【摘要】：第一部分海藻糖對阿爾茨海默癥中APP代謝的分子機(jī)制研究目的:阿爾茨海默癥(Alzheimer’s Disease,AD)是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病。淀粉樣蛋白前體(amyloid precursor protein,APP)的代謝異常為AD發(fā)病的可能原因。近年來研究者發(fā)現(xiàn)海藻糖能夠調(diào)節(jié)自噬,清除異常蛋白。已有研究表明其可用于部分神經(jīng)變性疾病的治療,但目前關(guān)于海藻糖對阿爾茨海默癥的治療作用尚不清楚。本研究通過建立細(xì)胞及動(dòng)物模型,初步探討海藻糖對AD相關(guān)APP代謝的影響。方法:首先,將20E2和HAW細(xì)胞系分別用不同濃度的海藻糖干預(yù)24小時(shí),使用western blotting及ELISA檢測代謝過程中APP、CTF、PS1、LC3II/LC3I及Aβ的改變。其次,將20E2及HAW細(xì)胞系分為對照組,50m M海藻糖干預(yù)組,氯喹干預(yù)組及50m M海藻糖加氯喹聯(lián)合干預(yù)組。在分別干預(yù)24小時(shí)后,用western blotting檢測APP的改變。再次,在不同濃度海藻糖干預(yù)24小時(shí)后,用單溶液細(xì)胞增殖檢測試劑盒(MTS)檢測HEK細(xì)胞的細(xì)胞存活率。最后,使用海藻糖干預(yù)APP23轉(zhuǎn)基因小鼠(AD模型鼠),將9個(gè)月的APP轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組給予海藻糖干預(yù)1個(gè)月,對照組則給予正常飲水1個(gè)月。采用Morris6水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn),檢測海藻糖干預(yù)后小鼠空間學(xué)習(xí)與記憶能力的變化。并使用western blotting及ELISA檢測APP、CTF、PS1、LC3II/LC3I及Aβ的表達(dá)變化。使用免疫組化及Thioflavin-S染色方法檢測老年斑的數(shù)量變化。結(jié)果:體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,50m M海藻糖干預(yù)組與對照組比較,20E2和HAW細(xì)胞系中APP、CTF及LC3II/LC3I的表達(dá)明顯升高,而PS1蛋白表達(dá)無明顯改變。同樣的,100m M海藻糖干預(yù)組與對照組相比,20E2和HAW細(xì)胞系中APP及CTF表達(dá)明顯增加,且與50m M海藻糖干預(yù)組相比較,100m M海藻糖干預(yù)組的APP及CTF增加更為明顯。此外,在20E2細(xì)胞系中,海藻糖干預(yù)后細(xì)胞分泌的Aβ40及Aβ42較對照組有明顯降低。在20E2及HAW細(xì)胞系中,與對照組相比,50m M海藻糖干預(yù)組的APP表達(dá)明顯增加,同樣的,50m M海藻糖加氯喹聯(lián)合干預(yù)組及氯喹干預(yù)組的APP表達(dá)均較對照組明顯升高,但50m M海藻糖加氯喹聯(lián)合干預(yù)組與氯喹干預(yù)組相比較,二者APP表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。此外,與對照組相比,50m M海藻糖干預(yù)組的LC3II/LC3I明顯增加。而在不同濃度的海藻糖(0.1m M,1m M,10m M,100m M,200m M)干預(yù)24小時(shí)后,HEK細(xì)胞的細(xì)胞存活率較對照組無明顯變化。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,海藻糖干預(yù)組的小鼠腦組織內(nèi)的APP及CTF蛋白水平較對照組均明顯升高,PS1及BACE1蛋白表達(dá)則無明顯改變,LC3II/LC3I有明顯增加,Aβ40表達(dá)下降,并且老年斑的數(shù)量明顯減少。但是海藻糖干預(yù)組及對照組相比,水迷宮實(shí)驗(yàn)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明海藻糖可以在體外和體內(nèi)影響APP代謝,減少老年斑的形成。但不能明顯改善APP23轉(zhuǎn)基因小鼠(AD模型小鼠)的學(xué)習(xí)和記憶功能。第二部分IL-17對人偏肺病毒感染中免疫細(xì)胞表達(dá)失衡的影響機(jī)制目的:人偏肺病毒(human Metapneumovirus,h MPV)是2001年由荷蘭學(xué)者Van den Hoogen等人首次從呼吸道感染兒童NPA標(biāo)本中分離的一種新的人類呼吸道病毒病原體,屬于副粘病毒科偏肺病毒屬,為單負(fù)鏈非節(jié)段性RNA病毒。急性h MPV感染與體內(nèi)長期肺部炎癥、氣道阻力和氣道高反應(yīng)性有關(guān)。大量臨床和動(dòng)物研究顯示Th17/IL-17在抗病毒感染免疫方面扮演重要角色,但是到目前為止,h MPV感染后Th17/IL-17參與的免疫機(jī)制目前尚未見相關(guān)報(bào)道。本研究旨在探討IL-17在人偏肺病毒(h MPV)引起的肺部炎癥中的影響機(jī)制。方法:IL-17 KO小鼠及WT小鼠經(jīng)滴鼻感染重組h MPV,于感染后5天處進(jìn)行處理,肺功能檢測氣道高反應(yīng)性,肺部灌洗獲取肺泡灌洗液計(jì)數(shù)細(xì)胞分類,無菌獲取肺組織用于病毒分離和病理檢查,RT-PCR法檢測h MPV m RNA表達(dá),流式分析Treg細(xì)胞,Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞表達(dá)。結(jié)果:IL-17 KO小鼠及WT小鼠的h MPV m RNA無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,肺泡灌洗液計(jì)數(shù)細(xì)胞總量及中性粒細(xì)胞數(shù)量顯示,IL-17 KO小鼠感染組較WT小鼠感染組明顯降低,肺功能檢測(乙酰膽堿25-50mg/ml)結(jié)果表明IL-17 KO小鼠感染組較WT小鼠感染組Penh值明顯降低。流式分析結(jié)果提示IL-17 KO小鼠較WT小鼠的Treg細(xì)胞升高,而Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞下降,在感染h MPV后該現(xiàn)象則更為明顯。結(jié)論:IL-17KO小鼠呈現(xiàn)出Treg細(xì)胞偏移現(xiàn)象,在感染人偏肺病毒后Treg細(xì)胞持續(xù)升高,而Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞則明顯下降,從而主導(dǎo)抗炎效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R749.16
【圖文】：

