發(fā)布時間：2020-06-15 02:07

【摘要】： 目的:血管性癡呆(Vascular Dementia,VD)是老年期癡呆的主要類型之一,它是由一系列腦血管因素(缺血、出血、急慢性缺氧性腦血管病等)導(dǎo)致腦組織損害引起的以認(rèn)知功能障礙為特征的癡呆綜合癥,不僅給病人帶來長期痛苦,嚴(yán)重影響其生活質(zhì)量,而且給家庭、社會造成沉重負(fù)擔(dān),因此研究VD的發(fā)病機制以指導(dǎo)其防治具有很高的社會價值和現(xiàn)實意義。硫化氫(hydrogen sulfide,H2S)是“一種臭雞蛋氣味的氣體”,H2S不僅有毒性作用,它還廣泛參與機體多種生理和病理過程,因此被認(rèn)為是繼一氧化氮(nitric oxide,NO)、與一氧化碳(carbon monoxide, CO)后的第三類氣體信號分子。H2S不僅在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮重要的生理作用,而且還作為一種內(nèi)源性的抗氧化劑,在氧化應(yīng)激時能夠清除羥自由基等活性氧簇,對神經(jīng)細(xì)胞起保護作用。本實驗以VD大鼠模型為研究對象,觀察大腦缺血再灌注不同時間對大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的損傷程度、血清中H2S含量的改變及海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率及凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)情況,從行為學(xué)、細(xì)胞凋亡及內(nèi)源性H2S表達(dá)量及其相互關(guān)系等方面,探討VD的發(fā)病機制,進一步認(rèn)識H2S這個新的氣體信號分子的作用,為VD的防治提供理論依據(jù)。 方法:選用純系健康雄性Wistar大鼠64只,將動物隨機分為8組,正常組(Normal group),假手術(shù)組(Sham-operated group)和VD模型組(VD group),VD模型組又分為大腦缺血再灌注2小時組(IR 2h group),大腦缺血再灌注8小時組(IR 8h group),大腦缺血再灌注24小時組(IR 24h group),大腦缺血再灌注72小時組(IR 72h group),大腦缺血再灌注168小時組(IR 168h group)和大腦缺血再灌注720小時組(IR 720h group),每組8只動物,采用四血管阻斷法(4-VO)制作VD大鼠模型,假手術(shù)組麻醉及手術(shù)過程與VD模型組相同,但不電凝雙側(cè)椎動脈,不阻斷雙側(cè)頸總動脈。采用Morris水迷宮法測試各組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,以逃避潛伏期為觀測指標(biāo);制作大腦HE切片,采用光鏡觀察各組大鼠海馬CA1區(qū)的形態(tài)學(xué)變化;采用免疫組織化學(xué)染色法檢測凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2及Bax的表達(dá)情況,采用Motic 6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng)測量海馬CA1區(qū)陽性目標(biāo)平均光密度,進行統(tǒng)計分析;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測海馬神經(jīng)細(xì)胞的凋亡率;采用亞甲藍(lán)比色法檢測血清中H2S的含量,實驗數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果:⑴行為學(xué):隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加,各組大鼠的逃避潛伏期均縮短,第二天各組大鼠的逃避潛伏期開始出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異,IR 720h組與正常組和假手術(shù)組比較逃避潛伏期明顯延長(P0.01);正常組和假手術(shù)組逃避潛伏期差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。⑵形態(tài)學(xué)改變:假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞完整,結(jié)構(gòu)正常,胞漿豐富;細(xì)胞核呈圓形、橢圓形,無固縮或溶解現(xiàn)象;染色質(zhì)在核內(nèi)分布較均勻,間質(zhì)無水腫表現(xiàn)。VD模型組大鼠海馬CA1區(qū)可見大量神經(jīng)元變性,體積變小,胞核與胞漿界限不清,核固縮成三角形或不規(guī)則形,而且隨缺血再灌注時間的延長,變性神經(jīng)元數(shù)目越多。⑶細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá):VD模型組缺血再灌注2小時后Bcl-2蛋白平均光密度值開始明顯上調(diào),缺血再灌注8小時達(dá)到高峰,之后開始下降,但I(xiàn)R 24h組仍高于假手術(shù)組(P0.05);缺血再灌注早期Bax在海馬CA1區(qū)的表達(dá)明顯增強,隨著再灌注時間的延長,其表達(dá)量不斷增加,IR 72~168h達(dá)高峰(P0.05);隨缺血再灌注時間的延長,Bcl-2/Bax的比率逐漸降低。⑷海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率:VD模型組與假手術(shù)組比較,海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率均增加(P0.01);VD模型組各組海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率各不相同(P0.01);隨著缺血再灌注時間的延長,大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率逐漸增高,海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率呈現(xiàn)對數(shù)曲線上升趨勢。⑸血清H2S含量: VD模型組與假手術(shù)組和正常組比較,血清中H2S含量減少(P0.01);VD模型各組間血清H2S含量差異有顯著性(P0.01);隨著缺血再灌注時間的延長,大鼠血清H2S含量逐漸降低,血清H2S含量呈現(xiàn)直線降低趨勢。⑹血清H2S含量與海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率相關(guān)分析:隨著血清H2S含量的降低,海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率逐漸升高,兩者呈現(xiàn)明顯的負(fù)相關(guān),回歸方程為:y =-0.135x + 12.068,相關(guān)系數(shù)r=-0.861(P0.01),提示內(nèi)源性H2S可能對海馬神經(jīng)細(xì)胞具有保護作用。 結(jié)論:腦缺血再灌注損傷可導(dǎo)致VD大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的減退,海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡程度增強和血清中H2S含量減少;血清H2S含量與海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率呈負(fù)相關(guān),海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡程度可能與內(nèi)源性H2S生成減少有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R749.16

【引證文獻(xiàn)】

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1 張崗;參龍健腦膠囊對慢性腦缺血大鼠學(xué)習(xí)記憶能力保護作用的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2011年

本文編號：2713723