【摘要】： 老年性癡呆是一種慢性進(jìn)行性精神衰退性疾病,臨床表現(xiàn)以癡呆癥狀最為突出,病理改變以大腦的萎縮和變性為主。臨床上主要包括阿爾茨海默型癡呆(Alzheimer's Disease,AD)、腦血管性癡呆(VascularDementia,VD)和其他混合癡呆等,是世界范圍內(nèi)嚴(yán)重影響老年人健康的常見病、多發(fā)病。以往認(rèn)為歐美國家人群中的癡呆患者以AD為主,亞洲國家則以VD為主。我國幾個城市普查60歲以上老年人中,VD為人口的324/10萬,AD為328/10萬。1990年張明遠(yuǎn)等與美國幾家科研單位合作流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),上海在55歲以上癡呆患者中,AD占64.7%,VD占26.8%。說明在我國至少在某些地區(qū)AD在癡呆患者中占主要地位。而AD防治的最大障礙是病因未明。 AD在65歲以上的老年人有11%、80歲以上有50%會出現(xiàn)病癥。其主要特征為智力的損傷,包括學(xué)習(xí)記憶、語言、讀寫、行為,以及對周圍環(huán)境的識別,最終可導(dǎo)致死亡。其病理改變?yōu)閺浡阅X萎縮,以顳葉前、中部及海馬、頂葉及前額葉區(qū)的萎縮最明顯,腦室擴(kuò)大,腦回變窄、腦溝加寬、腦裂加大;顯微鏡下可見神經(jīng)原纖維纏結(jié)(NFT),老年斑(SPs)和顆�？张葑冃员冉】道夏耆嗣黠@增多。多年來對AD的病因做了大量的研究,但迄今為止,病因仍不明,確切的致病因素并未找到。因為病因極其復(fù)雜,有患者自身的生物學(xué)因素,也有多種環(huán)境與社會因素的影響。 在AD發(fā)病機(jī)制的眾多假說中,炎癥機(jī)制假說占有重要的地位,大量的研究證明在AD發(fā)生過程中腦內(nèi)有大量的炎性因子,如白介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)、白介素-6(IL-6)、轉(zhuǎn)化生長因子β(Transforming Growth factorβ,TGF-β)、環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)、補(bǔ)體及急性期反應(yīng)蛋白的分泌。這些炎性因子通過一系列的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,如NF-κB、絲裂原激活蛋白激酶((mitogen-αctivated proteinkinase,MAPK)途徑激活神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞(microglia,MG)和星形細(xì)胞(astrocyte,AC),使之釋放更多的炎性因子,同時它們又共同參與了腦局部炎癥過程,與淀粉樣蛋白(βamyloid,Aβ)和Tau蛋白的沉積緊密相關(guān),這些研究確定了局部炎癥在AD的病理生理過程中發(fā)揮了重要作用,甚至有的作者將炎癥同SP和NFT共同并列為AD的3大主要特征。 韓德五教授于1995年首次提出的肝功能衰竭發(fā)生機(jī)制的腸源性內(nèi)毒素血癥(Intestinalendotoxemia,IETM)假說認(rèn)為腸源性內(nèi)毒素激活枯否細(xì)胞所分泌的多種活性物質(zhì)(如細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)、自由基等)可引起“繼發(fā)性肝損傷”,是導(dǎo)致多種急慢性肝病演化為肝功能衰竭發(fā)生的重要機(jī)制之一。大量的實驗及臨床研究證明,不但肝臟疾患伴有IETM,燙傷、燒傷、創(chuàng)傷、出血性休克、急性胰腺炎等多種疾病也伴有IETM。 在IETM中發(fā)揮核心作用的內(nèi)毒素是革蘭氏陰性桿菌細(xì)胞壁外膜表層構(gòu)成成份,是脂多糖(LPS)與蛋白的復(fù)合體,是體內(nèi)巨噬細(xì)胞最敏感的激活劑。正常腸道中含有大量的細(xì)菌和內(nèi)毒素,生理狀態(tài)下由于腸粘膜屏障的保護(hù)作用,腸腔中存在的內(nèi)毒素只有極少量進(jìn)入外周循環(huán),對機(jī)體維持一定的免疫力可能有意義;同時肝臟的枯否細(xì)胞也會吞噬清除血液中過多的內(nèi)毒素,防止IETM的發(fā)生。