【摘要】： 目的 在很多情況下,阿片類藥物尤其是嗎啡可以起到良好的鎮(zhèn)痛作用,然而也因?yàn)榀熜Р簧趵硐?或者藥物副作用、藥物耐受、依賴而影響了阿片類藥物的使用。如何提高阿片類藥物的療效并降低其副作用,成為目前臨床應(yīng)用和基礎(chǔ)研究所關(guān)注的熱點(diǎn)。我們采用小鼠嗎啡依賴模型,研究褪黑素(melatonin,MT)抗嗎啡依賴的作用,探究MT與腦內(nèi)嗎啡依賴相關(guān)核團(tuán)或腦區(qū)的褪黑素受體、嗎啡受體以及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子等的相互作用關(guān)系,闡明MT抗嗎啡依賴作用及可能機(jī)制,為MT及其同系物可能作為戒毒新藥或用于戒斷輔助治療應(yīng)用于臨床提供動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù),并加深對(duì)藥物成癮的分子神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制的認(rèn)識(shí)。 方法與材料 將實(shí)驗(yàn)小鼠分為生理鹽水(空白對(duì)照,NS)組、嗎啡(病理對(duì)照,MP)組、褪黑素(治療,MT)Ⅰ-Ⅲ組。嗎啡組小鼠采用腹腔給藥方式注射嗎啡70mg/kg體重(0.5ml),每天早晚各一次,連續(xù)7天。生理鹽水組小鼠每天早晚腹腔給藥方式注射0.5ml生理鹽水,連續(xù)7天。MT治療組小鼠采用腹腔給藥方式注射嗎啡70mg/kg體重,每天早晚各一次,連續(xù)7天;同時(shí),每天晚上在嗎啡給藥的同時(shí)腹腔注射MT 10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg體重。采用位置偏愛(ài)性實(shí)驗(yàn)觀察各組小鼠在黑箱以及白箱的停留時(shí)間以評(píng)價(jià)和確定小鼠嗎啡依賴模型的建立。記錄各組實(shí)驗(yàn)小鼠給藥前后的體重流失情況、跳躍次數(shù)、激惹情況等,從行為學(xué)方面確定MT對(duì)于小鼠嗎啡依賴形成的抑制作用。行為學(xué)的研究完成后,將實(shí)驗(yàn)小鼠處死,取腦,采用免疫組織化學(xué)、western-blotting的方法測(cè)定各組小鼠相關(guān)腦區(qū)褪黑素受體-a(MTR-a)、褪黑素受體-b(MTR-b)、嗎啡受體-μ(MP-μ)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)的表達(dá)差異。 結(jié)果 1.用條件性位置偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)(conditioned place preference,CPP)評(píng)價(jià)小鼠嗎啡依賴的形成。觀察到給藥后嗎啡依賴組小鼠在非偏愛(ài)側(cè)(白箱)停留時(shí)間較給藥前明顯延長(zhǎng),小鼠呈現(xiàn)明顯的CPP效應(yīng)。進(jìn)一步觀察小鼠在跳躍次數(shù)、激惹情況、體重流失等行為。結(jié)果顯示,給予MT的小鼠明顯優(yōu)于嗎啡組,生理鹽水組小鼠給藥前后無(wú)明顯變化。 2.組織病理學(xué)觀察,光鏡觀察可見(jiàn),嗎啡(病理對(duì)照,MP)組小鼠海馬組織、伏核、前額皮質(zhì)等可見(jiàn)不同程度的神經(jīng)元胞體核質(zhì)疏松,細(xì)胞水腫,氣球樣變,核固縮、碎裂,甚至變性壞死等。褪黑素(治療,MT)組和生理鹽水(空白對(duì)照,NS)組小鼠腦組織未見(jiàn)上述病理改變。免疫組織化學(xué)檢測(cè),海馬(hippocampus)和中腦腹側(cè)被蓋區(qū)(ventral tegmental area of midbrain,VTA)MTR-a、MTR-b、MP-μ染色陽(yáng)性細(xì)胞呈單個(gè)散在或小群細(xì)胞分布,陽(yáng)性部位主要在胞漿。MP-μ蛋白表達(dá)于嗎啡組最高,褪黑素組次之,生理鹽水組最低;MTR-a、MTR-b蛋白于褪黑素組呈高表達(dá),生理鹽水組次之,嗎啡組表達(dá)最低;與之相應(yīng),NGF、NT-3陽(yáng)性細(xì)胞在褪黑素組最高,生理鹽水組次之,以嗎啡組最低。 3.免疫印跡檢測(cè)海馬、前腦和中腦腹側(cè)區(qū)MTR-a、MTR-b、MP-μ蛋白表達(dá),結(jié)果表明:治療組MTR-a、MTR-b蛋白呈高表達(dá),嗎啡組MP-μ蛋白高表達(dá)。 討論與結(jié)論 建立穩(wěn)定可靠的小鼠嗎啡依賴模型,可以通過(guò)行為學(xué)、免疫組化、電泳免疫印跡等方法,檢測(cè)不同腦區(qū)內(nèi)褪黑素受體、嗎啡受體及神經(jīng)生長(zhǎng)因子等活性物質(zhì),證明MT對(duì)于小鼠嗎啡依賴形成具有一定的抑制作用,可能一方面通過(guò)激活神經(jīng)細(xì)胞分泌神經(jīng)生長(zhǎng)因子,另一方面可能神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)褪黑素受體拮抗嗎啡與其受體的結(jié)合,達(dá)到抑制嗎啡依賴形成和保護(hù)神經(jīng)組織的作用。
【圖文】：

給藥前明顯延長(zhǎng)，小鼠呈現(xiàn)明顯的C即效應(yīng)。進(jìn)一步觀察小鼠在跳躍次數(shù)、激惹情況、體重流失等行為。結(jié)果顯示，給予MT的小鼠明顯優(yōu)于嗎啡組，生理鹽水組小鼠給藥前后無(wú)明顯變化(圖1一3，表1)。圖1圖2

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文組小鼠腦組織未見(jiàn)上述病理改變(圖6、7)。圖4海馬，MP組，病理改變圖SVTA，，MP組，病理改變圖6海馬，NS組，無(wú)病理改變圖7VTA，NS組
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R749.6

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

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本文編號(hào)：2683242