【摘要】： β-淀粉樣蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)和淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein,APP)與阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本論文圍繞這兩種蛋白開(kāi)展了相關(guān)研究。 為了克服從前免疫治療AD引起的嚴(yán)重副作用,本論文開(kāi)展了應(yīng)用不同長(zhǎng)度的Aβ的實(shí)驗(yàn)免疫研究。本論文表達(dá)純化了的三種重組蛋白Aβ28H8、Aβ35H8和Aβ42H8,與Aβ42(純品)一起,作為免疫原免疫小鼠,獲得血清抗體。四種免疫原誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體的滴度分別為1:6400、1:3200、1:6400、1:6400。研究發(fā)現(xiàn),獲得的四種血清抗體均能夠識(shí)別包括Aβ42單體、寡聚體、原纖維和成熟纖維在內(nèi)的各種聚集形式的Aβ42,具有抑制Aβ42的聚集、誘導(dǎo)Aβ42聚集體解聚的功效,具有抑制和中和Aβ42細(xì)胞毒性的作用。與其他三種免疫原相比,Aβ28H8主要誘導(dǎo)了體液免疫應(yīng)答,因此可以避免由細(xì)胞免疫應(yīng)答引起的炎癥反應(yīng)。由此證明:Aβ28是一種有效且較Aβ42更為安全的免疫原。 為了進(jìn)一步探討AD的致病機(jī)理,探索APP分子間相互作用的關(guān)鍵區(qū)域,本論文以COS-7為靶細(xì)胞,通過(guò)免疫共沉淀、細(xì)胞傷口愈合、transwell、免疫熒光、細(xì)胞粘附等實(shí)驗(yàn)證實(shí),APP對(duì)靶細(xì)胞的遷移有阻滯作用,APP分子間可以發(fā)生相互作用,并介導(dǎo)靶細(xì)胞間的相互聚集,或介導(dǎo)靶細(xì)胞在基質(zhì)Aβ4-8,Aβ11,Aβ28,Aβ35,Aβ42,C99上的粘附,而Aβ42或由Aβ28誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體能夠抑制上述所有的作用。因此可以推斷:Aβ42的胞外區(qū),特別是Aβ4-8區(qū)域,有可能是導(dǎo)致包含該區(qū)域的相關(guān)分子間發(fā)生相互作用的最關(guān)鍵區(qū)域。 上述結(jié)果為免疫預(yù)防與治療AD的疫苗設(shè)計(jì)提供了理論指導(dǎo),為進(jìn)一步探索AD的致病機(jī)理奠定了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R749.16
【圖文】：

成熟的 Aβ42 淀粉樣纖維相比，Aβ42 寡聚體和原纖維可能具有更。Aβ42 寡聚體的結(jié)構(gòu)與一類可以在細(xì)胞膜上形成通道的細(xì)菌毒素很研究者認(rèn)為其毒性機(jī)理可能是在細(xì)胞膜上形成了特殊的離子通道，系失衡[17]。由于認(rèn)知正常的老年人腦內(nèi)也可能有大量的 Aβ42 纖維研究者對(duì) Aβ42 與 AD 的關(guān)系存在懷疑[18，19]；但可溶性的 Aβ42 寡有更好的相關(guān)性[20，21]，這表明大量不可溶的 Aβ42 纖維可能作為一放具有細(xì)胞毒性的可溶的 Aβ42 寡聚體[13]。由此我們可以推斷，清內(nèi)各種聚集形式的 Aβ42，都可能對(duì) AD 的治療起作用。圖 1.1 APP 的水解及 Aβ 的產(chǎn)生。……M DAEFRHDSGYEVHHQK LVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGV V IA TV……βαAβ40Aβ39 Aβ42γ γγ

APP 分子從 N 端到 C 端，總體上可以劃分為三個(gè)高度保域：E1 區(qū)域，E2 區(qū)域和 C 端區(qū)域[46，47]。E1 區(qū)域包括一個(gè)肝素結(jié)合結(jié)Heparin-binding domain，HBD1），又名類生長(zhǎng)因子結(jié)構(gòu)域（growth factormain，GFLD）和一個(gè)銅結(jié)合結(jié)構(gòu)域（copper-binding domain，CuBD）；E 之間是一個(gè)高度酸性的區(qū)域，在 APP751 和 APP770 分子中，酸性區(qū)域與域之間還存在一個(gè) KPI 或 KPI 及 Ox-2 抗原結(jié)構(gòu)域；E2 區(qū)域又稱為 APP 域（centralAPP domain，CAPPD），包含一個(gè)促胸腺生成素序列（RERMS個(gè)高親和力的肝素結(jié)合結(jié)構(gòu)域（HBD2），E2 和其后的一小段近膜區(qū)域又圖 1.2 APP 結(jié)構(gòu)域劃分。從 N 端到 C 端依次劃分為三個(gè)高度保守的區(qū)域：E1 區(qū)域，E2 區(qū)域和 C 域（其中 RERMS 序列可能是 APP 促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的活性位點(diǎn)）

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳惠玲;文國(guó)強(qiáng);王冰雁;;阿爾茨海默病的細(xì)胞凋亡機(jī)制[J];海南醫(yī)學(xué);2010年01期

2 蔡高梅;畢建忠;;TRAIL在Aβ25-35誘導(dǎo)的大鼠海馬組織中的表達(dá)[J];醫(yī)學(xué)臨床研究;2008年10期

3 王晶;余惠e

本文編號(hào)：2721631