但是,當(dāng)機(jī)體受到嚴(yán)重創(chuàng)傷(包括手術(shù))、燒傷、放化療和長期傳統(tǒng)的腸外營養(yǎng)時,腸粘膜有可能發(fā)生通透性增高;或枯否細(xì)胞吞噬活性嚴(yán)重下降,對血漿中內(nèi)毒素清除能力下降時,就有可能導(dǎo)致細(xì)菌及內(nèi)毒素移位,引起內(nèi)源性感染,甚至多臟器功能衰竭(MOF)。 內(nèi)毒素是到目前為止已知的誘導(dǎo)IL-1、TNF-α等最重要的因子,可以充分激活巨噬細(xì)胞,釋放大量炎癥因子,激活細(xì)胞因子級聯(lián)反應(yīng): 1、枯否細(xì)胞活化后可生成和釋放TNF-α、IL-1、IL-6、血小板激活因子(platelet-activatedfactor,PAF)、PGs等細(xì)胞因之的分泌,損傷肝細(xì)胞;枯否細(xì)胞活化后所釋放的白三烯,特別是LT-B_4具有強(qiáng)烈的化學(xué)趨化作用,吸引并激活中性粒細(xì)胞,產(chǎn)生并釋放自由基,使細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化而損傷細(xì)胞。 2、枯否細(xì)胞活化后生成和釋放的活性氧中間產(chǎn)物(ROI)可引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng),損傷生物膜系統(tǒng)、核酸和蛋白質(zhì)導(dǎo)致肝細(xì)胞死亡。 3、枯否細(xì)胞與肝竇內(nèi)皮細(xì)胞是花生四烯酸特別是PGD_2、PGE_2及血栓素的重要來源,可經(jīng)對應(yīng)的受體作用于肝細(xì)胞,引起蛋白磷酸化及膜穩(wěn)定性變化。 通過以上機(jī)制,IETM會導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合癥(SIRS)、多器官功能不全(MOD),甚至多器官功能衰竭(MOF)。 綜上所述,IETM會導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生嚴(yán)重的SIRS,而局部炎癥在AD的病理生理過程中發(fā)揮了重要作用。那么同樣高發(fā)于老年人的IETM與AD二者之間有何聯(lián)系?IETM會不會是AD發(fā)病的一個危險因素?IETM在AD發(fā)病過程中有何作用?目前尚未見到相關(guān)報道,為此,我們設(shè)計了本次課題研究研究計劃。 本研究由以下三個部分組成: 第一部分D-半乳糖和三氯化鋁建立的AD大鼠模型的研究 實驗?zāi)康募氨尘?關(guān)于AD的發(fā)病機(jī)制目前有膽堿能學(xué)說、基因突變和多態(tài)性學(xué)說、自身免疫學(xué)說、能量代謝障礙學(xué)說等。目前,依據(jù)各種學(xué)說已建立了多種AD動物模型,但每種模型均有一定的局限性,不能全面模擬AD的病理特征。為了建立一種準(zhǔn)確可靠的AD模型,我們進(jìn)行了本次實驗,以期為AD研究提供一種新的大鼠模型。 大量研究表明,鋁元素具有劑量與作用時間依賴性的誘導(dǎo)動物腦內(nèi)發(fā)生病理變化,具有明顯的神經(jīng)毒作用,可引起明顯的學(xué)習(xí)及記憶減退。D-半乳糖能較好的模擬小鼠的衰老表現(xiàn),使小鼠機(jī)體出現(xiàn)與自然衰老相似的代謝紊亂特征,還引起腦神經(jīng)元的一系列退行性改變,但腹腔注射D-半乳糖和AlCl_3制備阿爾茨海默病大鼠模型的報道還未見到。 實驗方法 1、AD模型制備:模型組腹腔注射D-半乳糖60mg·kg~(-1)·d~(-1)(生理鹽水配制,60g/L,給藥量0.2ml/200g)和AlCl_3 25mg·kg~(-1)·d~(-1)(雙蒸水配制,25g/L,給藥量0.2ml/200g),連續(xù)90天;空白對照組腹腔注射等量的生理鹽水和等量的雙蒸水。 2、Morris水迷宮行為學(xué)實驗 2.1定位航行實驗水池分為N、E、S、W 4個象限。實驗前1d將大鼠放入水池(不含平臺)自由游泳2 min熟悉水迷宮環(huán)境,試驗歷時5d,每天分上午(n-1),下午(n-2)兩個時間段,每段分別訓(xùn)練4次。訓(xùn)練開始時將平臺置于SW象限,每個時間段分別從池壁4個起始點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水池,記錄每次找到平臺的時間(逃避潛伏期,escape latency)和游泳路徑。