【摘要】：表觀遺傳調(diào)節(jié)在阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease, AD）病理機制中起重要作用，其中組蛋白乙�；揎椀淖饔糜葹橥怀�。大量研究證實AD的全組蛋白低乙�；閷�(dǎo)了記憶基因的表達，卻少有AD相關(guān)基因，如早老素1（PS1）或淀粉樣前體蛋白（APP）β-剪切酶（BACE1）的組蛋白乙酰化等相關(guān)研究報道。我們利用轉(zhuǎn)入Swedish突變的人APP695的小鼠神經(jīng)母細胞瘤N2a細胞（N2a/APPswe）和轉(zhuǎn)入野生型人APP695的N2a細胞（N2a/APPwt），作為AD的細胞模型，檢測了PS1、BACE1基因啟動子的組蛋白乙�；�。結(jié)果表明相對于N2a/APPwt細胞與空載體N2a/wt細胞，N2a/APPswe細胞中的PS1、BACE1基因啟動子的組蛋白呈高乙酰化水平，與PS1、BACE1的表達上調(diào)一致，另外，組蛋白乙�；福℉istone acetylase, HATs）腺病毒E1A相關(guān)蛋白p300也明顯升高。我們還證明了在N2a/APPswe細胞中，p300可與PS1、BACE1基因啟動子相結(jié)合。但是，與N2a/wt細胞比較，N2a/APPwt細胞中PS1、BACE1啟動子組蛋白乙�；脚cp300蛋白無明顯變化。我們利用p300的HAT選擇性抑制劑姜黃素處理N2a/APPswe細胞發(fā)現(xiàn)，PS1、BACE1組蛋白乙�；捷^前明顯降低，PS1、BACE1的表達量也相應(yīng)下降。我們的研究結(jié)果提示組蛋白乙酰化酶p300通過調(diào)節(jié)AD相關(guān)基因啟動子區(qū)域的組蛋白乙�；剑M一步調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄及表達。組蛋白乙酰化酶p300在AD病理的表觀調(diào)節(jié)作用為家族性AD的防治提供了新思路。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R749.16
【圖文】：

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文及其下游的 Aβ 水平明顯增高以 N2a/APPswe 細胞和 N2a/APPwt 細胞常作為 AD 病理模型[15]。我們利用Western blotting 和 Q-PCR 技術(shù)，以空載體 N2a/wt 細胞為對照組，首先檢測了N2a/APPswe 和 N2a/APPwt 細胞中 PS1、BACE1 表達水平，以及下游產(chǎn)物 Aβ1-42，Aβ1-40 分泌水平。如圖 1A，1B 所示，與 N2a/wt 細胞比較，N2a/APPswe 和N2a/APPwt 細胞中 PS1、BACE1 的 mRNA 和蛋白水平明顯增高（p<0.05），同時，下游的 AD 標志物 Aβ1-42，Aβ1-40 分泌水平也明顯增高（p<0.05）（圖 1C）。3 結(jié)果3.1 N2a/APPswe 和 N2a/APPwt 細胞中的 PS1、BACE1 表達水平，

我們探索基因表達上調(diào)，是否與該基因啟動子區(qū)域組蛋白高乙�；嘘P(guān)。我們利用 ChIP 技術(shù)檢測了 N2a/APPswe 和 N2a/APPwt 細胞中 PS1、BACE1 啟動子組蛋白 H3 乙�；ˋc-H3）水平。與 N2a/wt 細胞對照組比較，N2a/APPswe 細胞 PS1、BACE1 啟動子序列 Ac-H3 水平明顯升高（p<0.05），而 N2a/APPwt 細胞無變化（圖 2A）。這些結(jié)果提示在 N2a 細胞中，APPswe 突變，而非 APP 過表達，誘導(dǎo)了 PS1、BACE1 組蛋白高乙�；�，激活了基因轉(zhuǎn)錄。另外，我們利用 Western blotting 檢測了 N2a/APPswe 和 N2a/APPwt 細胞中全組蛋白 H3 乙酰化（Ac-H3）水平。如圖 2B，與對照組比較，N2a/APPswe 細胞Ac-H3 明顯增高（p<0.05），然而，在 N2a/APPwt 細胞中，Ac-H3 水平僅呈輕微的增高趨勢，并無統(tǒng)計學意義。這提示 N2a 細胞 APPswe 突變，而非 APP 過表達，誘導(dǎo)了全組蛋白高乙�；�。

【共引文獻】

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本文編號：2740487