【摘要】：阿爾茲海默癥(Alzheimer's disease,AD)的預(yù)防和治療是目前研究的一大難點。其發(fā)病機制復(fù)雜,現(xiàn)階段的研究主要以改善患者記憶力障礙為目的,從自由基損傷、膽堿能損傷、Aβ神經(jīng)毒性、tau蛋白磷酸化、神經(jīng)炎癥等方面展開。研究表明,酚類化合物能夠?qū)D的多種發(fā)病機制進行干預(yù)。香水蓮花(Nymphaeahybrid)為睡蓮科睡蓮屬水生宿根草本植物,具有多種生物學(xué)活性,并且其功效與富含酚類化合物密切相關(guān)。本文以藍色香水蓮花為原料,以乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)活性抑制率為指標,制備得到對AChE活性具有良好抑制作用的香水蓮花提取物(Nymphaea hybrid extract,NHE),并通過東莨菪堿誘導(dǎo)的記憶障礙小鼠探究其對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響以及可能的作用機制。本文研究結(jié)果如下:(1)通過體外AChE抑制實驗研究發(fā)現(xiàn),NHE對AChE的抑制作用呈劑量效應(yīng),IC50值為239.34±4.24μg/mL,抑制類型為混合型可逆抑制。采用分級萃取方式對NHE進行的初步純化具有一定效果,酚類化合物在乙酸乙酯相中得到富集,并且乙酸乙酯相的IC50值為184.62±2.52μg/mL,其作用效果優(yōu)于NHE。同時,Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),NHE及其分級相的AChE活性抑制率與總酚含量、總黃酮含量呈極顯著相關(guān)(r0.8)。(2)采用UPLC-TripleTOF-MS/MS技術(shù),首次對NHE中酚類化合物進行全面定性分析,在NHE中共鑒定出22種酚類化合物,包括7種酚酸類化合物和15種黃酮類化合物。對NHE中確定的8種酚類化合物進行定量分析,結(jié)果顯示,它們在NHE中的含量均較低,其中柯里拉京含量最高為2.63%。而NHE和乙酸乙酯相對AChE的抑制作用是多種化合物共同作用的結(jié)果,其中,沒食子酸、槲皮素、鞣花酸、楊梅素和槲皮苷對AChE活性的IC50值都低于NHE和乙酸乙酯相,推測它們是發(fā)揮作用的重要化合物。(3)采用東莨菪堿誘導(dǎo)的記憶障礙小鼠模型,Morris水迷宮實驗結(jié)果顯示,NHE可以逆轉(zhuǎn)東莨菪堿對小鼠造成的學(xué)習(xí)記憶缺陷,并且呈現(xiàn)劑量效應(yīng),具體表現(xiàn)在:逃避潛伏期顯著縮短(p0.01),穿越平臺次數(shù)和目標象限停留時間百分比顯著增加(p0.05),小鼠的游泳模式得到改善。同時,小鼠腦組織病理學(xué)結(jié)果顯示,NHE能改善東莨菪堿引起的小鼠腦組織的異常變化,增加神經(jīng)元細胞數(shù)量,減少固化萎縮狀態(tài)細胞數(shù)量,使得細胞排列趨于緊密。(4)Elisa試劑盒和Western blot技術(shù)檢測結(jié)果顯示,NHE的干預(yù)能逆轉(zhuǎn)東莨菪堿引起的腦部氧化應(yīng)激,能降低丙二醛(MDA)含量(P0.01),提高超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力(P0.01);NHE的干預(yù)能恢復(fù)東莨菪堿造成的膽堿能損傷,增加小鼠腦組織海馬和皮質(zhì)中乙酰膽堿(ACh)含量(P0.01),降低AChE活性(P0.01);NHE的干預(yù)能減輕東莨菪堿造成的突觸可塑性損傷,增加大腦海馬和皮質(zhì)中細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)和環(huán)磷腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)的磷酸化水平(P0.01),同時增加腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的表達(P0.01)。綜上,體外抑制AChE活性實驗和體內(nèi)東莨菪堿誘導(dǎo)的記憶力障礙AD小鼠模型的結(jié)果表明,NHE具備預(yù)防AD的潛力,具體機制涉及:改善腦部氧化應(yīng)激、平衡膽堿能系統(tǒng)、激活ERK-CREB-BDNF信號通路,并且其作用與酚類化合物密切相關(guān),可能是多種酚類化合物共同作用的結(jié)果。本文為香水蓮花提取物改善記憶力、預(yù)防阿爾茲海默癥等方面產(chǎn)品的開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。
【圖文】：