如大鼠在120s內(nèi)找不到平臺,由實驗者將其引上平臺,潛伏期記為120s,并記錄為1次尋找站臺錯誤,每次間隔4min讓大鼠休息,再行下次試驗。 2.2空間探索實驗在第5天下午第5次訓(xùn)練時拆除水下平臺,然后任選一個入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中,測其120s內(nèi)在各象限的游泳距離及占總距離的百分率和120 s內(nèi)跨越各象限平臺相應(yīng)位置次數(shù)及占總次數(shù)的百分率,并記錄大鼠120s內(nèi)搜索平臺的路線圖。 3、大鼠腦組織總蛋白(TP)、組織過氧化物酶(POD)、總抗氧化能力(T-AOC)、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)、膽堿酯酶(ChE)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)測定:取各組大鼠腦組織,分析天平稱濕重,按腦組織:生理鹽水0.2g:1.8ml比例制成10%腦組織勻漿,3000r/min,離心15min,取上清液,凍存待測。TP、POD、T-AOC、ChAT、ChE、NOS、NO試劑盒由南京建成生物制品有限公司提供,嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行操作。 4、大鼠腦組織Tau蛋白濃度檢測:雙抗體夾心式酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。 5、大鼠腦組織凋亡測定:TUNEL法與流式細(xì)胞儀檢測。 6、大鼠腦組織電鏡觀察:大鼠腦組織切成1mm~3大小的組織塊,經(jīng)2%二甲砷酸鈉緩沖戊二醛和1%鋨酸雙固定,丙酮脫水,包埋,制成超薄切片,在JEM 100CX型透射電鏡下觀察腦組織的改變。 7、大鼠腦組織Aβ1-40檢測:免疫組織化學(xué)法。 8、大鼠腦組織APP、PS1和BACE mRNA檢測:兩步法半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測。 實驗結(jié)果 本部分實驗通過給大鼠腹腔注射D-半乳糖和AlCl_3,不但復(fù)制出大鼠整體衰老過程、學(xué)習(xí)記憶力減退、腦組織ChAT活性降低、ChE活性升高所致乙酰膽堿能系統(tǒng)活性降低,腦組織抗氧化能力降低及NO系統(tǒng)活性增高等AD特征性的變化。同時,AD大鼠腦組織內(nèi)APP、PS1、BACE mRNA表達(dá)增強(qiáng)、出現(xiàn)Aβ沉積、Tau蛋白含量增高、腦細(xì)胞凋亡、老年斑等AD的特征性病理變化。 實驗結(jié)論 腹腔注射D-半乳糖和AlCl_3可以成功制備阿爾茨海默病模型,為AD的研究提供了一種新的大鼠模型。 第二部分IETM在AD模型發(fā)病中相關(guān)機(jī)制研究 實驗?zāi)康募氨尘?IETM假說是韓德五教授于1995年首次提出的肝功能衰竭發(fā)生的機(jī)制。在IETM中發(fā)揮核心作用的內(nèi)毒素可以激活枯否細(xì)胞分泌多種活性物質(zhì)(如細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)、自由基等),可引起“繼發(fā)性肝損傷”,甚至?xí)䦟?dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合癥(SIRS)、多器官功能不全(MOD),甚至多器官功能衰竭(MOF)的發(fā)生。大量的實驗及臨床研究證明,在燙傷、燒傷、創(chuàng)傷、出血性休克、急性胰腺炎等多種疾病也有IETM的發(fā)生。Goto等的研究表明337名72歲的老年人中有21.5%的老年人血漿內(nèi)毒素水平高于正常,可見即使在正常人,IETM水平也隨著年齡增長在逐漸升高。 炎癥機(jī)制假說在AD發(fā)病機(jī)制的眾多假說中占有重要的地位,大量的研究證明在AD發(fā)生過程中腦內(nèi)有大量的炎性因子,如TNF-α、IL-1、IL-6、TGF-β、COX-2、補(bǔ)體及急性期反應(yīng)蛋白的分泌。這些炎性因子通過一系列的信號轉(zhuǎn)道途徑,如NF-KB、MAPK途徑激活神經(jīng)MG和AC,使之釋放更多的炎性因子,同時它們又共同參與了腦局部炎癥過程,與Aβ和Tau蛋白的沉積緊密相關(guān),這些研究確定了局部炎癥在AD的病理生理過程中發(fā)揮了重要作用。 