【摘要】： Urotortin3對(duì)大鼠焦慮樣行為及中縫背核、海馬CA3區(qū)5-HT表達(dá)的影響 前言 動(dòng)物焦慮模型的發(fā)展，為研究動(dòng)物焦慮樣行為以及應(yīng)激行為反應(yīng)的機(jī)理，提供了廣闊的空間。近幾年，有關(guān)促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)肽家族在動(dòng)物焦慮模型領(lǐng)域中的研究不斷深入。CRF肽家族包括CRF、urocortin 1(UCN 1)、urocortin 2(UCN 2)、urocortin 3(UCN 3)。UCN3是CRF肽家族的新成員，是CRF2受體的內(nèi)源性配體。目前有關(guān)UCN3在應(yīng)激反應(yīng)中作用的結(jié)論不一，其具體作用機(jī)制也不詳。本實(shí)驗(yàn)欲采用經(jīng)典動(dòng)物焦慮模型——十字架空裝置模型(elevated plusmaze test，EPM)，評(píng)估UCN3對(duì)焦慮樣行為的調(diào)節(jié)。目前有研究結(jié)果表明CRF肽家族除了與自身受體結(jié)合發(fā)揮作用外，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)5-羥色胺(5-HT)神經(jīng)遞質(zhì)也存在相互影響。本研究欲觀察UCN3在調(diào)節(jié)應(yīng)激行為反應(yīng)的同時(shí)，對(duì)中縫背核(DRN)和海馬CA3區(qū)的5-HT表達(dá)的影響。為探討UCN3、CRF2受體對(duì)應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)節(jié)以及新型抗焦慮藥物的開發(fā)提供理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)材料 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 采用Wistar雄性大鼠36只，體重190-210g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 2、主要試劑 UCN3購(gòu)于Sigma公司，兔抗鼠5-HT多克隆抗體、生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG、SABC(鏈霉素過氧化物復(fù)合物)免疫組化試劑盒、DAB顯色劑均購(gòu)于Boster公司。 3、主要實(shí)驗(yàn)儀器 立體定位儀(日本Narishigi公司)，十字架空裝置，冰凍切片機(jī)，MetaMorph／Cool Snap_(fx)／Ax70計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)。 實(shí)驗(yàn)方法 1、手術(shù)留置套管 將大鼠腹腔注射20％水合氯醛(0.2ml／100g)麻醉后，固定于立體定位儀上，切開顱骨頂部皮膚筋膜，確定側(cè)腦室位置，用牙科鉆鉆孔，將套管置于腦室內(nèi)，用牙科水泥將套管固定于顱骨上，封閉套管。術(shù)后大鼠單籠飼養(yǎng)，恢復(fù)7天。 2、動(dòng)物分組 實(shí)驗(yàn)當(dāng)日將大鼠隨機(jī)分為三組，UCN3組12只，對(duì)照組12只，空白組12只。UCN3組側(cè)腦室注射10ug／5ul UCN3，對(duì)照組和和空白組分別注射5ul生理鹽水。 3、行為學(xué)評(píng)價(jià) 側(cè)腦室注射10分鐘后，用十字架空裝置評(píng)價(jià)UCN3組和對(duì)照組的焦慮樣行為的變化。 4、檢測(cè)5-HT 在UCN3組和對(duì)照組行為學(xué)評(píng)價(jià)后2小時(shí)，空白組側(cè)腦室注射生理鹽水后2.5小時(shí)，全部大鼠經(jīng)多聚甲醛灌流固定，剝?nèi)≈心X及杏仁海馬區(qū)，制作含中縫背核、海馬的冰凍切片，采用特異性抗體的免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)中縫背核、海馬CA3中的5-HT樣陽性物質(zhì)的表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1、在EPM中焦慮樣行為的比較 與對(duì)照組相比，UCN3組大鼠在EPM中的開放臂停留時(shí)間延長(zhǎng)(t=2.45，P＜0.05)，開放臂停留時(shí)間百分比增多(t=2.75，P＜0.05)，進(jìn)入開放臂次數(shù)百分比增加(t=0.78，P＜0.05)。 2、UCN3對(duì)中縫背核、海馬CA3區(qū)5-HT表達(dá)的影響 UCN3組DRN區(qū)5-HT表達(dá)的OD值和陽性細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比顯著增加(t=2.29，P＜0.05)，(t=2.23，P＜0.05)。