圖 4.海藻糖可抑制神經(jīng)斑塊的形成。9 月齡的 APP23 小鼠予海藻糖干預(yù) 1 個(gè)月，用純凈水干預(yù)作為對照。通過免疫組化的方法，用 4G8 抗體檢測神經(jīng)斑塊的數(shù)量。結(jié)果顯示海藻糖干預(yù)組神經(jīng)斑塊數(shù)量明顯減少。硫磺素 S 染色亦顯示海藻糖干預(yù)組神經(jīng)斑塊明顯減少。（對照組 7 只 vs 海藻糖干預(yù)組 8 只，*P < 0.05， student’t 檢驗(yàn)）。Figure 4. Trehalose decreased the formation of neuritic plaque. APP23 mice at 9months of age were treated with trehalose for 1 month. 4G8 antibody was used to detectthe number of neuritic plaques by immunohistochemical staining. Trehalose treatmentdecreased the number of neuritic plaques in APP23 mice. The number of neuriticplaques was detected by Thioflavin-S staining and the results verify the previous results.(control group=7 and trehalose group=8, *P< 0.05 by student’t test.)3.5 Morris 水迷宮測試無明顯差異。

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文的逃逸潛伏期（P>0.05，圖 5A）和距離（P>0.05，圖 學(xué)意義。結(jié)果表明海藻糖不會(huì)改善小鼠的視力功能和運(yùn)在隱匿平臺(tái)期，藥物組和對照組的逃逸潛伏期及距和 5D）無差異�？臻g探索記憶實(shí)驗(yàn)中，可視平臺(tái)被撤離臺(tái)所在的第三象限的次數(shù)。與對照組相比，藥物組小鼠異（ P>0.05，圖 5E）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明海藻糖不能改善 空間記憶能力。A B

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李于,肖冬光,王蘭,石萍;酵母海藻糖提取及精制工藝的研究[J];天津輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年04期

本文編號(hào)：2733511