在我們所制備的AD模型體內(nèi)是否也出現(xiàn)了IETM?如果是,IETM與AD二者之間有無內(nèi)在的聯(lián)系?IETM是否參與了AD的發(fā)病過程?IETM會不會是AD發(fā)病的一個危險因素?目前尚未見相關(guān)報道,為此我們進(jìn)行了第二部分實驗。 實驗方法 1、血漿LPS、TNF-α、IL-1β及IL-10測定:采用改良過氯酸法檢測血漿LPS含量,鱟試劑盒由上海醫(yī)學(xué)化驗所提供;放射免疫分析法測定血漿中TNF-α、IL-1β及IL-10含量,試劑盒由解放軍總醫(yī)院東亞免疫研究所提供。 2、大鼠肝臟枯否細(xì)胞功能狀態(tài)檢測:免疫組織化學(xué)SABC染色法檢測肝組織溶菌酶LYZ陽性細(xì)胞-KC的數(shù)量和形態(tài)。 3、二胺氧化酶(Diamine oxidase,DAO)、谷氨酰胺(Glutamine,Gln)及谷氨酰胺酶(Glutaminase)活性檢測:DAO采用黎君友等分光光度計法,谷氨酰胺采用酚一次氯酸法檢測,谷氨酰胺酶活性采用熒光法測定。 4、腸粘膜常規(guī)HE染色,光鏡下觀察粘膜結(jié)構(gòu)變化。 5、大鼠血清S-100β測定:雙抗體夾心式酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),試劑盒購自上海森雄生物科技有限公司。 6、大鼠腦組織ZO-1蛋白檢測:免疫印跡法(Western blot)。 實驗結(jié)果 腹腔注射D-半乳糖和AlCl_3制備的AD模型大鼠血漿中LPS、TNF-α、IL-1β及IL-10含量均明顯升高,與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01);肝組織KC數(shù)量減少,吞噬LPS功能減弱;腸粘膜及血腦屏障通透性均明顯升高,屏障功能明顯下降。 實驗結(jié)論 腹腔注射D-半乳糖和AlCl_3制備的AD模型大鼠KC吞噬功能、腸粘膜屏障及血腦屏障功能均明顯下降,血漿中LPS及TNF-α、IL-1β等炎癥因子含量增高,AD大鼠體內(nèi)出現(xiàn)了IETM。 第三部分LPS激活BV-2細(xì)胞及其分子機(jī)制的研究 研究目的及背景 腦內(nèi)炎癥在AD、帕金森病等慢性神經(jīng)變性疾病發(fā)病機(jī)理上發(fā)揮著重要作用。作為腦內(nèi)固有免疫細(xì)胞的MG在AD發(fā)病中的急性與慢性神經(jīng)炎癥過程中均擔(dān)當(dāng)了重要的角色。 MG被激活后產(chǎn)生釋放大量的前體炎癥因子,可以產(chǎn)生細(xì)胞毒性因子(蛋白水解酶、細(xì)胞因子、興奮性氨基酸、毗啶、2,3-二羧酸、補(bǔ)體蛋白、活性氧媒介物、一氧化氮等),Seabrook等的實驗證明腦內(nèi)炎癥和MG有著密切關(guān)系,LPS誘導(dǎo)MG激活產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1、IL-6,其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有PTK途徑、磷酸脂酶A_2(PLA_2)途徑,還與細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、CREB等的活化有關(guān)。 有研究表明,Aβ在AD發(fā)病中的毒性作用機(jī)制可能與其擾亂細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)、產(chǎn)生活性氧和自由基、增加興奮性毒性等作用有關(guān)。 我們通過體外培養(yǎng)BV-2細(xì)胞來研究在IETM中發(fā)揮核心致病作用的LPS對MG的激活作用、MG激活后釋放的炎癥因子在AD發(fā)病中的作用及其具體機(jī)制,從而進(jìn)一步揭示IETM在AD發(fā)病中的作用及其機(jī)制。 實驗方法 1、BV-2細(xì)胞培養(yǎng):BV-2細(xì)胞株購自中國醫(yī)科院協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心。含體積分?jǐn)?shù)為0.1的胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基加青霉素100u/ml、鏈霉素100u/ml,置37℃、體積分?jǐn)?shù)為0.05的CO_2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),每隔1d換1次培養(yǎng)液,三四天傳代1次。