【摘要】：目的:血管性癡呆(vascular dementia, VD)是由各種腦血管疾病引起的獲得性、持續(xù)性認(rèn)知功能障礙綜合征,以學(xué)習(xí)和記憶功能障礙、執(zhí)行能力下降為主要臨床表現(xiàn)。近年來(lái),VD的發(fā)病率逐年提高,嚴(yán)重地威脅著老年人的身心健康,也給社會(huì)和家庭帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。目前,VD的發(fā)病機(jī)制還不十分清楚,因此,深入研究VD的發(fā)病機(jī)制仍是當(dāng)前醫(yī)學(xué)界的熱點(diǎn)課題。 深入研究VD的發(fā)病機(jī)制就需要建立理想的VD動(dòng)物模型。目前已有多種VD動(dòng)物模型,但尚無(wú)一種公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)模型,因此制備最接近人類VD特征的、可靠的動(dòng)物模型就成為醫(yī)學(xué)界十分關(guān)注的課題。本研究采用小鼠做為觀察對(duì)象,采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎反復(fù)腦缺血-再灌注合并尾端放血的方法制備VD小鼠模型,通過(guò)跳臺(tái)和水迷宮試驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試。 海馬組織與學(xué)習(xí)和記憶功能關(guān)系密切,其中神經(jīng)元和突觸的數(shù)量和形態(tài)正常與否對(duì)學(xué)習(xí)和記憶的產(chǎn)生和維持具有重要作用。資料表明,學(xué)習(xí)和記憶功能與海馬神經(jīng)元突觸可塑性密切相關(guān),突觸丟失和結(jié)構(gòu)改變與認(rèn)知功能下降有直接關(guān)系。本課題組已觀察到VD時(shí)海馬神經(jīng)元細(xì)胞核腫脹,細(xì)胞器減少;軸突中神經(jīng)微管結(jié)構(gòu)模糊,樹突和軸突均有不同程度水腫,突觸的數(shù)量減少;突觸小泡破裂等。證明海馬神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)變化導(dǎo)致了神經(jīng)元功能異常、突觸可塑性降低,在VD發(fā)病機(jī)制中起重要作用。在此基礎(chǔ)上本研究應(yīng)用透射電鏡進(jìn)一步觀察VD時(shí)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元突觸的變化特征,為探討其發(fā)病機(jī)制提供更多形態(tài)學(xué)依據(jù)。 第四腦室外側(cè)隱窩位于第四腦室與蛛網(wǎng)膜下腔之間,是腦脊液循環(huán)的必經(jīng)之路,也是腦內(nèi)物質(zhì)交換和信息傳遞的重要位點(diǎn),對(duì)腦脊液內(nèi)免疫信息分子具有重要的監(jiān)控作用,并且還可調(diào)節(jié)多種神經(jīng)內(nèi)分泌功能和神經(jīng)免疫功能。室管膜位于血液-腦脊液-神經(jīng)組織三種不同信息交匯處,其位置的特殊性決定了它在大腦功能中起著重要的作用。有學(xué)者報(bào)道,阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)時(shí),在腦室的室管膜細(xì)胞內(nèi)也有神經(jīng)原纖維纏結(jié)和淀粉樣沉積。本課題組已觀察到VD時(shí)第四腦室外側(cè)隱窩的室管膜上纖毛減少、排列紊亂,分泌顆粒增多,室管膜上細(xì)胞數(shù)目減少,胞體變小而突起減少。推測(cè)這些改變?cè)赩D的發(fā)病機(jī)制中有重要作用。在以上研究的基礎(chǔ)上,本研究進(jìn)一步觀察VD時(shí)室管膜細(xì)胞及室管膜細(xì)胞上結(jié)構(gòu)的變化特征,以探討其可能的發(fā)病機(jī)制。 方法:本研究分為三部分 第一部分以小鼠為研究對(duì)象,采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎的方法,經(jīng)過(guò)三次反復(fù)腦缺血(ischemia, I) -再灌注(reperfusion, R),建立VD小鼠模型,并設(shè)立假手術(shù)組,在模型制備后的第29、30天,利用跳臺(tái)和水迷宮試驗(yàn)對(duì)兩組小鼠進(jìn)行學(xué)習(xí)和記憶成績(jī)測(cè)試。 第二部分采用3%多聚甲醛和1%戊二醛固定液灌流固定后取海馬CA 1區(qū)組織進(jìn)行透射電鏡觀察。 