。AD的病理表現(xiàn)主要是細胞外淀粉樣蛋白沉積(amyloidβ,Aβ)、神經纖維纏結和神經元丟失。目前大量流行病學資料顯示高脂血癥可能與AD的發(fā)病相關,高脂高膽固醇血癥已成為一個公認的AD危險因子,在最新的體外實驗中,激活核受體PPARγ能下降細胞內膽固醇水平,并因此抑制β,γ分泌酶的活性。本實驗目的在于討論在伴高脂血癥的阿爾茨海默病雙轉基因小鼠動物模型中辛伐他汀是否發(fā)揮保護作用以及辛伐他汀是否通過改變核受體的表達調節(jié)膽固醇,進而影響Aβ的產生,并為臨床應用他汀類藥物治療AD提供理論依據(jù)。 方法:本實驗建立了不同血膽固醇濃度梯度的APPswe/PS1dE9雙轉基因小鼠模型:陰性對照組、高脂陰性組、陽性組、陽性辛伐他汀組、高脂陽性組、高脂陽性辛伐他汀組。分別給予高脂高膽固醇飼料或正常飼料喂養(yǎng)6個月后給予辛伐他汀(50mg/Kg·天)或安慰劑灌胃3個月,使各組動物出現(xiàn)不同血膽固醇濃度梯度。通過免疫組織化學染色,Thioflavin S染色觀察Aβ沉積的變化情況,Morris水迷宮檢測小鼠學習、記憶能力,RT-PCR、Western blot方法分別檢測PPARγ在mRNA和蛋白水平的表達情況。 結果: 1、本實驗初步建立了不同血膽固醇濃度梯度的APPswe/PS1dE9雙轉基因小鼠模型。 2、免疫組織化學染色和ThioflavinS染色顯示高脂飼料組較正常飼料組Aβ沉積增多,辛伐他汀處理組較安慰劑對照組Aβ沉積減少,均有顯著性差異。辛伐他汀組與對照組小鼠學習、記憶能力未檢測出明顯差異。 3、RT-PCR結果顯示PPARγmRNA表達沒有改變,Western blot結果顯示辛伐他汀處理組PPARγ蛋白表達增高。 結論: 1、通過對不同血膽固醇梯度的轉基因小鼠研究,發(fā)現(xiàn)膽固醇水平可以影響Aβ的生成,高脂血癥可能是AD的危險因素,辛伐他汀可以有效地降低其膽固醇水平,發(fā)揮保護作用。 2、辛伐他汀處理后PPARγ表達增高,推測辛伐他汀可能與激動PPARγ有關。 3、辛伐他汀可能通過調節(jié)PPARγ的表達改變膽固醇濃度,從而影響Aβ的生成。
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R589.2;R749.16
【圖文】：

圖 1 PS DNA 片段 PCR 擴增產物的鑒定結果，陽性產物為 3,4,8,9,10，12；陰1,2,5,6,7,11,13,14；marker：DNA Marker DL2,000，PCR 產物片段為 608bp。2、采用 PCR 法擴增技術，以鼠尾 DNA 為模板，擴增 APP 基因片段1%瓊脂糖凝膠電泳分離。結果如圖所示，在 377bp 附近有一條明亮的帶的基因 APP DNA 片段的預期位置相符。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 marker1007550

三、轉基因鼠的 Aβ的表達1、免疫組織化學染色檢測 A β 沉積用小鼠抗人 A β(WO-2)單抗對轉基因小鼠腦片進行免疫組化染色后，對各鼠 A β 沉積情況進行觀察。陰性對照組基本不出現(xiàn) Aβ 沉積，高脂陰性組與組相比，Aβ 沉積的數(shù)量增多，陽性組可見大量 Aβ 沉積沉積，說明轉基因鼠較正常同窩陰性對照鼠神經元內 Aβ 沉積增高明顯。說明轉基因陽性鼠 A表達明顯高于同窩陰性對照鼠，在形態(tài)學上證明了轉入的人基因的高表達。他汀處理的陽性小鼠較陽性小鼠 Aβ 沉積數(shù)量減少，高脂陽性小鼠 Aβ 沉積經辛伐他汀處理后的高脂陽性小鼠較高脂陽性小鼠 Aβ 沉積數(shù)量減少。從以果可以看出，膽固醇水平可以影響腦內 Aβ 沉積表達水平，經辛伐他汀處理Aβ 沉積均有所減少。

17高脂陽性 高脂陽性辛伐他汀圖 5 Thioflavin S 染色結果每張片子選取 4 個高倍視野運用 Image-pro Plus 圖象分析系統(tǒng)進行圖象分分析結果顯示，陰性組的 Aβ 沉積數(shù)明顯低于陽性組，高脂陰性組較陰性組多，陽性辛伐他汀組較陽性組 Aβ 沉積數(shù)量減少。高脂陽性組較陽性組 Aβ 明顯增多，高脂陽性辛伐他汀組比高脂陽性組減少。說明，高膽固醇增加 Aβ積的數(shù)量。辛伐他汀處理減少高脂造成的Aβ沉積增多。均有顯著性差異（p<0.與免疫組化結果一致。

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本文編號：2744949