【摘要】：研究目的:抑郁癥是一種以持續(xù)的心境低落為主要特征的神經(jīng)障礙型疾病,是嚴(yán)重危害人類健康的神經(jīng)、精神類疾病之一。抑郁癥的發(fā)病受心理、遺傳、生物學(xué)、社會(huì)等多重因素的影響。最近研究發(fā)現(xiàn)機(jī)體受到持續(xù)的應(yīng)激刺激而誘發(fā)抑郁行為表現(xiàn)時(shí),通常伴隨特定腦區(qū)內(nèi)神經(jīng)炎癥的發(fā)生,但神經(jīng)炎癥反應(yīng)在抑郁癥發(fā)病中的機(jī)制,目前尚不明確。因此,本課題擬構(gòu)建慢性不可預(yù)知性溫和應(yīng)激刺激(Chronic Unpredicted Mild Stress,CUMS)誘導(dǎo)的抑郁癥大鼠模型,采用行為學(xué)、分子生物學(xué)和形態(tài)學(xué)等多種實(shí)驗(yàn)方法,研究海馬CA1區(qū)ββCaMKII是否通過(guò)調(diào)控COX2-PGE2信號(hào)通路參與神經(jīng)炎癥反應(yīng),并探討其在抑郁癥發(fā)病中的作用和機(jī)制。研究方法:(1)將雄性Wistar大鼠(140g-160g)隨機(jī)分為空白對(duì)照組、CUMS組、COX-2抑制劑塞來(lái)昔布預(yù)處理組(Celecoxib+CUMS,20mg/kg)、抗抑郁藥氟西汀預(yù)處理組(Fluoxetine+CUMS,40mg/kg)。除空白對(duì)照組外,其余三組均給予為期5周的慢性不可預(yù)知性溫和應(yīng)激刺激。每次在刺激前30分鐘給予藥物預(yù)處理組大鼠分別腹腔注射Celecoxib或Fluoxetine。建模完成后進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和糖水偏好實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)測(cè)試。(2)Western Blot技術(shù)檢測(cè)COX-2、ββCaMKII的表達(dá)及βCaMKⅡ蛋白的磷酸化水平;ELISA技術(shù)檢測(cè)PGE2的含量變化;激光共聚焦檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量及形態(tài)變化。(3)Western Blot技術(shù)檢測(cè)Nrf-2、HO-1的表達(dá);利用試劑盒檢測(cè)SOD、CAT、T-AOC酶活性,使用MDA、NO試劑盒檢測(cè)產(chǎn)物含量變化,LDH試劑盒測(cè)定酶含量變化;激光共聚焦觀察DHE、4-HNE和8-OHdG的表達(dá),以檢測(cè)ROS水平和DNA氧化損傷的變化。(4)構(gòu)建過(guò)表達(dá)或敲減βCaMKⅡ的AAV腺相關(guān)病毒,靶向海馬CA1區(qū)進(jìn)行立體定位注射,將大鼠分成以下幾組:(a)Wild type(WT);(b)CUMS;(c)CUMS+AAV-Control;(d)CUMS+AAV-βCaMKⅡ RNAi;(e)WT+AAV-control;(f)WT+AAV-ββCaMKII。病毒感染2周后進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和糖水偏好實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)測(cè)試;Western Blot技術(shù)檢測(cè)p38、p-p38、p-CREB、p-ATF2、COX-2等和關(guān)蛋白的表達(dá);qPCR技術(shù)檢測(cè)COX-2的mRNA水平的表達(dá);ELISA技術(shù)檢測(cè)PGE2的含量變化。(5)將Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為:(a)空白對(duì)照組;(b)CUMS組;(c)p38 阻斷劑(SB203580)預(yù)處理組(SB203580+CUMS,1Oug/kg);(d)溶劑對(duì)照組(DMSO+CUMS,1%)。每次應(yīng)激刺激前30分鐘給予大鼠側(cè)腦室注射SB203580或者1%DMSO,5周后進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和糖水偏好實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)測(cè)試。