UCN3組海馬CA3區(qū)5-HT表達(dá)的OD值和陽性細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比顯著增加(t=4.46，P＜0.01)，(t=16.97，P＜0.01)。 3、EPM對(duì)中縫背核、海馬CA3區(qū)5-HT表達(dá)的影響 對(duì)照組與空白組比較，對(duì)照組在DRN、海馬CA3中5-HT表達(dá)的OD值和陽性細(xì)胞數(shù)有所減少但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 討論 十字架空裝置的主要原理在于嚙齒類動(dòng)物既有針對(duì)新異環(huán)境的探究心理，同時(shí)又有針對(duì)高懸和空曠環(huán)境的恐懼心理，從而營(yíng)造出令嚙齒類動(dòng)物矛盾的焦慮狀態(tài)。因此，在十字架空裝置中，對(duì)高懸而空曠的開放臂的選擇性偏好與大鼠的焦慮程度呈負(fù)相關(guān)，即進(jìn)入開放臂的時(shí)間延長(zhǎng)、次數(shù)增多提示大鼠焦慮程度降低。本研究發(fā)現(xiàn)側(cè)腦室注射10ugUCN3十分鐘后，大鼠在開放臂的停留時(shí)間延長(zhǎng)，停留時(shí)間百分比和進(jìn)入開放臂次數(shù)增多，表明大鼠焦慮程度降低，，提示UCN3具有急性抗焦慮作用。 中縫背核(DRN)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中富含的5-HT神經(jīng)元的重要核團(tuán)，也是調(diào)節(jié)應(yīng)激內(nèi)分泌和行為反應(yīng)的重要環(huán)節(jié)之一。5-HT是與精神障礙密切相關(guān)的重要神經(jīng)遞質(zhì)，中樞性5-HT活動(dòng)具有保持警覺和控制焦慮的作用。DRN的5-HT能神經(jīng)纖維從腹側(cè)上行，廣泛投射到很多腦區(qū)與核團(tuán)，其中包括海馬、杏仁核等等。杏仁核是與情緒活動(dòng)有關(guān)的重要腦區(qū)，海馬是目前在應(yīng)激領(lǐng)域研究最廣泛的腦區(qū)之一。本研究發(fā)現(xiàn)側(cè)腦室注射UCN3增強(qiáng)了DRN的5-HT表達(dá)，同時(shí)興奮DRN的5-HT神經(jīng)元，從而促進(jìn)其向海馬投射5-HT，即導(dǎo)致5-HT在海馬表達(dá)的增加。 本研究結(jié)果可進(jìn)一步提示與UCN3特異性結(jié)合的CRF2型受體的抗焦慮作用，有利于深入了解CRF肽家族及其受體在應(yīng)激反應(yīng)中的作用，為臨床研究及治療焦慮障礙、應(yīng)激所致精神障礙提供新方向。 結(jié)論 1、中樞給予UCN3后，大鼠在十字架空裝置中的開放臂停留時(shí)間延長(zhǎng)、進(jìn)入開放臂次數(shù)增多，開放臂停留時(shí)間百分比增加，提示UCN3具有抗焦慮作用。 2、側(cè)腦室注射UCN3增強(qiáng)中縫背核、海馬CA3區(qū)的5-HT的表達(dá)，提示UCN3具有興奮中縫背核5-HT能神經(jīng)纖維向海馬投射的作用。 3、中縫背核、海馬CA3區(qū)的5-HT表達(dá)的增加，可以協(xié)同促進(jìn)UCN3抗焦慮作用的效果。 4、本研究結(jié)論表明UCN3、CRF2型受體在應(yīng)激行為反應(yīng)中的抗焦慮作用，為臨床研究及治療焦慮障礙、應(yīng)激所致精神障礙提供新途徑。
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結(jié)果一、在EPM中焦慮樣行為的比較與對(duì)照組相比，UCN3組大鼠在EPM中的開放臂停留時(shí)間延長(zhǎng)(t=2.45，P<0.05)，開放臂停留時(shí)間百分比增多(t=2.75，P<0.05)，進(jìn)入開放臂次數(shù)百分比增加(t=0.78，P<0.05)。UCN3組大鼠在封閉臂區(qū)停留時(shí)間減少但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異(t=1.84，P>0.05)。(見表l、圖l一4)表1，各臂區(qū)停留時(shí)間及停留時(shí)間百分比開放臂停留時(shí)間開放臂停留時(shí)間進(jìn)入開放臂次封閉區(qū)時(shí)間(秒)百分比(秒)數(shù)百分比(%)(秒)對(duì)照組(n=12)UCN3組(n=12)36.67士13.0412.76士4.5625.69士6.79235.8士19.3096.14士20.54*37.12士7.60*28.21士6.13*182.44士20.67P(0.05加的陽力毛l牛落確布困旦弓

本文編號(hào)：2696760