【摘要】： 前言 創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(posttraumatic stress disorder, PTSD)是指在強(qiáng)烈的精神創(chuàng)傷后發(fā)生的心理、生理的應(yīng)激反應(yīng)所表現(xiàn)出的一系列臨床綜合癥,是應(yīng)激精神疾病中最為典型的一種。其核心癥狀可以簡述為闖入性再體驗(yàn)、警覺性增高及反應(yīng)麻木。隨著戰(zhàn)爭、社會暴力、重大交通事故和自然災(zāi)害等意外事件的逐漸增多,PTSD發(fā)生率也愈加增高�，F(xiàn)今,PTSD以其發(fā)病率高、病程長、難以治愈等特點(diǎn),嚴(yán)重影響人們身心健康而備受關(guān)注。國內(nèi)外對PTSD進(jìn)行了大量研究,但其確切的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。研究表明,HPA軸負(fù)反饋增強(qiáng)是PTSD的神經(jīng)內(nèi)分泌一個(gè)特征。神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)及其受體在HPA軸負(fù)反饋調(diào)節(jié)中起重要作用。5-羥色胺1A受體在情緒和精神調(diào)節(jié)中起重要作用。但其在PTSD中的作用目前研究不一。ERK1／2在包括神經(jīng)元在內(nèi)的許多細(xì)胞中均起重要作用,但目前對SPS時(shí)腦內(nèi)神經(jīng)元中ERK分子磷酸化的研究還只是剛剛起步。 單一連續(xù)刺激(single prolonged stress, SPS)是PTSD動物模型的理想方法,該方法已經(jīng)被國際所認(rèn)同。本研究采用SPS方法建立PTSD大鼠模型,測定大鼠行為學(xué)改變和血清皮質(zhì)醇濃度,驗(yàn)證PTSD模型的準(zhǔn)確性。為探討5-HT1A受體對GR和CRF的影響,我們利用5-HT 1A特異性阻斷劑作用于SPS大鼠,觀察大鼠海馬GR和下丘腦CRF的變化。并觀察SPS大鼠1nPFC中磷酸化的ERK1／2和c-fos的變化,探討ERK通路抑制劑PD98059的作用。為揭示PTSD的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法 1、PTSD大鼠行為學(xué)改變 將Wistar大鼠隨機(jī)分為對照組和模型組。采用SPS方法建立PTSD模型。采用曠場(open-field, OF)實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮(elevated plus maze, EPM)實(shí)驗(yàn)、Morris水迷宮(Morris water mace, MWM)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)測定,并測定大鼠的恐懼記憶的行為(僵立行為測定),采用化學(xué)發(fā)光法檢測大鼠血清皮質(zhì)醇濃度。 2、PTSD大鼠5-HT1A受體活性與海馬GR和下丘腦CRF表達(dá)的關(guān)系 大鼠分為四組：(1)正常對照組(normal group),大鼠既不給予SPS處理,也不給予藥物干預(yù)；(2)假手術(shù)組(sham group),實(shí)驗(yàn)動物不給予SPS處理,但給予等體積的溶劑；(3)模型組(SPS group),實(shí)驗(yàn)動物給予SPS處理,處理前給予等體積溶劑；(4)阻斷組(blockade group),實(shí)驗(yàn)動物給予SPS處理和5-HT1A受體拮抗劑WAY100635。膠體金免疫電鏡觀察5-HT1A在海馬和下丘腦神經(jīng)元內(nèi)的分布。免疫組織化學(xué)方法分析海馬GR和下丘腦CRF表達(dá)。Westernblotting分析海馬GR表達(dá)。RT-PCR分析GR mRNA和CRF mRNA變化。 3、PTSD大鼠前額皮質(zhì)磷酸化細(xì)胞外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)激酶的變化 大鼠被隨機(jī)分為三組：對照組、SPS組和PD98059+SPS組。SPS組和PD98059+SPS組大鼠給予SPS,并在SPS前30min分別雙側(cè)注入生理鹽水和PD98059,對照組大鼠給予等體積生理鹽水。用SABC法進(jìn)行mPFC部位的pERK1／2的免疫組織化學(xué)染色,將染色后的切片經(jīng)自動圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析。Western blotting分析mPFC部位的pERK1/2。RT-PCR分析c-fos mRNA表達(dá) 結(jié)果 一、PTSD大鼠行為學(xué)改變 1、OF實(shí)驗(yàn)結(jié)果 兩組大鼠在曠場箱內(nèi)主要在箱壁區(qū)域活動,其運(yùn)動符合嚙齒類動物的趨觸性(thigmotaxis)的自然屬性,即嚙齒類動物趨向于沿壁活動。模型組大鼠中央格停留時(shí)間和直立次數(shù)顯著低于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余指標(biāo)兩組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) 2、EMP實(shí)驗(yàn)結(jié)果 EMP結(jié)果表明,大鼠活動符合大鼠趨暗的自然屬性,即大鼠趨向于在光線暗處活動,大鼠在閉臂內(nèi)活動時(shí)間和路程顯著多于開臂。