采用Western Blot、qPCR等技術(shù)檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)的變化。研究結(jié)果:(1)行為學(xué)測(cè)試結(jié)果顯示:與空白對(duì)照組相比,CUMS組大鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中靜止不動(dòng)的時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P0.05),在糖水偏好實(shí)驗(yàn)中糖水消耗百分比明顯減少(P0.05),提示大鼠產(chǎn)生行為絕望和快感缺失等抑郁樣行為。(2)與空白對(duì)照組相比,CUMS組大鼠海馬CA1區(qū)COX-2表達(dá)增加,βCaMKII磷酸化水平升高,PGE2含量增高;激光共聚焦結(jié)果顯示小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多,呈激活狀態(tài),且IL-1 β、TNF-α、IFN-γ等炎癥因子表達(dá)增加;而Celecoxib可有效抑制神經(jīng)炎癥的發(fā)生,并顯著改善大鼠的抑郁樣行為。(3)與空白對(duì)照組相比,Western Blot結(jié)果顯示:CUMS組Nrf-2、HO-1表達(dá)量減少,SOD、CAT、T-AOC酶活性降低,同時(shí),MDA和NO生成增加、LDH酶含量升高;激光共聚焦檢測(cè)結(jié)果顯示DHE、4-HNE高表達(dá),ROS水平顯著增加,8-OHdG標(biāo)記細(xì)胞核內(nèi)DNA損傷程度增加,提示抑郁樣大鼠海馬CA1區(qū)氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)。(4)在正常對(duì)照大鼠海馬CA1區(qū)注射AAV-βCaMKⅡ過(guò)表達(dá)序列后,Western Blot結(jié)果顯示:與空白對(duì)照組相比,過(guò)表達(dá)βCaMKⅡ后,p38、p-p38、p-CREB、p-ATF2、COX-2表達(dá)量均升高。(5)在抑郁癥大鼠海馬CA1區(qū)注射AAV-βCaMKⅡ-RNAi后,與CUMS組相比,p-P38、p-CREB、p-ATF2、COX-2等相關(guān)蛋白表達(dá)量均降低。(6)與CUMS組相比,給予大鼠SB203580預(yù)處理,可顯著降低p-CREB、p-ATF2、COX-2等相關(guān)蛋白的表達(dá),并明顯抑制大鼠抑郁樣行為的發(fā)生。結(jié)論:(1)CUMS能夠有效誘導(dǎo)大鼠抑郁樣行為的發(fā)生,并伴隨著大鼠海馬CA1區(qū)βCaMKⅡ的表達(dá)量升高。(2)βCaMKⅡ通過(guò)調(diào)控p38-COX2-PGE2信號(hào)通路介導(dǎo)慢性應(yīng)激刺激導(dǎo)致的神經(jīng)炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng),從而介導(dǎo)抑郁癥狀的發(fā)生。 【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R749.4

【圖文】：

圖１．慢性不可預(yù)知性溫和刺激（ＣＵＭＳ）模型建立流程圖

山東大學(xué)碩士學(xué)位論文Ａ邐２０逡逑Ａ邐＊邐ｐＨ逡逑邐ｆｈ邐ｆｔ逡逑ＣＯＸ－２邋？■？邋－＊？邋ｍｍ邋莩逡逑＾邐ｌ？－邐ｒ－ｎ｜邐ｎ｜逡逑一如邐■邐■逡逑。、戶邋ｕ邐—逡逑Ｒ邐Ｃ逡逑Ｄ邐ＣＯＸ－２邐ＰＧＥ２逡逑２Ｊ邐２－０邋Ｉ邋＊邐＃邐＊＊邐＊逡逑

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1 宋歌;呂月濤;狄林林;宗文納;陳伯旺;;早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)對(duì)重癥肺炎大鼠免疫功能的影響分析[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2017年01期

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本文編號(hào)：2712479