每次實驗前細(xì)胞在含有10g/L牛血清白蛋白的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h后使細(xì)胞處于同步化狀態(tài)。 2、BV-2細(xì)胞分組:BV-2(陰性對照組);BV-2+Aβ:30min、1h、3h、6h、12h、24h組;BV-2+LPS:30min、1h、3h、6h、12h、24h組。分別加入含有LPS(100ng/ml)、Aβ(20μg/ml)的培養(yǎng)基,培養(yǎng)30min、1h、3h、6h、12h、24h后,進(jìn)行以下實驗項目,每個處理組每個時間點(diǎn)觀察6片。 3、BV-2細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察:取對數(shù)生長期BV-2細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中(密度為2×10~5/孔),每組設(shè)3個平行孔,倒置顯微鏡下觀察BV-2細(xì)胞形態(tài),拍照。 4、BV-2細(xì)胞吞噬功能定量測定:參考Hirose的方法進(jìn)行,細(xì)胞培養(yǎng)皿(10~4個細(xì)胞/片/皿)中加入聚苯乙烯乳珠0.5×10~8個,培養(yǎng)30min、1h、3h、6h、12h、24h后,PBS洗三次,洗去未被吞噬聚苯乙烯乳珠,直接倒置顯微鏡下對細(xì)胞所吞噬聚苯乙烯乳珠進(jìn)行計數(shù),觀察,照像。每皿任取5個視野,每個視野隨機(jī)數(shù)20個BV-2進(jìn)行計數(shù),取細(xì)胞吞噬聚苯乙烯乳珠數(shù)的平均值代表該皿細(xì)胞的吞噬功能。 5、BV-2細(xì)胞OX-42檢測:免疫熒光法。Aβ1-40與LPS分別作用30min、1h、3h、6h、12h、24h后終止細(xì)胞培養(yǎng),PBS清洗3次,丙酮室溫固定,3%過氧化氫-甲醇室溫下10min,正常山羊封閉血清,室溫下孵育20min,滴加一抗5μl(小鼠抗大鼠OX-421:100),濕盒內(nèi)37℃孵育2h,二抗(FITC),室溫1h,倒置顯微鏡觀察拍照。每皿任取5個視野,取每個視野OX-42陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)及熒光強(qiáng)度代表該皿細(xì)胞的活性。 6、BV-2細(xì)胞培養(yǎng)上清液TNF-α、IL-1β測定:雙抗體夾心式酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。 7、BV-2細(xì)胞凋亡檢測:各組細(xì)胞用PBS制成細(xì)胞懸液,不低于1×10~6個細(xì)胞/管,20%冰乙醇固定,輕輕混勻,PBS洗1次,重懸于500μlPBS后流式細(xì)胞儀檢測。 8、BV-2細(xì)胞p38、JNK、NF-κB蛋白表達(dá)水平檢測:免疫印跡法(Western blot)。 9、BV-2細(xì)胞[Ca~(2+)]i變化檢測:按實驗要求培養(yǎng)的BV-2,加入終濃度為10μmol/L的Fluo-3/AM,37℃負(fù)載40min,置于MRC-1024型共聚焦顯微鏡下,488nm激發(fā)波長,522nm發(fā)射波長掃描。細(xì)胞游離[Ca~(2+)]i動態(tài)測定:選定待測BV-2細(xì)胞后,先預(yù)掃4min獲得基線值,繼續(xù)掃描至4min時分別各自快速加入LPS 100ng/ml和Aβ1-40 20μg/ml觀察熒光值的變化,用隨機(jī)附帶的Time-course/Rationmetric軟件給出加藥前后神經(jīng)元內(nèi)熒光值隨時間變化的曲線。每皿取5個視野,每個視野隨機(jī)選取10個BV-2細(xì)胞進(jìn)行熒光值統(tǒng)計。熒光值強(qiáng)度代表[Ca~(2+)]i的濃度。 實驗結(jié)果 Aβ1-40與LPS均可以激活BV-2細(xì)胞,使其形態(tài)發(fā)生明顯變化,吞噬能力增強(qiáng),OX-42表達(dá)增強(qiáng),TNF-α、IL-1β分泌增多,凋亡率較對照組明顯升高(P＜0.01),p-p38、p-JNK及NF-κB表達(dá)水平均明顯高于對照組,[Ca~(2+)]i明顯升高。 