隨著大鼠對環(huán)境的逐漸適應(yīng),大鼠向開臂內(nèi)的探究行為逐漸增多。模型組大鼠在開臂內(nèi)停留時(shí)間所占總臂內(nèi)停留時(shí)間比顯著低于對照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。模型組大鼠進(jìn)入開臂次數(shù)占總進(jìn)臂次數(shù)的百分比顯著低于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 3、MWM實(shí)驗(yàn)結(jié)果 模型組大鼠平均逃避潛伏期顯著高于對照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 4、僵立行為測定結(jié)果 模型組大鼠再次放入強(qiáng)迫游泳玻璃缸中(重新面臨恐懼情景時(shí))后,大鼠表現(xiàn)為明顯的僵立行為。對照組大鼠重新面臨恐懼情景時(shí),行為模式與模型組顯然不同,表現(xiàn)為自由運(yùn)動,出現(xiàn)探究、理毛等行為。對照組僵立行為百分比顯著低于模型組,兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01) 5、血清皮質(zhì)酮濃度 模型組大鼠血清皮質(zhì)酮濃度顯著低于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 二、PTSD大鼠5-HTlA受體活性與海馬GR受體和下丘腦CRF表達(dá)的關(guān)系 1、GR和CRF免疫組化分析結(jié)果 GR的陽性細(xì)胞主要分布于海馬的CA1區(qū)。正常對照組和假手術(shù)組之間GR表達(dá)沒有明顯差異。與正常對照組和假手術(shù)組相比較,模型組GR表達(dá)增高,陽性細(xì)胞明顯增多(P0.01),而阻斷組陽性細(xì)胞數(shù)量則比SPS組減少(P0.05),但仍高于正常對照組和假手術(shù)組(P0.01)。正常對照組和假手術(shù)組之間下丘腦CRF表達(dá)沒有明顯差異,模型組CRF表達(dá)明顯高于正常對照組和假手術(shù)組(P＜0.01),而阻斷組陽性細(xì)胞數(shù)量則比SPS組減少(P0.05)。 2、Western blotting分析海馬GR表達(dá) 正常對照組和假手術(shù)組均有一定表達(dá),模型組表達(dá)明顯高于正常對照組和假手術(shù)組(P0.01),阻斷組GR表達(dá)低于SPS組(P0.01)。 3、RT-PCR分析海馬GR mRNA和下丘腦CRF mRNA表達(dá) 正常對照組和假手術(shù)組GR和CRFmRNA表達(dá)沒有區(qū)別,但模型組二者表達(dá)顯著增高(P0.01),這種增高可以被WAY100635阻斷(P0.05) 三、PTSD大鼠前額皮質(zhì)磷酸化細(xì)胞外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)激酶的變化 1、pERK1／2免疫組化染色 pERK1／2蛋白定位在胞漿,陽性細(xì)胞顯示棕黃色。對照組陽性細(xì)胞的OD值比較小,SPS組大鼠明顯增高(P0.01),PD98059+SPS組大鼠陽性細(xì)胞OD值明顯比SPS組小(P0.01)。 2、pERK1/2 Western blotting分析 SPS組大鼠pERK1/2相對表達(dá)明顯增高(P0.01),PD98059+SPS組大鼠pERK1/2比SPS組表達(dá)弱(P0.01)。結(jié)果與免疫組化結(jié)果相一致。 3、RT-PCR分析結(jié)果 正常大鼠c-fos mRNA有低量表達(dá)。SPS大鼠表達(dá)增高,注入PD98059后,mPFC c-fos表達(dá)減弱(P0.01) 結(jié)論 1、SPS能使大鼠具有PTSD癥狀。 2、5-HT1A受體活性與海馬GR、下丘腦CRF有關(guān)。5-HT1A受體活性可能促進(jìn)海馬GR表達(dá),促進(jìn)下丘腦CRF合成。 3、SPS促使大鼠前額皮質(zhì)ERK磷酸化增高,ERK活性與c-fos表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R749.5
【圖文】：

和對照組大鼠在開臂內(nèi)停留時(shí)間所占總臂內(nèi)停留時(shí)間比分別為11.9士1.3和18.7士1.7，模型組顯著低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.837，P<0.01)，見圖1一1。模型組和對照組大鼠進(jìn)入開臂次數(shù)占總進(jìn)臂次數(shù)的百分比分別為21.3士2.2和37.8士2.9，模型組顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(拼10.295，P<O.OI)，見圖1一2。二 dnU二d八llU工﨑 JnU9翻9曰，土1.幾確tn﨑月u。dou﨏書。ds。翻日J(rèn)%o五求亙蓄粼沖嗽eontrolmodel圖1一1，開臂內(nèi)停留時(shí)間占總臂內(nèi)時(shí)間百分比(與對照組相比較，’‘P<0.ol)。?襄瓤甲二d八 U工bn

本文編號：2742774