發(fā)布時間：2020-06-20 06:33

【摘要】：目的：隨著世界老齡化的到來，老年疾病已是一個不容忽視的問題。包括阿爾茨海默病（Alzheimer disease，AD）在內(nèi)的老年癡呆患者越來越多。據(jù)國外一項流行病學調(diào)查研究,老年癡呆癥已成為繼心腦血管病、腫瘤等之后的第4大死亡原因。AD患者腦組織內(nèi)有大量β-淀粉樣蛋白(β-amyloid peptide, Aβ)的沉積、老年斑的形成以及神經(jīng)纖維的纏結(jié)，并且這些病理改變不斷地引起神經(jīng)退行性變。 目前認為Aβ的生成增加及其在腦內(nèi)的沉積是AD發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素。引起Aβ生成增加的因素是多方面的。細胞培養(yǎng)及整體實驗均證明，高膽固醇是AD的一個風險因素。 腦組織的膽固醇都是自身合成的，HMG-CoA還原酶(HMGR)是其合成過程中的限速酶。用HMGR的抑制劑，抑制膽固醇的合成，降低細胞及血液中膽固醇，可以減少Aβ的生成，降低AD的患病率。但是，膽固醇是細胞膜、神經(jīng)髓鞘的重要組成成分，具有調(diào)節(jié)細胞膜的通透性、流動性以及物質(zhì)的轉(zhuǎn)運等功能。抑制膽固醇合成會帶來很多副作用。 腦內(nèi)膽固醇含量還受其轉(zhuǎn)出量的影響。腦內(nèi)膽固醇在膽固醇24S-羥化酶的（Cholesterol-24S-hydroxylase 即CYP46）催化下，生成24S-羥基膽固醇（24S-hydroxycholesterol）出腦，通過血腦屏障入肝，在肝臟代謝生成膽汁酸后排出體外。 膽固醇在肝臟轉(zhuǎn)化為膽汁酸是機體清除膽固醇的主要方式，首先，膽固醇在7α-羥化酶的催化下生成7α-羥膽固 WP=4 醇。后者經(jīng)過一系列的還原、羥化后，進入過氧化物酶體，經(jīng)側(cè)鏈斷裂、加輔酶A等反應(yīng)，最后生成24碳的初級膽汁酸。促進膽固醇向膽汁酸的轉(zhuǎn)化，是否能夠降低腦組織β-淀粉樣蛋白生成、是否能夠達到延緩AD的發(fā)生發(fā)展的目的呢？未見報道。 因膽汁酸結(jié)合樹脂類藥物考來烯胺可以促進膽汁酸的合成、排出，降低膽固醇。過氧化酶體增殖誘導劑鄰苯二甲酸二異辛酯(Diethylhexyl phthalate, DEHP)激活PPAR-α,促進過氧化物酶體增殖，也可以促進膽汁酸合成，降低血膽固醇。本實驗分別用考來烯胺、DEHP促進膽汁酸的合成，加強膽固醇轉(zhuǎn)化成膽汁酸，觀察腦中膽固醇及β-淀粉樣蛋白的含量變化。弄清是否可通過促進膽固醇向膽汁酸的代謝來降低β-淀粉樣蛋白，最終達到治療AD的目的。為AD的治療提供新思路和新途徑。 方法 1動物分組： 選用6月齡清潔級Wistar雄性大鼠60只，隨機分為兩組，一組為45只，給予高膽固醇飲食（含2%膽固醇、10%豬油）；另一組為15只，給予普通飲食。第4周，高膽固醇飲食大鼠造成高膽固醇血癥。然后將高膽固醇血癥大鼠再隨機分成四組，分別給予不同的飲食：①高膽固醇飲食組(High cholesterol diet, HCD)：高膽固醇飼料；②考來烯胺組（cholestyramine diet, CD）：含1%考來烯胺的普通飼料；③誘導劑DEHP組(DEHP diet, DD)：含2%DEHP的普通飼料；④轉(zhuǎn)普通飲食組（Change to basal diet, CBD）：普通飼料。