實驗結(jié)論 LPS可以通過p38、JNK、NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路迅速激活BV-2細(xì)胞,提高其吞噬能力,促進(jìn)其分泌炎癥因子;而且,LPS對BV-2細(xì)胞還有促凋亡作用,并可以使BV-2細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)失衡,發(fā)生鈣超載。 LPS對BV-2的這種激活作用與Aβ1-40相似,可見LPS在AD的發(fā)病中發(fā)揮了與Aβ1-40類似的致病作用。 通過以上三部分研究,我們可以得出以下結(jié)論: 1、腹腔注射D-半乳糖和AlCl_3可以成功制備AD大鼠模型。 2、AD模型大鼠血漿中LPS及炎癥因子水平升高,枯否細(xì)胞吞噬能力、腸粘膜屏障功能及血腦屏障功能均明顯下降,體內(nèi)有IETM的發(fā)生。 3、LPS可以通過p38、JNK、NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活BV-2細(xì)胞,釋放炎癥因子;促進(jìn)BV-2細(xì)胞凋亡;使BV-2細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)失衡,發(fā)生鈣超載。從而從多個角度導(dǎo)致AD的發(fā)病。 綜上所述,IETM是AD發(fā)生發(fā)展的重要影響因子之一。
【圖文】：

山西醫(yī)科人學(xué)博卜學(xué)位淪義圖3一1各組腦組織細(xì)胞凋亡(A:對照組;B:模型組)2、Tt!NEL檢測大鼠腦組織細(xì)胞凋亡:如圖3一2所示，模型組則有大量的深褐色凋亡細(xì)胞表達(dá)，較對照組明顯增多。薩奄力福.砂心尹BA尹咖飛。絡(luò)戶.戶"診再.蘿�！�，滬圖3一 2TtJNEL檢測人鼠腦組織細(xì)胞凋亡(A:對照織妙:B:模西J組)(“100)3、Tl〕NEL陽性細(xì)胞計數(shù):如表3一2所示，AD模型組大鼠腦組織Tt囚EL陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)明顯多于對照組(P<0.05)。表3一2大鼠腦組織刊NEL陽性表達(dá)細(xì)胞計數(shù)(又士s)分組對照織模型組TuNEL陽性細(xì)胞計數(shù)10.2土 3.631.2士6.5‘，P<0.05vs對照組4、透射電鏡觀察:神經(jīng)元有輕微腫脹、空泡形成(圖3一3);線粒體膜腫脹，膜破損，，靖減少且排列紊亂，基質(zhì)變淺(圖3一4);腦細(xì)胞核染色質(zhì)濃縮

山西醫(yī)科人學(xué)博卜學(xué)位淪義圖3一1各組腦組織細(xì)胞凋亡(A:對照組;B:模型組)2、Tt!NEL檢測大鼠腦組織細(xì)胞凋亡:如圖3一2所示，模型組則有大量的深褐色凋亡細(xì)胞表達(dá)，較對照組明顯增多。薩奄力福.砂心尹BA尹咖飛。絡(luò)戶.戶"診再.蘿�！�，滬圖3一 2TtJNEL檢測人鼠腦組織細(xì)胞凋亡(A:對照織妙:B:模西J組)(“100)3、Tl〕NEL陽性細(xì)胞計數(shù):如表3一2所示，AD模型組大鼠腦組織Tt囚EL陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)明顯多于對照組(P<0.05)。表3一2大鼠腦組織刊NEL陽性表達(dá)細(xì)胞計數(shù)(又士s)分組對照織模型組TuNEL陽性細(xì)胞計數(shù)10.2土 3.631.2士6.5‘，P<0.05vs對照組4、透射電鏡觀察:神經(jīng)元有輕微腫脹、空泡形成(圖3一3);線粒體膜腫脹，膜破損，靖減少且排列紊亂，基質(zhì)變淺(圖3一4);腦細(xì)胞核染色質(zhì)濃縮
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R749.1

【引證文獻(xiàn)】

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1 郭燕君;;β淀粉樣蛋白(25-35)對AD大鼠海馬Beclin-1表達(dá)及學(xué)習(xí)記憶的影響[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2011年12期

本文編號：2708547