Ｆｉｇ．邋１．１邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ邋ｎｅｕｒａｌ邋ｓｉｇｎａｌ邋ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ逡逑ＡＴ在ＡＣｈ合成中具有重要作用，但其不是ＡＣｈ合成的限ＡＣｈ合成影響較小，而ＡＣｈＥ則是分解ＡＣｈ的關(guān)鍵酶，Ａ腦內(nèi)ＡＣｈ含量造成較大的影響１９】。因此，乙酰膽堿酯ｉｎｅｓｔｅｒａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，邋ＡＣｈＥＩ）可以通過抑制邋ＡＣｈＥ邋活性，減少海馬和皮層ＡＣｈ含量，從而起到改善認知的作用％。ＡＣｈ患者認知障礙的最有效手段。逡逑性假說逡逑假說認為Ｐ－淀粉樣蛋白（ａｍｙｌｏｉｄＰ＿ｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＰ）的產(chǎn)生與降聚集沉積，從而引發(fā)了阿爾茲海默癥ＡＰ是在Ｐ－和Ｙ－解淀粉樣前體蛋白（Ｐ－ａｍｙｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ，邋ＡＰＰ）生成酶切割，產(chǎn)生稱為Ｃ９９的膜結(jié)合Ｃ－末端片段，接著Ｙ－分泌Ｐ，之后ＡＰ多肽又經(jīng)歷了由單體到寡聚物，然后再形成原纖

邋ＥＲＫ－ＣＲＥＢ－ＢＤＮＦ信號通路與阿爾茲海默癥逡逑多年來，，研究認為ＡＤ的發(fā)病機制由兩個主要的神經(jīng)病理學(xué)標志所主導(dǎo)：淀逡逑斑塊和神經(jīng)原纖維纏結(jié)。但是，與兩者相關(guān)的治療藥物在臨床試驗中均以失逡逑終，因此迫切需要尋求新的治療策略。研究表明，ＡＤ患者大腦中對記憶至逡逑要的區(qū)域存在突觸可塑性異常的現(xiàn)象。尤其是在對學(xué)習(xí)和記憶非常重要的逡逑和皮質(zhì)區(qū)域，ＡＤ的病理改變嚴重影響記憶相關(guān)的神經(jīng)回路，引起突觸可塑逡逑生改變，參與正�？伤苄缘脑S多機制失調(diào)，導(dǎo)致突觸功能障礙和突觸喪失，逡逑觸功能與認知功能具有很強的相關(guān)性｜５８１。因此，越來越多的研究者將研究逡逑轉(zhuǎn)向了導(dǎo)致ＡＤ患者腦內(nèi)突觸功能障礙的分子機制１５９１，尋找預(yù)防和治療ＡＤ逡逑效作用靶點。其中，ＥＲＫ－ＣＲＥＢ－ＢＤＮＦ信號通路相關(guān)的蛋白作為影響學(xué)習(xí)逡逑和突觸可塑性的關(guān)鍵分子而受到關(guān)注。逡逑Ｐｈ川ｉｐｓＨＳ等人早期研究發(fā)現(xiàn)，ＡＤ患者海馬中ＢＤＮＦｍＲＮＡ的轉(zhuǎn)錄程度逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R749.16

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號：2681698