⑤自始至終食用普通飲食 (Basal diet,BD) 的15只大鼠為對照 WP=5 組。繼續(xù)飼養(yǎng)9周，共13周。測定大鼠的學習記憶能力后，取血、腦分別用于血膽固醇、血膽汁酸的測定以及腦總mRNA的提取、腦Aβ和腦膽固醇的測定。迅速剝離海馬，70%酒精固定，用于細胞凋亡的測定。 2 測定指標及方法 ①用被動回避性跳臺實驗方法測定大鼠的學習記憶能力。 ②用全自動生化分析儀測定血膽固醇、血膽汁酸； ③腦組織膽固醇用氯仿/甲醇（2：1 V/V）抽提、蒸干、復溶于水后，采用膽固醇氧化酶-比色法測定其含量； ④應(yīng)用RT-PCR技術(shù)測定腦HMG-CoA還原酶及CYP46 的mRNA表達量； ⑤用放免法測定腦β-淀粉樣蛋白的含量； ⑥用FACS420型流式細胞儀測定海馬組織細胞凋亡率； 結(jié)果 1 學習、記憶能力的變化 大鼠的學習能力，各組無顯著差別。但高膽固醇飲食組（HCD）大鼠的記憶能力下降，出錯次數(shù)明顯高于其他各組（p＜0.05）。表明，大鼠記憶能力的下降與高膽固醇血癥有關(guān)。 2 腦組織Aβ含量的變化 腦內(nèi)的Aβ含量，高膽固醇飲食組（HCD）最高，明顯地高于對照組（p＜0.05），其余各組之間無顯著性差別。說明腦Aβ含量與血高膽固醇有關(guān)。 3 海馬組織細胞凋亡率的變化 與對照組相比，各組的細胞凋亡率都明顯地增高( p＜ WP=6 0.05)；其中高膽固醇飲食組（HCD）最高，考來烯胺組（CD）較轉(zhuǎn)普通飲食組（CBD）低( p＜0.05)。說明海馬組織的細胞凋亡率與血膽固醇的水平有關(guān)。 4 血中膽固醇含量的變化 血中膽固醇與對照組相比，高膽固醇飲食組（HCD）血膽固醇明顯升高( p＜0.001)，考來烯胺組（CD）血膽固醇明顯降低( p＜0.001)，誘導劑DEHP組（DD）血膽固醇無變化。 綜上所述，大鼠記憶能力的降低與海馬組織的細胞凋亡率、Aβ的含量增加有關(guān)；Aβ的含量與血膽固醇水平有關(guān)。 5 腦組織膽固醇量的變化 與對照組相比,腦膽固醇含量，除誘導劑DEHP組（DD）明顯增高（p＜0.05）外，其余各組均無變化；說明腦膽固醇含量與血膽固醇水平無直接關(guān)系。 6 腦組織HMG-CoA還原酶(HMGR) mRNA表達的變化 與對照組相比，考來烯胺組（CD）、誘導劑DEHP組（DD）的HMGR mRNA表達增加（p＜0.05）；高膽固醇飲食組（HCD）的HMGR mRNA表達無顯著差別。提示血中高膽固醇并不抑制腦膽固醇的合成。 7 腦組織膽固醇-24S-
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R749.16

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 張均田,齋藤洋;十二種化學藥品破壞小鼠被動回避性行為——跳臺試驗和避暗試驗的作用的比較觀察[J];藥學學報;1986年01期

2 王琦,謝瑤,姚志彬;β-淀粉樣蛋白31～35對體外培養(yǎng)的隔區(qū)膽堿能神經(jīng)元的作用[J];中國神經(jīng)科學雜志;1999年02期

3 王玲玲,奚濤,沈子龍,成國祥;老年癡呆癥轉(zhuǎn)基因小鼠模型研究進展[J];藥物生物技術(shù);2001年02期

本文編號：2722020