第三部分采用3%多聚甲醛和1%戊二醛固定液灌流固定后取第四腦室外側(cè)隱窩進(jìn)行掃描電鏡觀察。 結(jié)果: 1兩組小鼠的行為學(xué)評(píng)價(jià) 術(shù)后第29天,測(cè)試跳臺(tái)試驗(yàn)的反應(yīng)時(shí)間(sec)和錯(cuò)誤次數(shù)(number/5 min)作為學(xué)習(xí)成績(jī);水迷宮試驗(yàn)游完全程的時(shí)間(sec)和錯(cuò)誤次數(shù)(number/3 min)作為學(xué)習(xí)成績(jī)。術(shù)后第30天測(cè)得成績(jī)?yōu)橛洃洺煽?jī)。 1.1學(xué)習(xí)成績(jī) (1)跳臺(tái)試驗(yàn)結(jié)果示:①VD模型組小鼠的反應(yīng)時(shí)間與假手術(shù)組相比明顯延長(zhǎng)(P0.01);②VD模型組小鼠的錯(cuò)誤次數(shù)與假手術(shù)組相比明顯增多(P0.05)。 (2)水迷宮試驗(yàn)結(jié)果示:①VD模型組小鼠游完全程的時(shí)間與假手術(shù)組相比明顯延長(zhǎng)(P0.01);②VD模型組小鼠的錯(cuò)誤次數(shù)與假手術(shù)組相比明顯增多(P0.01)。 1.2記憶成績(jī) (1)跳臺(tái)試驗(yàn)結(jié)果示:①VD模型組小鼠的潛伏時(shí)間與假手術(shù)組相比明顯縮短(P0.01);②VD模型組小鼠的錯(cuò)誤次數(shù)與假手術(shù)組相比明顯增多(P0.01)。 (2)水迷宮試驗(yàn)結(jié)果示:①VD模型組小鼠游完全程的時(shí)間與假手術(shù)組相比明顯延長(zhǎng)(P0.01);②VD模型組小鼠的錯(cuò)誤次數(shù)與假手術(shù)組相比明顯增多(P0.01)。 2應(yīng)用透射電鏡觀察海馬組織CA1區(qū)的超微結(jié)構(gòu)變化 2.1假手術(shù)組:突觸豐富,典型者為突觸前膜中可見線粒體、突觸小泡聚集,靠近突觸間隙一側(cè),突觸間隙清晰可見,突觸后膜較厚,為均勻的致密物質(zhì)。 2.2 VD模型組:小鼠海馬CA1區(qū)突觸數(shù)量減少,部分突觸形態(tài)異常,突觸前成分內(nèi)線粒體數(shù)量減少、結(jié)構(gòu)改變,突觸小泡數(shù)量減少,突觸間隙大部分融合,模糊不清,突觸后致密物質(zhì)減少。 3應(yīng)用掃描電鏡觀察第四腦室外側(cè)隱窩室管膜超微結(jié)構(gòu)變化 3.1假手術(shù)組:①室管膜細(xì)胞排列規(guī)律,其表面可見大量纖毛和微絨毛。纖毛粗長(zhǎng),排列叢密;纖毛之間可見密集的、細(xì)而短的微絨毛。②室管膜細(xì)胞上可見圓球形的、表面光滑的分泌顆粒。 3.2 VD模型組:①室管膜細(xì)胞表面的纖毛和微絨毛的數(shù)量明顯減少;暴露的室管膜細(xì)胞之間出現(xiàn)溝隙,細(xì)胞表面凹凸不平,甚至出現(xiàn)裂口;在室管膜細(xì)胞表面可見淤泥樣分泌物,部分纖毛倒伏在淤泥里,其上可見纖毛壓跡;②室管膜細(xì)胞上的分泌顆粒明顯增多,其表面變的凹凸不平,有的分泌顆粒的膜表面向內(nèi)塌陷,呈杯口狀;有的分泌顆粒形狀不規(guī)則。 結(jié)論: 1本實(shí)驗(yàn)成功的建立了VD小鼠模型,經(jīng)跳臺(tái)和水迷宮試驗(yàn)證實(shí)了VD小鼠存在學(xué)習(xí)和記憶功能障礙,能夠基本模擬臨床上VD患者的智能障礙,是比較理想的VD動(dòng)物模型。 2 VD模型組海馬CA1區(qū)突觸數(shù)目減少,部分突觸形態(tài)異常,突觸前成分內(nèi)線粒體數(shù)量減少、結(jié)構(gòu)改變,突觸小泡數(shù)量減少,突觸間隙部分融合,突觸后致密物質(zhì)變薄。以上結(jié)果提示神經(jīng)元沖動(dòng)傳遞能力下降,這些異常改變可能參與了VD的發(fā)病。 3 VD模型組第四腦室外側(cè)隱窩室管膜上纖毛和微絨毛數(shù)量減少,出現(xiàn)淤泥樣分泌物,室管膜細(xì)胞皺縮,細(xì)胞間出現(xiàn)裂隙,纖毛根部出現(xiàn)許多小裂口。以上結(jié)果提示室管膜細(xì)胞功能減退,細(xì)胞代謝和信息物質(zhì)的傳遞能力下降,這些異常改變可能參與了VD的發(fā)病。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

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1 扈榮;鐘曉明;;血管性癡呆動(dòng)物模型的研究概況[J];浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2008年01期

2 王麗s

本文編號(hào)：2724472