【摘要】：目的 1. 從新生大鼠海馬中分離培養(yǎng)并鑒定神經(jīng)干細(xì)胞,為神經(jīng)干細(xì)胞的體外移植作 準(zhǔn)備。 2. 制作血管性癡呆大鼠動物模型,為研究血管性癡呆的發(fā)病機(jī)理和防治建立基 礎(chǔ)。 3. 探討神經(jīng)干細(xì)胞在血管性癡呆大鼠側(cè)腦室的存活、遷移和分化,從而為神經(jīng) 干細(xì)胞的體內(nèi)存活、遷移和分化機(jī)理研究和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 1. 利用無血清培養(yǎng)和單細(xì)胞克隆技術(shù)從新生大鼠海馬分離具有單細(xì)胞克隆能力的細(xì)胞群并連續(xù)傳代培養(yǎng),獲得大量細(xì)胞,采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測巢蛋白(Nestin)和分化后特異性成熟神經(jīng)細(xì)胞抗原表達(dá)。 2. 采用永久性結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動脈法(2-VO)建立血管性癡呆大鼠動物模型,結(jié)扎后30 天,用Morris 水迷宮定位航行試驗(yàn)和空間探索試驗(yàn)來檢測大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力變化,并在光鏡下觀察大鼠海馬組織結(jié)構(gòu)的變化。 3. 采用腦立體定位技術(shù)將5-溴-2’-脫氧尿苷( BrdU)標(biāo)記的神經(jīng)干細(xì)胞移植入血管性癡呆大鼠側(cè)腦室內(nèi),飼養(yǎng)4 周后取腦,應(yīng)用免疫熒光化學(xué)技術(shù)檢測移植后細(xì)胞的存活、遷移和分化。 結(jié)果 1. 從新生大鼠海馬分離得到的細(xì)胞經(jīng)無血清培養(yǎng)后,具有連續(xù)傳代能力,能表 達(dá)巢蛋白Nestin,經(jīng)誘導(dǎo)分化后能表達(dá)神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的特異性抗原, 說明大鼠海馬內(nèi)存在神經(jīng)干細(xì)胞。
【圖文】：

驗(yàn)動物12 月齡健康 SD 大鼠 25 只（由南京軍區(qū)福州總醫(yī)院動物實(shí)驗(yàn)科提供），體重 512±93g。以 Y 型電迷宮實(shí)驗(yàn)篩選學(xué)習(xí)記憶良好的大鼠20 只 2.2.1），按照體重大小排列，由 Microsoft Excel 2003 產(chǎn)生 20 個隨機(jī)機(jī)數(shù)字按照從小到大排列編號，取編號 1－10 為假手術(shù)對照組(n=10)20 為手術(shù)組(n=10)。法 模型制作[14]用 2%戊巴比妥鈉（40mg/kg 體重）腹腔注射麻醉大鼠，仰臥位固定口，分離雙側(cè)頸總動脈剪斷加結(jié)扎（圖 1），縫合切口。假手術(shù)對照及結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈外，其余和手術(shù)組相同。兩組大鼠同條件飼養(yǎng)，進(jìn)行 Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)。

大鼠每天訓(xùn)練 20 次。記錄錯誤次數(shù)（EN）和 20 次訓(xùn)練總時間（TRT）。以 10次測試中連續(xù) 9 次出現(xiàn)正確反應(yīng)為學(xué)會標(biāo)準(zhǔn)，并以 TRT=160s 和 EN=8 次為標(biāo)準(zhǔn)，其中有一項(xiàng)超過者則認(rèn)為有學(xué)習(xí)障礙。24 小時后再檢測其記憶保持能力。2.2.2 Morris 水迷宮[15]水迷宮的水池直徑為 100cm，深 50cm，水深 45cm，水溫 26±2℃，水面覆蓋一層泡沫塑料屑，池壁 4 個等距離點(diǎn)將水池分為 4 個象限，任選一象限在其中央放置有機(jī)玻璃平臺。平臺無色透明，直徑 6cm，高 43cm，平臺沒于水面下 2cm，水池周圍參照物在實(shí)驗(yàn)過程中保持不變（圖 2）。實(shí)驗(yàn)包括：（1）定位航行實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)歷時 7 天，操作者將大鼠面向池壁從不同象限放入水中，記錄大鼠找到平臺的時間（逃避潛伏期）。如果大鼠 60s 內(nèi)找不到平臺，則由操作用小棒引導(dǎo)大鼠站上平臺（圖 3）。大鼠站立于平臺 10s 后，將大鼠從平臺上捉下，休息 30s，再按序由下一象限入水進(jìn)行下一次實(shí)驗(yàn)。（2）空間探索實(shí)驗(yàn)：在第 8 天，撤除平臺，大鼠從非平臺象限入水，，記錄 60s 內(nèi)大鼠在平臺象限的停留時間。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R749.16

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號：2703150